专利名称：一种抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法
技术领域：
本发明涉及荧光光谱识别技术，具体的说是一种抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法。
背景技术：
中药五味子是木兰科植物五味子的干燥成熟果实。具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心之功效临床研究发现，五味子能明显降低肝炎患者血清谷丙转氨酶水平，且具有抗癌和抗艾滋病的活性。五味子植物分为五味子属(即北五味子属)和南五味子属2个属。目前对五味子所进行的识别主要是南北五味子的识别，光谱识别方法主要有紫外分光光度法、二阶导数光谱荧光光谱法、红外光谱法等。其中荧光光谱技术具有灵敏度高、选择性强、试样量少等优点，并且五味子中含有具有荧光效应的五味子乙素和安五脂素，成为目前在五味子识别中的优选手段。目前已有的对五味子的光谱识别方法主要是针对南北五味子的识别，而就某一产地的五味子来说，其识别能力显然不够。抚顺辽五味子是辽宁的地道药材，主要分布在辽宁省东部山区，因其皮薄、肉厚、粒大、药用成分高、辛甘酸苦咸五味俱全而著称，素有〃辽五味〃之称，国家质检总局于2008年正式批准对抚顺辽五味子实施国家地理标志产品保护，其保护范围为辽宁省抚顺市新宾满族自治县、清原满族自治县、抚顺县、顺城区、望花区、经济开发区等7个县区现辖行政区域，由于不同产地的五味子在化学成分的组成、含量及药效等方面存在一定差异，而目前尚无法对抚顺辽五味子进行单独识别，而且缺少对抚顺辽五味子的质量控制手段。
发明内容
本发明的目的是提供一种抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法，从原产地各异的五味子中将受地理标志产品保护的抚顺辽五味子鉴别出来，增强对抚顺辽五味子的保护。本发明的目的是这样实现的:一种抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法，包括如下步骤:
A:建立抚顺辽五味子二维相关同步荧光图谱，
A-1:取抚顺辽五味子果实适量，制成均匀粉末，将所述粉末与无水乙醇按质量体积比为1: 350-400的比例混合并进行超声处理，静置后离心，取上清液用0.45 μ m滤膜过滤，弃初滤液，取续滤液作为分析溶液，所得分析溶液以荧光光谱仪进行三维扫描，获得三维荧光图谱；
A-2:所得三维荧光图谱以数据文件的ASCII格式导出，得到三维荧光光谱原始数据，从所得到的三维荧光光谱原始数据中提取出不同波长间隔的发射波长和激发波长的恒波长同步荧光信号数据，利用所述同步荧光信号数据获取有关发射波长和激发波长间不同波长间隔扰动的同步动态光谱；
A-3:将所述同步动态光谱通过2Dshige软件,软件动态光谱设置为平均,contour参数为8，绘制抚顺辽五味子二维相关同步荧光图谱；
B:建立原产地未知的五味子二维相关同步荧光图谱:依照所述步骤Α-1、Α-2、Α-3给出的方法建立原产地未知的五味子二维相关同步荧光图谱，将所获取的原产地未知的五味子二维相关同步荧光图谱与所述的抚顺辽五味子二维相关同步图谱进行比对，以判定该样品是否为原产地抚顺辽五味子。所述步骤A-1中三维扫描的条件为:所得分析溶液置于Icm石英比色池，按如下条件:激发波长λ ex:200-700nm,发射波长λ em:200-800nm,电压:500V，扫描速度:12000nm/min，激发与发射扫描狭缝:5nm，扫描步长:5nm，进行三维荧光图谱扫描，得到三维荧光图
-1'TfeP曰。所述步骤A-1中超声处理的时间为20_40min。所述步骤A-2中发射波长和激发波长的波长间隔依次为:5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、40nm、45nm、50nm、55nm、60nm、65nm、7 Onm > 7 5nm、80nm、85nm、90nm、IOOnm0本发明选择适宜的方法对五味子的荧光光谱数据进行处理，使得经处理得到的抚顺辽五味子的荧光图谱明显区别于其他产地(如吉林、湖北)的五味子经同样处理所得到的荧光图谱，从而能够直观、形象的对作为地理标志产品的抚顺辽五味子与其他非抚顺辽五味子之间做出鉴别，增强了对抚顺辽五味子的保护。
图1是抚顺辽五味子三维荧光图谱。图2是抚顺辽五味子二维相关同步荧光图谱。图3是原产地吉林的五味子二维相关同步荧光图谱。图4是原产地湖北的五味子二维相关同步荧光图谱。图1中EX表示激发波长，EM表示发射波长，图2、图3、图4中横轴和纵轴数值均表示波长(单位:nm)。
具体实施例方式仪器:日立F-7000荧光分光光度计(日立公司)，KQ2200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。实施例1:
A、建立抚顺辽五味子的二维相关同步荧光图谱:
取抚顺辽五味子果实样品10g，制成均匀粉末，称取0.05g粉末加入20ml无水乙醇中，超声处理30min，常温条件下静置冷却后离心，取离心后的上清液以0.45 μ m滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液作为分析溶液，按如下扫描条件进行扫描，获取图1所示的三维荧光图谱:
激发波长 λ ex:200-700nm ；
发射波长 λ em:200-800nm ；
电压:500V ；
扫描速度(SP):12000nm/min ；
激发与发射扫描狭缝:5nm ； 扫描步长:5nm ；
三维荧光图谱用FL Solutions 2.1 for F-7000工作站以数据文件的ASCII (*.TXT)格式导出，获得三维光谱数据，利用Mallab 7.0软件从三维光谱数据中得到发射波长和激发波长的波长间隔依次为 5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、40nm、45nm、50nm、55nm、60nm、65nm、70nm、75nm、80nm、85nm、90nm、IOOnm的不同波长间隔扰动的恒波长同步突光信号数据，利用该不同波长间隔扰动的恒波长同步荧光信号数据获取有关发射波长和激发波长间不同波长间隔扰动的同步动态光谱，将同步动态光谱通过2Dshige version 1.3软件，软件动态光谱设置为平均，contour参数设置为8，绘制生成抚顺辽五味子的二维相关同步荧光图谱，如图2所示。B、建立原产地为吉林、湖北的五味子二维相关同步荧光图谱:
依照步骤A所给出的试验方法及条件，分别绘制原产地为吉林、湖北的各3个批次的五味子的二维相关同步图谱，同一产地的3个批次的二维相关同步图谱几乎完全相同，图3表示原产地为吉林的I个批次的二维相关同步图谱，图4表示原产地为湖北的I个批次的二维相关同步图谱。在实施例1的基础上，分别进行如下3项试验，以证明实施例1结果的可信度及稳定性。(I)精密度试验:取实施例1中的样品连续测定3次，得到同一批次的3个抚顺辽五味子二维相关同步荧光图谱，计算图谱中荧光峰的位置和荧光强度，结果表明其变异系数< 3%，所做出的二维相关同步荧光图谱一致，证明仪器精密度良好。(2)稳定性试验:取实施例1中的分析溶液，分别在0.5h、lh、2h、3h、5h、10h时测定，得到同一批次的6个抚顺辽五味子的二维相关同步荧光图谱，计算图谱中荧光峰的位置和荧光强度，结果表明其变异系数<3%，所做出的二维相关同步荧光图谱一致，表明分析溶液在IOh内稳定。(3)重现性试验:取不同批次的5份样品，按照步骤A给出的方法步骤进行测定，得到不同批次的5个抚顺辽五味子的二维相关同步荧光图谱，计算图谱中荧光峰的位置和荧光强度，结果表明变异系数<3%，所做出的二维相关同步荧光图谱一致，表明本发明具有较好的重现性。结果分析:从所得到的三个二维相关同步荧光图谱(图2、图3、图4)来看，抚顺辽五味子与其他产地(吉林、湖北)的五味子中的自相关峰及交叉峰的出峰个数、位置、正负均存在显著差异，其差别十分明显和直观，从而可以通过二维相关荧光图谱直观、形象的鉴别抚顺辽产地的五味子。本发明所提供的方法是针对抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法，除此之外，该方法还对其他种类的地理标志产品提供了识别与验证的科学依据及技术支持。
权利要求
1.一种抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法，其特征是，包括如下步骤: A:建立抚顺辽五味子二维相关同步荧光图谱； A-1:取抚顺辽五味子果实适量，制成均匀粉末，将所述粉末与无水乙醇按质量体积比为1: 350-400的比例混合并进行超声处理，静置后离心，取上清液用0.45 μ m滤膜过滤，弃初滤液，取续滤液作为分析溶液，所得分析溶液以荧光光谱仪进行三维扫描，获得三维荧光图谱； A-2:所得三维荧光图谱以数据文件的ASCII格式导出，得到三维荧光光谱原始数据，从所得到的三维荧光光谱原始数据中提取出不同波长间隔的发射波长和激发波长的恒波长同步荧光信号数据，利用所述同步荧光信号数据获取有关发射波长和激发波长间不同波长间隔扰动的同步动态光谱； A-3:将所述同步动态光谱通过2Dshige软件,软件动态光谱设置为平均,contour参数为8，绘制抚顺辽五味子二维相关同步荧光图谱； B:建立原产地未知的五味子二维相关同步荧光图谱:依照所述步骤Α-1、Α-2、Α-3给出的方法建立原产地未知的五味子二维相关同步荧光图谱，将所获取的原产地未知的五味子二维相关同步荧光图谱与所述的抚顺辽五味子二维相关同步荧光图谱进行比对，以判定该样品是否为原产地抚顺辽五味子。
2.根据权利要求1所述的抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法，其特征是，所述步骤A-1中三维扫描的条件为:所得分析溶液置于Icm石英比色池，按如下条件:激发波长λ ex:200-700nm,发射波长λ em:200-800nm,电压:500V，扫描速度:12000nm/min，激发与发射扫描狭缝:5nm，扫描步长:5nm，进行三维荧光图谱扫描，得到三维荧光图谱。
3.根据权利要求1所述的抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法，其特征是，所述步骤A-1中超声处理的时间为20-40min。
4.根据权利要求1所述的抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法，其特征是，所述步骤A-2中发射波长和激发波长的波长间隔依次为:5nm、I Onm、15nm、20nm、2 5nm、30nm、3 5nm、40nm、45nm、50nm、55nm、60nm、65nm、70nm、75nm、80nm、85nm、90nm、IOOnm0
全文摘要
本发明公开了一种抚顺辽五味子的荧光光谱鉴别方法，包括如下步骤首先获取抚顺辽五味子的三维荧光图谱，将其以数据文件ASCII格式导出，得到三维荧光光谱原始数据，从中提取出不同波长间隔的发射波长和激发波长的恒波长同步荧光信号数据，依据该数据获取有关发射波长和激发波长间不同波长间隔扰动的同步动态光谱，进而建立抚顺辽五味子二维相关同步荧光图谱；将依照同样方法建立原产地未知的五味子二维相关同步荧光图谱，同抚顺辽五味子的二维相关同步荧光图谱进行比对，以判定该样品是否为抚顺辽五味子。本发明方法能够直观、形象的对作为地理标志产品的抚顺辽五味子及其他非抚顺辽五味子做出鉴别，增强了对抚顺辽五味子的保护。
文档编号G01N21/64GK103115906SQ20131003151
公开日2013年5月22日 申请日期2013年1月28日 优先权日2013年1月28日
发明者陈培云, 李红莲, 赵志磊, 孙汉文, 王献友, 庞艳苹, 李小亭, 田宇斯 申请人:河北大学