一种化学药物有关物质的检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种化学原料药及其制剂中有关物质的检测方法，作为化学原料药，有关物质主要包括起始原料、工艺杂质和降解杂质，该检测方法包括对以上杂质的定性及定量测定。本发明为该原料药及其制剂提供了一套可靠、稳定、全新的有关物质检测方法，使该原料药的合成及其制剂的工艺控制更加严格合理，质量更加稳定，为患者用药的有效性、安全性提供了保障。
【专利说明】一种化学药物有关物质的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明是一种化学药物奥拉西坦中有关物质的检测方法，属于药物的【技术领域】。【背景技术】
[0002]奥拉西坦由意大利史克比切姆公司于1974年首次合成，该药是一类能促进学习记忆能力的新型中枢神经系统药物，能选择性的作用于大脑皮层和海马，激活、保护或促进神经细胞的功能恢复，而本身无直接血管活性，也无中枢兴奋作用，对学习记忆能力的改善是一种持久的促进作用。奥拉西坦仅作用于中枢神经系统，能改善脑代，增强和促进青少年智力，改善老年大脑功能不全和记忆力障碍，治疗神经官能症和精神行为紊乱，尤其是老年痴呆症，是美国FDA批准的用于治疗老年痴呆的药物之一。也可用于脑外伤、脑炎等脑部疾病的康复治疗。
[0003]奥拉西坦剂型较多，如常用的注射液适用于脑损伤及引起的神经功能缺失、记忆与智能障碍等症的治疗，对高血压脑出血患者、中、重型颅脑损伤患者、轻、中度阿尔茨海默病、痴呆症、儿童脑瘫患者及慢性精神分裂症患者均有一定的疗效。对照实验结果显示，奥拉西坦疗效优于同类益智药吡拉西坦。且奥拉西坦毒性极低，有极好的耐受性以及具有吡拉西坦所没有的抗凝血酶III的作用，具有极其广阔的应用前景。
[0004]无论是化学原料药还是药物制剂，都必须要在保证产品质量稳定可控的基础之上，才能不断的更新发展。化学药物在起始原料、工艺合成、制剂及存放的过程中都可能带入或产生新的有机杂质，因此找到方法简便、专属性强、重现性好、准确度高的检验方法，确保药物在任何途径下产生的杂质都能被准确检出，才能保证人民的用药安全，对企业和检验部门来说，也是非常理想的选择。化学药品，其杂质主要包括起始原料、工艺杂质、降解杂质。为了确保产品质量，要将任何途径产生的杂质都一一检出，需要客观有效的检测方法。奥拉西坦的起始原料甘氨酰胺，在生产的过程中可能带入最终的产品当中，奥拉西坦的降解杂质是酰胺键水解后产生的奥拉西坦酸，在生产过程中和贮藏过程中容易产生。
[0005]目前奥拉西坦的有关物质检测方法，主要是对奥拉西坦产品当中所检测出来的杂质进行了总量控制，并未对单个杂质进行定性、定量的分析。本发明提供了一种检测方法，针对可能被带入奥拉西坦终产品中的起始原料甘氨酰胺，及其奥拉西坦的降解产物奥拉西坦酸进行了定性及定量分析，并进行了系统的方法学验证。
【发明内容】
[0006]本发明的目的在于:提供一种化学药物有关物质的检测方法，这种方法针对如下产品向相关的生产、检测机构提供检测的指标、检测的手段、技术方法等，以便更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地，所针的对产品为奥拉西坦原料及其制剂。
[0007]本发明是这样构成的:采用高效液相色谱法检测化学药物奥拉西坦中的有关物质甘氨酰胺和奥拉西坦酸。用十八烷基键合硅胶为填充剂；酸性NaH2PO4.2H20溶液为流动相；主成分自身对照法或者标准曲线法进行定量。采用的检测波长205nm-215nm，优选为210nm。所述的流动相酸性NaH2PO4.2H20溶液(pH2.5-4.0)浓度为0.01-0.02M，优选为0.02M NaH2PO4.2H20 (pH2.8-3.5)。所述的流动相流速为0.4-0.6ml/min。采用的色谱柱柱温 25-40°C。
[0008]进一步说，测试方法如下:照高效液相色谱法，用十八烷基键合硅胶为填充剂；0.01-0.02M NaH2PO4.2Η20 (ρΗ2.5-4.0)为流动相；检测波长 210±5nm ;柱温 25-40°C ;流量0.4-0.6ml/min ;精密称取奥担西坦原料药或制剂适量(相当于奥拉西坦36mg)，加去离子水溶解并稀释至每Iml含奥拉西坦3.6mg的溶液，作为供试品溶液。将供试品溶液稀释1000倍，作为对照溶液。再精密量取供试溶液及对照溶液各10-20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法或者标准曲线法进行定量检测。
[0009]具体测试方法如下:照高效液相色谱法，用十八烷基键合硅胶为填充剂；
0.01-0.02Μ NaH2PO4.2Η20 (ρΗ2.5-4.0)为流动相；检测波长 210±5nm ;柱温 25-40°C ;流量0.4-0.6ml/min ;精密称取奥担西坦原料药或制剂适量(相当于奥拉西坦36mg)，置10ml量瓶中，加去离子水溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。精密量取lml，置100 ml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10 ml量瓶中，加去离子水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。取对照溶液20 μ 1，注入高效液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分峰高为满量程的10%，再精密量取供试品溶液和对照溶液各20 μ I，注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍以上。采用主成分自身对照法或者标准曲线法进行定量检测。
[0010]本 申请人:经过大量实验研究，所提供的方法适合本产品的检测方法。比如柱温的选择:采用柱温20°c进行检测，柱温偏低，柱压较高，得到峰型不理想；采用柱温50°C进行检测时，色谱峰保留时间较短，造成色谱峰分离度达不到要求，因此，柱温在20°C和50°C时都达不到检测要求。比如流动相流速的选择:采用流量0.3ml/min进行检测，流速减慢，色谱峰保留时间较长，峰型严重拖尾；采用流动相流速为0.7ml/min进行检测时，色谱峰保留时间较短，造成色谱峰分离度达不到要求，因此，流量在0.3ml/min和0.7ml/min时都达不到检测要求。
[0011]实验例有关物质检验的方法研究
本品作为原料药，杂质主要包括起始原料、工艺杂质和降解杂质。针对奥拉西坦的有关物质，我们建立了有效的检测方法，并进行全面的方法学验证。
[0012]1、色谱条件的拟定
检测波长确定:采用紫外分光光度计对奥拉西坦及其所含杂质奥拉西坦酸、甘氨酰胺及4-氯-3-羟基-丁酸乙酯在190-400 nm之间进行了紫外光谱扫描，结果显示最大吸收在190nm至200nm。考虑到末端吸收干扰较多,选定210 nm作为检测波长。
[0013]另外考虑到4-氯-3-羟基-丁酸乙酯的极性较小，本实验选择甲醇-水(40:60)为流动相，柱温30 1:，流速为0.6 ml/min。在此条件下，4-氯-3-羟基-丁酸乙酯与奥拉西坦主峰分离度较优，分离比较完全。
[0014]下面分别对两种检测条件进行方法学验证。
[0015]2、方法学验证2.1杂质奥拉西坦酸、甘氨酰胺的检测 2.1.1色谱条件
流动相:0.02 M NaH2P04 2H20 (pH 3.0)
流速:0.5 ml/min 柱温:30 °C。
[0016]2.1.2专属性考察 奥拉西坦、甘氨酰胺、奥拉西坦酸分离度
取奥拉西坦、甘氨酰胺、奥拉西坦酸各适量，用去离子水溶解并稀释制成混合溶液，取20 μ 1，注入高效液相色谱仪，结果显示各峰之间的分离度均符合要求。
[0017]2.1.3最低检测限和最小定量限
参照中国药典2010版二部附录XIX A检测限下的信噪比法进行测定。精密称取奥拉西坦、甘氨酰胺、奥拉西坦酸标准品，用去离子水溶解并逐级稀释，量取待测溶液20 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录峰高，取信噪比为10的浓度为最小定量限，信噪比为3的浓度为最小检测限。测得结果为:奥拉西坦最小检测限为3.4 ng，最小定量限为6.8 ng;奥拉西坦酸最小检测限1.2 ng，最小定量限为2.6 ng;甘氨酰胺最小检测限为7 ng，最小定量限为14ng。
[0018]2.1.4线性关系
精密称取奥拉西坦酸8.0 mg,去离子水定容到50 ml容量瓶中，得到0.16mg/ml的对照品母液。分别配制 48 μ g/ml>32 μ g/ml、24 μ g/ml> 14.4 μ g/ml> 12 μ g/ml>7.92 μ g/ml,4.75 μg/mlU.6 μ g/ml的奥拉西坦酸对照品溶液。分别吸取20 μ 1，注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)，进样浓度为横坐标(X)，得到线性回归方程为:Υ=33.92 X - 2.807，相关系数r = 0.9997，结果表明在1.6 μ g/ml-48 μ g/ml浓度范围内有良好的线性关系，具体数据见表1。
[0019]表1奥拉西坦酸线性关系数据
【权利要求】
1.一种化学药物奥拉西坦中有关物质的检测方法，其特征在于:采用高效液相色谱法，以十八烷基键合硅胶为填充剂；酸性NaH2PO4.2Η20溶液为流动相；标准曲线法或者主成分自身对照法进行定量。
2.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:采用的检测波长为205-215nm。
3.按照要求2所述的检测方法，其特征在于:采用的检测波长优选为210nm。
4.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相pH值为2.5-4。
5.按照要求4所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相pH值优选为2.8-3.5。
6.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相浓度为0.01-0.02M。
7.按照要求6所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相浓度优选为0.02M。
8.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:所述的流动相流速为0.4-0.6ml/min。
9.按照要求I所述的检测方法，其特征在于:采用的色谱柱柱温为25-40°C。
【文档编号】G01N30/02GK103969347SQ201310031045
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2013年1月28日 优先权日:2013年1月28日
【发明者】不公告发明人 申请人:北京六盛合医药科技有限公司