癌细胞粘附性提高剂的制作方法
【专利摘要】本发明的含有下述通式（1）所示的结构单元的聚合物通过应用于癌细胞富集过滤器的表面，可以提高癌细胞对过滤器表面的粘附性，提高癌细胞的富集率，因此是有用的。通式（1）中，R1为氢原子或甲基，R2为甲基或乙基，m为1～3。
【专利说明】癌细胞粘附性提高剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及癌细胞粘附性提高剂。更详细地说涉及癌细胞粘附性提高剂、癌细胞富集过滤器及癌细胞的检查方法。
【背景技术】
[0002]癌细胞富集的研究意义和临床意义极大，若能够对血液中的癌细胞进行富集，则可以应用于癌症的诊断。例如，癌症的预后和治疗的最重要的因素是初诊时和处置时有无癌细胞的转移。癌细胞的初期扩散涉及到末梢血中时，对血中循环肿瘤细胞(CirculatingTumor Cell,以下根据情况称作“CTC”)进行检测是判断癌症的病情进展的有用手段。
[0003]但是，在为转移已经开始了的一般的癌症患者的情况下，相对于血液中每100亿个血细胞，CTC只不过存在约I个左右。与其相对，红细胞或白细胞等血液成分在血液中压倒性地大量存在。因此，对极低浓度的CTC进行富集、并以高灵敏度、高效率及高特异性进行解析是非常困难的。例如，在通过使用了磁珠、密度梯度离心分离、微流路、流式细胞仪的方法对CTC进行富集时，不仅需要复杂的处理，而且有时回收率很差。
[0004]作为对CTC进行分离和富集的其他技术，提出了使用聚碳酸酯过滤器的方法(例如参照非专利文献I及2)。另外，还提出了利用尺寸的差异对CTC进行分离和富集的技术(例如参照非专利文献3?5及专利文献I)。
[0005]然而，已知当血液与人工心肺等医疗用材料表面接触时，会产生因补体系统的活化或血小板的活化所诱发的血栓形成或溶血等副作用。为了解决该问题，有报告指出利用规定的化合物覆盖医疗用材料表面是有效的(例如参照专利文献2)。
[0006]现有技术文献
[0007]专利文献
[0008]专利文献1:美国专利申请公开第2001/0019029号说明书
[0009]专利文献2:国际公开第2004/087228号
[0010]非专利文献
[0011]非专利文献 I:Vona G, et al.，“Enrichment, immunomorphological, and geneticcharacterization of fetal cells circulating in maternal blood，，, Am J Pathol.160
(1):51-8 (2002)
[0012]非专利文献 2:Kahn HJ, et al., “Enumeration of circulating tumor cellsin the blood of breast cancer patients after filtration enrichment:correlationwith disease stage”，Breast Cancer ResTreat ；86 (3):237-47 (2004)
[0013]非专利文献3:Wilding P, et al.，“Integrated Cell Isolation and PolymeraseChain Reaction Analysis Using Silicon Microfilter Chambers，，，Anal Biochem.257
(2):95-100 (1998)
[0014]非专利文献4:Yuen PK, et al., “Microchip module for blood samplepreparation and nucleic acid amplification reactions，，, Genome Res.11 (3):405-12(2001)
[0015]非专利文献5:Mohamed H，et al.，“Development of a rare cell fractionationdevice -application for cancer detection.”，IEEE Trans Nanobioscience3 (4):251-6(2004)
【发明内容】
[0016]发明要解决的技术问题
[0017]CTC等癌细胞与血液中的血细胞、例如红细胞、白细胞或血小板等相比，尺寸大一圈。因此，理论上来说，可以适用机械过滤法将这些血细胞成分除去以对癌细胞进行富集。
[0018]但是，非专利文献I及2的膜滤器由于含有随机分布的孔，孔径不均，因此有时癌细胞的回收率很差。另外，即便是非专利文献3~5及专利文献I的孔径或厚度得以准确控制的过滤器，有时也难以以可准确解析的精度对癌细胞进行富集。
[0019]本发明鉴于上述问题而作出，其目的在于提供能够提高癌细胞的粘附性的癌细胞粘附性提高剂。本发明的目的还在于提供表面被上述癌细胞粘附性提高剂覆盖的癌细胞富集过滤器。此外，本发明的目的还在于提供包含用上述癌细胞富集过滤器来过滤末梢血的工序的癌细胞的检查方法。
[0020]用于解决技术问题的手段 [0021]以往，当血液与人工心肺等医疗用材料表面接触时，会产生因补体系统的活化或血小板的活化所诱发的血栓形成或溶血等副作用。而且已知，当用含有下述通式(I)所示的结构单元的聚合物覆盖医疗用材料表面时，即便在血液接触的情况下，血细胞成分对医疗用材料表面的粘附性也会降低，从而可抑制血栓形成的诱发或溶血等副作用。将这种抑制血栓形成或溶血的性质称作血液适合性。
[0022]本发明人等意外地首次发现，用含有下述通式(I)所示的结构单元的聚合物覆盖的材料表面在血细胞成分的粘附性降低的同时，癌细胞的粘附性提高，从而完成了本发明。
[0023]即，本发明提供一种癌细胞粘附性提高剂，其由含有下述通式(I)所示的结构单元的聚合物构成。
[0024]
【权利要求】
1.一种癌细胞粘附性提高剂，其由含有下述通式(I)所示的结构单元的聚合物构成，
2.根据权利要求1所述的癌细胞粘附性提高剂，其由聚合物构成，所述聚合物由所述通式(I)所示的结构单元构成。
3.根据权利要求1或2所述的癌细胞粘附性提高剂，其中，R1为氢原子，R2为甲基，m为I。
4.根据权利要求1或2所述的癌细胞粘附性提高剂，其中，R1为氢原子，R2为乙基，m为2。
5.根据权利要求1或2所述的癌细胞粘附性提高剂，其中，R1为甲基，R2为甲基，m为2。
6.根据权利要求1~5任一项所述的癌细胞粘附性提高剂，其数均分子量为10，000~300，000。
7.一种癌细胞富集过滤器，其由形成有多个贯通孔的基板构成，所述基板的至少一部分被权利要求1~6任一项所述的癌细胞粘附性提高剂覆盖。
8.根据权利要求7所述的癌细胞富集过滤器，其中，所述贯通孔的平均孔径为5μπι以上且小于30 μ m，平均开口率为5%以上且小于50%。
9.根据权利要求7或8所述的癌细胞富集过滤器，其中，所述基板由金属构成。
10.根据权利要求9所述的癌细胞富集过滤器，其中，所述金属选自铜、镍、铜及镍的合金以及表面经过镀金的铜、镍、铜及镍的合金。
11.根据权利要求9或10所述的癌细胞富集过滤器，其中，所述贯通孔是通过电铸法形成的。
12.—种检测癌细胞存在的方法，其包含用权利要求7~11任一项所述的癌细胞富集过滤器来过滤末梢血的过滤工序。
13.根据权利要求12所述的方法，其还包含对通过所述过滤工序富集的细胞的基因进行解析的工序。
14.根据权利要求12或13所述的方法，其还包含对通过所述过滤工序富集的细胞进行培养的工序。
【文档编号】G01N33/48GK103635801SQ201280029309
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2012年6月11日 优先权日:2011年6月13日
【发明者】上原寿茂, 田中贤, 八木理美, 干场隆志, 二阶堂万叶, 佐藤一博, 佐藤千香子 申请人:日立化成株式会社, 国立大学法人山形大学