专利名称：脑震宁制剂的鉴别方法
技术领域：
本发明涉及脑震宁制剂的鉴别方法，属于中药制剂质量控制技术领域。
背景技术：
脑震宁制剂是依据专利号为ZL 93100741.0的专利公开的处方，制成的用于预防和治疗脑外伤综合征的制剂，可制成冲剂、胶囊、片剂、软胶囊剂型，功能与主治:凉血活血，化瘀通络，益血安神，宁心定智，除烦止呕。用于脑外伤引起的头痛、头晕，烦躁失眠，健忘惊悸，恶心呕吐。为了控制该中药制剂质量，我们对该中药制剂进行了鉴别研究。脑震宁颗粒收录于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂(第十七册)》第230页(标准号:WS3-B-3312-98)，该标准中提出:其处方为:当归200g、地黄200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龙150g、丹参375g、茯苓250g、陈皮250g、竹茹250g、炒酸枣仁250g、柏子仁250g;制法为:以上i^一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35 1.38 (550C )的清膏，加入适量的蔗糖和糊精，用乙醇制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成IOOOg即得；规格为:每袋装10g。其鉴别方法有2个,具体为:
(1)取本品10g，研细，加甲醇30mL，回流提取I小时，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%盐酸溶液20mL使溶解，置沸水浴上回流I小时，放冷，用苯20mL提取，弃去苯液，酸水用5g氯化钠饱和，振摇，用醋酸乙酯提取2次，每次20mL，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品10g，研细，加甲醇30mL，回流提取I小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL,加热使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液提取3次，每次15mL，分取碱液，用盐酸调节pH值至2 3，用苯15mL提取，弃去苯液，再用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-冰醋酸-甲醇(30:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。后来，山西振东安特生物制药有限公司将脑震宁颗粒增加了未添加蔗糖的规格，每袋装6g，国家食品药品监督管理局发布的标准为:国家食品药品监督管理局标准(试行)“脑震宁颗粒”(标准号:YBZ27112005)，每袋含生药量与《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂(第十七册)》第230页收录的“脑震宁颗粒(标准号:WS3-B-3312-98)”相同，鉴别方法也相同。
发明内容
本发明的目的是提供脑震宁制剂的鉴别方法，申请人研制成功了脑震宁片剂、脑震宁胶囊、脑震宁软胶囊等多种制剂，在现有鉴别方法的基础上研制成功了 3项新的鉴别方法，同时对已有的脑震宁颗粒的2项鉴别方法做出了突破性的创新。该方法专属性强，重现性、耐用性好，可用于该中药制剂中的相应药味鉴别。本发明中涉及的炒酸枣仁等同于酸枣仁(炒)。本发明采用的技术方案如下:
脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述的鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者任四种、或者全部:
(1)所述脑震宁制剂中丹参的鉴别方法，是以原儿茶醛对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加盐酸溶液使溶解，用乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇，制成每ImL含生药量相当于丹参I 20g的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取原儿茶醛对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含0.5 2mg的溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各I 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸7 10:0.5 2:0.5 1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑
占.(2)所述脑震宁制剂中当归和川芎的鉴别方法，是以阿魏酸对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水，加热使溶解，放冷，用乙醚或30 60°C石油醚提取，合并乙醚或石油醚液，用碱溶液提取，合并碱液，加酸调节PH值至2 3，用甲苯提取，弃去甲苯液，再用乙醚或30 60°C石油醚提取，合并乙醚或石油醚液，挥干，残渣加甲醇或乙醇制成每ImL含生药量相当于当归I 15g、川芎0.5 IOg的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含0.5 2mg的溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各I 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇20 30:1:1 5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)所述脑震宁制剂中炒酸枣仁的鉴别方法，是以酸枣仁皂苷Α、B对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加50%-100%的乙醇溶液，超声处理，滤过，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水，搅拌均匀，用乙醚或30 60°C石油醚提取，弃去乙醚或石油醚液，水浴蒸去乙醚或石油醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的碱溶液洗涤，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇或乙醇制成每ImL含生药量相当于炒酸枣仁I IOg的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含酸枣仁皂苷A、B对照品各0.2 2mg的溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各I 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷或三氯甲烷-甲醇-水20 30:8 12:2 4下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，立即检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
所述正丁醇饱和的碱溶液是用正丁醇和碱溶液充分振摇，混匀，除去多余的正丁醇，即得正丁醇饱和的碱溶液；其中碱溶液为氨水、碳酸氢钠溶液、氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液中的任一种；
(4)所述脑震宁制剂中牡丹皮的鉴别方法，是以丹皮酚对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水，用中国药典2010年版附录XD挥发油提取装置采用甲法进行提取，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液，用乙醚或30 60°C石油醚萃取，自然挥干，加丙酮使溶解，制成每ImL含生药量相当于牡丹皮2 IOg的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取丹皮酹对照品，加丙酮制成每ImL含0.5 3mg的溶液,作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯2 5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
(5)所述脑震宁制剂中陈皮的鉴别方法，是以橙皮苷对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水，离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于陈皮0.2 IOg的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各I 15 μ L，分别点于同一碱液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水80 120:15 20:10 15为展开剂，展开，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水15 25:8 12:1 12:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。具体地说，所述的鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者任四种、或者全部: (1)所述脑震宁制剂中丹参的鉴别方法，是以原儿茶醛对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或乙醇10 30mL，超声处理10 60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.1% 1%盐酸溶液10 30mL使溶解，用乙酸乙酯提取I 5次，每次10 30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于丹参I IOg的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取原儿茶醛对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含0.5 2mg的溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸7 10:0.5 2:0.5 1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以1% 10%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)所述脑震宁制剂中当归和川芎的鉴别方法，是以阿魏酸对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或乙醇10 30mL，超声处理10 60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 60mL，加热使溶解，放冷，用乙醚或30 60°C石油醚提取I 5次，每次10 20mL，合并乙醚或石油醚液，用1% 10%碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶液提取I 5次，每次10 20mL，合并碱液，用10%_30%盐酸或5% 20%硫酸调节pH值至2 3，用甲苯提取I 5次，每次10 20mL，弃去甲苯液，再用乙醚或30 60°C石油醚提取I 5次，每次10 20mL，合并乙醚或石油醚液，挥干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于当归I 5g、川芎0.5 3g的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含0.5 2mg的溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇20 30:1:1 5为展开剂，展开，取出，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)所述脑震宁制剂中炒酸枣仁的鉴别方法，是以酸枣仁皂苷A、B对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加50% 100%的乙醇溶液50 80mL，超声处理10 60分钟,滤过,水浴蒸去乙醇至无醇味,加水10 30mL,搅拌均勻,用乙醚或30 60°C石油醚提取I 5次，每次10 30mL，弃去乙醚或石油醚液，水浴蒸去乙醚或石油醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取I 6次,每次10 30mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的氨水洗涤I 5次，每次10 30mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤I 5次，每次10 30mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于炒酸枣仁I 5g的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含酸枣仁皂苷A、B对照品各0.2 2mg的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷或三氯甲烷-甲醇-水20 30:8 12:2 4下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1% 5%香草醛硫酸溶液，立即检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)所述脑震宁制剂中牡丹皮的鉴别方法，是以丹皮酚对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水50 300mL，用中国药典2010年版附录XD挥发油提取装置进行提取，采用甲法提取I 3小时，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液10 150mL,用乙醚或30 60°C石油醚萃取I 5次,每次10 30mL,自然挥干，加丙酮使溶解，制成每ImL含生药量相当于牡丹皮2 IOg的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取丹皮酹对照品，加丙酮制成每ImL含0.5 2mg的溶液,作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯2 5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1% 10%三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；
(5)所述脑震宁制剂中陈皮的鉴别方法，是以橙皮苷对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水5 30mL，离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取I 6次，每次2 30mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于陈皮0.2 5g的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L,分别点于同一0.1% 5%氢氧化钠溶液制备的娃胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水80 120:15 20:10 15为展开剂,展开,取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水15 25:8 12:1 12:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1% 5%三氯化铝溶液，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。更进一步地，所述的鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者任四种、或者全部:
(I)所述脑震宁制剂中丹参的鉴别方法，是以原儿茶醛对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或无水乙醇20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%盐酸溶液20mL使溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇或无水乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于丹参2 Sg的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:另取原儿茶醛对照品，加甲醇或无水乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5 10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸8:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以2% 5%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)所述脑震宁制剂中当归和川芎的鉴别方法，是以阿魏酸对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或无水乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL，加热使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液提取3次，每次15mL，合并碱液，用18% 19%盐酸调节pH值至2 3，用甲苯提取2次，每次15mL，弃去甲苯液，再用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇或无水乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于当归I 5g、川芎0.5 3g的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品，加甲醇或无水乙醇制成每ImL含I 2mg的溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5 10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇25:1:3为展开剂，展开，取出，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(3)所述脑震宁制剂中炒酸枣仁的鉴别方法，是以酸枣仁皂苷A、B对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加80%的乙醇溶液60mL，超声处理30分钟，滤过，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水20mL，搅拌均匀，用乙醚提取3次，每次20mL，弃去乙醚液，水浴蒸去乙醚无醚味，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤2次，每次20mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于炒酸枣仁I 5g的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇制成每ImL含酸枣仁皂苷A、B对照品各0.5 Img的溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5 10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水25:10:3下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，立即检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(4)所述脑震宁制剂中牡丹皮的鉴别方法，是以丹皮酚对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水100 200mL，用中国药典2010年版附录XD挥发油提取装置进行提取，采用甲法提取2小时，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液50 70mL，用乙醚萃取2次，每次20mL，自然挥干，加丙酮使溶解，制成每ImL含生药量相当于牡丹皮2 IOg的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取丹皮酹对照品，加丙酮制成每ImL含I 2mg的溶液,作为对照品溶液；③测定法:照中国药典2010年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯3:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点；
(5)所述脑震宁制剂中陈皮的鉴别方法，是以橙皮苷对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤:
①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水20mL，离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于陈皮0.3 2g的溶液，作为供试品溶液；
②对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液；
③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 10 μ L,分别点于同一 0.5% 1%氢氧化钠溶液制备的娃胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水100:17:13为展开剂，展开,取出，晾干,再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水20:10:1 10:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。上述方案中，所述脑震宁制剂是以下列重量份的原料制成:当归8份，地黄8份，牡丹皮6份，川芎6份，地龙6份，丹参15份，茯苓10份，陈皮10份，竹茹10份，炒酸枣仁10份，柏子仁10份；上述十一种药材可制成颗粒、胶囊、片剂、分散片、口服液、软胶囊各种适宜的剂型。进一步地，所述脑震宁制剂是依据国家药品标准WS3-B-3312_98中的处方和制法制得的颗粒、胶囊、片剂、分散片、口服液、软胶囊各种适宜的剂型。或者，所述脑震宁制剂是依据国家药品标准YBZ27112005中的处方和制法制得的颗粒、胶囊、片剂、分散片、口服液、软胶囊各种适宜的剂型。更进一步地，所述脑震宁制剂是国家药品标准WS3-B-3312_98中涉及的脑震宁颗粒，所述脑震宁颗粒是以下列重量份的原料制成:当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375 g，茯苓250 g，陈皮250 g，竹茹250 g，炒酸枣仁250 g，柏子仁250 g;制法是:以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35 1.38 (550`C )的清膏，加入适量的蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成lOOOg，即得。或者，所述脑震宁制剂是国家药品标准YBZ27112005中涉及的脑震宁颗粒，所述脑震宁颗粒是以下列重量份的原料制成:当归333.4g，地黄333.4g，牡丹皮250g,川芎250g,地龙250g,丹参625 g，茯苓416.7 g，陈皮416.7g，竹茹416.7 g，炒酸枣仁416.7 g，柏子仁416.7 g;制法是:以上i^一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35 1.38 (550C )的清膏，以糊精为辅料，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成lOOOg，即得。
本发明提供的脑震宁制剂的鉴别方法，涉及制剂中六种药材的鉴别，有以下优点: (I)丹参的鉴别:是以丹参中所含的原儿茶醛为指标成分的鉴别。本法是对脑震宁颗粒国家药品标准WS3-B-3312-98 (简称“原标准”)中鉴别(I)的改进，通过对脑震宁颗粒中原儿茶醛的提取进行筛选，摸索出了超声替代回流的最佳溶媒量和超声时间，不仅溶媒用量减少、提取时间缩短，而且超声提取效果远远好于回流提取:可以省掉原来苯除杂这一步骤，这样不仅缩短了时间，而且去掉了苯这一毒性试剂，减少污染，还有重要的环保意义。另外，将原标准中展开剂氯仿换为毒性更小、更经济的二氯甲烷，结果显示分离度与氯仿相当，同样减少污染，有重要的环保意义。(2)当归、川芎的鉴别:是以当归、川芎共同具有的化学成分阿魏酸为指标成分的鉴别。本法是对脑震宁颗粒国家药品标准WS3-B-3312-98 (简称“原标准”)中鉴别(2)的改进。首先，通过大量试验，摸索出了超声替代回流的最佳溶媒量和超声时间，对回流提取与超声提取的效果进行了比较，结果显示我们摸索到的超声提取比原标准中的回流提取效果更好，色谱图斑点更清晰稳定，而且溶媒用量少、提取时间短。其次，还对原标准的除杂过程进行了试验研究:分别研究了苯除杂、甲苯除杂、不除杂三种情况，摸索到了甲苯除杂的最佳条件:甲苯提取2次，每次15mL，弃去甲苯液，结果显示我们摸索到的甲苯除杂比原标准中的苯除杂所得的色谱图斑点更清晰稳定，而且甲苯比苯毒性更小，还有重要的环保意义。不除杂的拖尾严重，杂质斑点较多。我们还对原标准中的展开剂进行了研究，摸索到了毒性更小的甲苯替代苯的最佳条件，那就是，展开剂比例调整为:甲苯-冰醋酸-甲醇为20 30:1:1 5。(3)炒酸枣仁的鉴别:是以炒酸枣仁中所含的化学成分酸枣仁皂苷为指标成分的鉴别。该法是创新的鉴别脑震宁制剂中炒酸枣仁的方法:采用了超声处理，并通过醚、醇、碱溶液的多次提取、洗涤，制得供试品溶液。(4)牡丹皮的鉴别:是以牡丹皮中所含的化学成分丹皮酚为指标成分的鉴别。该法是创新的鉴别脑震宁制剂中牡丹皮的方法:用中国药典2010年版附录X D挥发油提取装置进行提取，再用乙醚或石油醚(3(T60°C )萃取制得供试品溶液。(5)陈皮的鉴别:是以陈皮中所含的化学成分橙皮苷为指标成分的鉴别。该法是创新的鉴别脑震宁制剂中陈皮的方法:首先采取离心分离，然后用水饱和的正丁醇提取多次后制得供试品溶液，采用碱溶液制备的硅胶G薄层板，使用了两次展开剂，首先以乙酸乙酯-甲醇-水80 120:15 20:10 15为展开剂,展开至5cm处,取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水15 25:8 12:1 12:1的上层溶液为展开剂,展开至约IOcm处，取出，晾干，最终置于紫外光灯(365nm)下检视，显示荧光斑点。本发明提供的鉴别方法专属性强、重复性好，可用于脑震宁制剂中这六种药材的鉴别。采用该法可有效控制产品质量。下面通过具体实施例来说明本发明，但不局限于以下实施例。
具体实施例方式实施例1:脑震宁颗粒的鉴别方法
根据标准WS3-B-3312-98制备含蔗糖的脑震宁颗粒，用本发明提供的鉴别方法进行鉴别。处方:当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g
制法:以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，虑过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35 1.38 (550C )的清膏，加入适量的蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成lOOOg，即得。鉴别:(1)取本品10g，研细，加甲醇20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%盐酸溶液20mL使溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品10g，研细，加甲醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL,加热使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液提取3次，每次15mL，合并碱液，用18%-19%盐酸调节pH值至2 3，用甲苯提取2次，每次15mL，弃去甲苯液，再用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇(25:1:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(3)取本品10g，研细，加80%的乙醇溶液60mL，超声处理30分钟，滤过，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水20mL，搅拌均匀，用乙醚提取3次，每次20mL，弃去乙醚液，水浴蒸去乙醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤2次，每次20mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷A、B对照品各0.5mg,加甲醇ImL使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(25:10:3)下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，立即检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(4)取本品30g，研细，加水150mL，用中国药典2010年版附录X D挥发油提取装置进行提取，采用甲法提取2小时，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液约60mL，用乙醚萃取2次，每次20mL，自然挥干，加丙酮ImL使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每ImL含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。(5)取本品5g，研细，置具塞锥形瓶中，加水20mL，溶解后离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一 1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)为展开剂，展开至5cm处，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:10:1)的上层溶液为展开剂，展开至约IOcm处，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。实施例2:脑震宁颗粒的鉴别方法
根据实施例1的处方和制法制成脑震宁颗粒，采用以下方法鉴别:
(I)取本品5g，研细，加甲醇15mL，超声处理45分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5%盐酸溶液15mL使溶解，用乙酸乙酯提取5次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以2%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品20g，研细，加甲醇30mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL,加热使溶解，放冷，用石油醚(30 60°C )提取2次，每次20mL，合并乙醚液，用5%碳酸氢钠溶液提取2次，每次20mL，合并碱液，用20%硫酸调节pH值至2 3，用甲苯提取2次，每次15mL，弃去甲苯液，再用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇(20:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(3)取本品5g，研细，加75%的乙醇溶液60mL，超声处理30分钟，滤过，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水20mL，搅拌均匀，用乙醚提取3次，每次20mL，弃去乙醚液，水浴蒸去乙醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取6次，每次15mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤3次，每次15mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次15mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷A、B对照品各lmg，加甲醇ImL使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(25:10:3)下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，立即检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(4)取本品8g，研细，置具塞锥形瓶中，加水30mL，溶解后离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2 μ L，分别点于同一 0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)为展开剂，展开至3cm处，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:1:1)的上层溶液为展开剂，展开至约8cm处，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。实施例3:脑震宁颗粒的鉴别方法
根据标准YBZ27112005制备不含蔗糖的脑震宁颗粒。处方:当归333.4g，地黄333.4g，牡丹皮250g,川芎250g,地龙250g,丹参625g，获茶416.7g,陈皮416.7g,竹苑416.7g,炒酸率仁416.7g,柏子仁416.7g
制法:以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35 1.38 (550C )的清膏，以糊精为辅料，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成lOOOg，即得。鉴别:(I)取本品12g，研细，加无水乙醇20mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5%盐酸溶液15mL使溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加无水乙醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加无水乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以10%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品3g，研细，加甲醇10mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30mL,加热使溶解，放冷，用石油醚(30 60°C )提取2次，每次20mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液20mL提取，得碱液，用18% 19%盐酸调节pH值至2 3，用甲苯提取2次，每次15mL,弃去甲苯液，再用石油醚(30 60°C )提取3次，每次15mL，合并石油醚液，挥干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇(25:1:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。实施例4:脑震宁胶囊的鉴别方法
处方:当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g
制法:当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用80%的乙醇醇沉2次，浓缩成稠膏状，加入适量的淀粉混匀、制粒、干燥整粒、加入所得挥发油，搅拌均匀，制得脑震宁胶囊200粒，每粒胶囊装0.4g。鉴别:取本品内容物lg，研细，置具塞锥形瓶中，加水10mL，混匀后离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取5次，每次5mL，合并正丁醇液，蒸干,残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一 1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)为展开剂，展开至3cm处，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:10:1)的上层溶液为展开剂，展开至约8cm处，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。实施例5:脑震宁片剂的鉴别方法
处方:当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g
制法:上述十一味，当归、牡丹皮、川弯、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用70%的乙醇醇沉2次，浓缩成稠膏状，加入适量的淀粉、羧甲基淀粉钠混匀、制粒、干燥整粒、再加入所得挥发油，混匀后，压片。制得脑震宁片200片，每片重0.5g。鉴别:取本品12g，研细，加水300mL，用中国药典2010年版附录X D挥发油提取装置进行提取，采用甲法提取I小时，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液65 70mL，加石油醚(30 60°C) 30mL萃取，自然挥干，加丙酮2mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加丙酮制成每ImL含Img的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2 u L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%三氯化铁乙醇溶液，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。实施例6:脑震宁软胶囊的鉴别方法
处方:当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g
制法:当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用70%的乙醇醇沉2次，再浓缩成粘稠状，以滴制法制得脑震宁软胶囊200粒，每粒重0.5g。鉴别:取本品lg，研匀，加水50mL，用中国药典2010年版附录X D挥发油提取装置进行提取，采用甲法提取I小时，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液10 15mL，用乙醚萃取5次，每次10mL，自然挥干，加丙酮0.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，力口丙酮制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15 y L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液，晾干，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。实施例7:脑震宁分散片的鉴别方法
处方:当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g
制法:当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用70%的乙醇醇沉2次，浓缩成稠膏状，加入适量的羧甲基淀粉钠、微晶纤维素、微粉硅胶、用乙醇制粒、干燥、整粒、再加入所得挥发油，混匀后，压片。制得脑震宁分散片200片，每片重
0.65g0鉴别:取本品内容物1.5g，研细，置具塞锥形瓶中，加水20mL，混匀后离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取3次，每次10mL，合并正丁醇液，蒸干,残渣加甲醇1.5mL使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各IOiiL,分别点于同一 1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)为展开剂，展开至4cm处，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:10:1)的上层溶液为展开剂，展开至约IOcm处，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。实施例8:脑震宁口服液的鉴别方法
处方:当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g
制法:当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用70%的乙醇醇沉2次，加入蜂蜜、聚山梨酯80、苯甲酸钠适量，用枸椽酸调节pH值至4.5 5.5，搅匀，滤过，得脑震宁口服液1000mL，5mL/支。鉴别:(I)取本品7.5mL,加甲醇25mL，摇匀蒸干，残渣加水50mL，加热使溶解，放冷，用石油醚(30 60°C )提取3次，每次15mL，合并乙醚液，用3%碳酸氢钠溶液提取2次，每次20mL，合并碱液，用18%盐酸调节pH值至2 3，用甲苯提取2次，每次15mL，弃去甲苯液，再用乙醚提取4次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 u L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇(20:1:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(2)取本品10mL，加70%的乙醇溶液70mL，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水20mL，搅拌均匀，用乙醚提取4次，每次15mL，弃去乙醚液，水浴蒸去乙醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取5次，每次15mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤3次，每次15mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次15mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加乙醇ImL使溶解，作为供试品溶液。另取酸枣仁皂苷A、B对照品各lmg，加乙醇1.5mL使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(28:11:3)下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，立即检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。实施例9:
取实施例1制备的脑震宁颗粒进行方法学验证。( I)丹参鉴别的方法学验证:
供试品溶液的制备:取本品10g，研细，加甲醇20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%盐酸溶液20mL使溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备:取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。阴性对照溶液的制备:按脑震宁颗粒处方比例及工艺制备缺丹参的阴性对照样品，取阴性对照样品10g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。测定法:照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液、三批不同批次的脑震宁颗粒供试品溶液、阴性对照溶液各10 iiL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以5%三氯化铁乙醇溶液。
试验结果:三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示斑点。结论:该方法专属性强、重复性好，可用于脑震宁颗粒中丹参的鉴别。(2)当归、川芎鉴别的方法学验证:
供试品溶液的制备:取本品10g，研细，加甲醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL，加热使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液提取3次，每次15mL，合并碱液，用稀盐酸(1:1)调节pH值至2 3，用甲苯提取2次，每次15mL，弃去甲苯液，再用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液。阴性对照溶液I的制备:按脑震宁颗粒处方比例及工艺制备缺当归、川芎的阴性对照样品，取阴性对照样品10g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液I。阴性对照溶液2的制备:按脑震宁颗粒处方比例及工艺制备缺当归的阴性对照样品，取阴性对照样品10g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液2。阴性对照溶液3的制备:按脑震宁颗粒处方比例及工艺制备缺川芎的阴性对照样品，取阴性对照样品10g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液3。测定法:照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液、三批不同批次的脑震宁颗粒供试品溶液、阴性对照溶液1、阴性对照溶液2、阴性对照溶液3各10 y L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇(25:1:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。试验结果:三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；而阴性对照I色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示荧光斑点；阴性对照2、阴性对照3色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，也显相同颜色的荧光斑点。结论:该方法具有专属性，重复性好，可用于脑震宁颗粒中当归、川芎的鉴别。(3)炒酸枣仁鉴别的方法学验证:
供试品溶液的制备:取本品10g，研细，加80%的乙醇溶液60mL，超声处理30分钟，滤过，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水20mL，搅拌均匀，用乙醚提取3次，每次20mL，弃去乙醚液，水浴蒸去乙醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤2次，每次20mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备:取酸枣仁皂苷A、B对照品各0.5mg,加甲醇ImL使溶解，作为对照品溶液。阴性对照溶液的制备:按脑震宁颗粒处方比例及工艺制备缺炒酸枣仁的阴性对照样品，取阴性对照样品10g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。测定法:照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液、三批不同批次的脑震宁颗粒供试品溶液、阴性对照溶液各10 yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(25:10:3)下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，立即检视。
试验结果:三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示斑点。结论:该方法专属性强、重复性好，可用于脑震宁颗粒中炒酸枣仁的鉴别。(4)牡丹皮鉴别的方法学验证:
供试品溶液的制备:取本品30g，研细，加水150mL，用中国药典2010年版附录X D挥发油提取装置进行提取，采用甲法提取2小时，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液约60mL，用乙醚萃取2次，每次20mL，自然挥干，加ImL丙酮使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备:取丹皮酚对照品，加丙酮制成每ImL含2mg的溶液，作为对照品溶液。阴性对照溶液的制备:按脑震宁颗粒处方比例及工艺制备缺牡丹皮的阴性对照样品，取阴性对照样品30g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。测定法:照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液、三批不同批次的脑震宁颗粒供试品溶液、阴性对照溶液各10 yL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，加热至105°C斑点显色清晰。试验结果:三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示斑点。结论:该方法专属性强、重复性好，可用于脑震宁颗粒中牡丹皮的鉴别。( 5)陈皮鉴别的方法学验证:
供试品溶液的制备:取本品5g，研细，置具塞锥形瓶中，加水20mL，溶解后离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。阴性对照溶液的制备:按脑震宁颗粒处方比例及工艺制备缺牡丹皮的阴性对照样品，取阴性对照样品5g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。测定法:照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取对照品溶液、三批不同批次的脑震宁颗粒供试品溶液、阴性对照溶液各lOyL，分别点于同一 1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)为展开剂，展开至5cm处，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:10:1)的上层溶液为展开剂,展开至约IOcm处，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。试验结果:三批供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示荧光斑点。结论:该方法专属性强、重复性好，可用于脑震宁颗粒中陈皮的鉴别。实施例10:
按照实施例7的方法制备脑震宁分散片，进行方法学验证。 (I)丹参鉴别的方法学验证:
取本品1.0g，研细，加甲醇25mL，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.5%盐酸溶液20mL使溶解，用乙酸乙酯提取2次，每 次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液； 按上述脑震宁分散片处方比例及工艺制备缺丹参的阴性对照样品，取阴性对照样品
1.0g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液；
另取原儿茶醛对照品，加甲醇制成每ImL含1.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各8 UL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以5%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示斑点。该方法专属性强、重复性好，可用于脑震宁分散片中丹参的鉴别。(2)陈皮鉴别的方法学验证:
取本品内容物0.5g，研细，置具塞锥形瓶中，加水10mL，混匀后离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取4次，每次10mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液；
按上述脑震宁分散片处方比例及工艺制备缺陈皮的阴性对照样品，取阴性对照样品
0.5g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各L，分别点于同一 1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)为展开剂，展开至5cm处，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:10:1)的上层溶液为展开剂，展开至约9cm处，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示斑点。该方法专属性强、重复性好，可用于脑震宁分散片中陈皮的鉴别。实施例11:
取实施例3制备的脑震宁颗粒(不含蔗糖)进行方法学验证。炒酸枣仁鉴别的方法学验证:
取本品12g，研细，加70%的乙醇溶液60mL，超声处理30分钟，滤过，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水20mL，搅拌均匀，用乙醚提取3次，每次20mL，弃去乙醚液，水浴蒸去乙醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤3次，每次15mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次15mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇ImL使溶解，作为供试品溶液。按上述脑震宁颗粒处方比例及工艺制备缺炒酸枣仁的阴性对照样品，取阴性对照样品12g，按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液；
另取酸枣仁皂苷A、B对照品各lmg，加甲醇ImL使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各
10UL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(25:10:3)下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，立即检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不显示斑点。
该方法专属性强、重复性好，可用于脑震宁颗粒中炒酸枣仁的鉴别。
权利要求
1.脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述的鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者任四种、或者全部: (1)所述脑震宁制剂中丹参的鉴别方法，是以原儿茶醛对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加盐酸溶液使溶解，用乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇，制成每ImL含生药量相当于丹参I 20g的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取原儿茶醛对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含0.5 2mg的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各I 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸7 10:0.5 2:0.5 1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑占.(2)所述脑震宁制剂中当归和川芎的鉴别方法，是以阿魏酸对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或乙醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水，加热使溶解，放冷，用乙醚或30 60°C石油醚提取，合并乙醚或石油醚液，用碱溶液提取，合并碱 液，加酸调节pH值至2 3，用甲苯提取，弃去甲苯液，再用乙醚或30 60°C石油醚提取，合并乙醚或石油醚液，挥干，残渣加甲醇或乙醇制成每ImL含生药量相当于当归I 15g、川芎0.5 IOg的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含0.5 2mg的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各I 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇20 30:1:1 5为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (3)所述脑震宁制剂中炒酸枣仁的鉴别方法，是以酸枣仁皂苷Α、B对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加50%-100%的乙醇溶液，超声处理，滤过，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水，搅拌均匀，用乙醚或30 60°C石油醚提取，弃去乙醚或石油醚液，水浴蒸去乙醚或石油醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的碱溶液洗涤，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇或乙醇制成每ImL含生药量相当于炒酸枣仁I IOg的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含酸枣仁皂苷A、B对照品各0.2 2mg的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各I 20 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷或三氯甲烷-甲醇-水20 30:8 12:2 4下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，立即检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (4)所述脑震宁制剂中牡丹皮的鉴别方法，是以丹皮酚对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水，用中国药典2010年版附录XD挥发油提取装置采用甲法进行提取，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液，用乙醚或30 60°C石油醚萃取，自然挥干，加丙酮使溶解，制成每ImL含生药量相当于牡丹皮2 IOg的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取丹皮酹对照品，加丙酮制成每ImL含0.5 3mg的溶液,作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯2 5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； (5)所述脑震宁制剂中陈皮的鉴别方法，是以橙皮苷对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水，离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于陈皮0.2 IOg的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各I 15 μ L，分别点于同一碱液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水80 120:15 20:10 15为展开剂，展开，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水15 25:8 12:1 12:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，晾干，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2.根据权利要求1所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述脑震宁制剂是以下列重量份的原料制成:当归8份，地黄8份，牡丹皮6份，川芎6份，地龙6份，丹参15份，茯苓10份，陈皮10份，竹茹10份，炒酸枣仁10份，柏子仁10份；上述十一种药材可制成颗粒、胶囊、片剂、分散片、口服液、软胶囊各种适宜的剂型。
3.根据权利要求2所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述脑震宁制剂是依据国家药品标准WS3-B-3312-98中的处方和制法制得的颗粒、胶囊、片剂、分散片、口服液、软胶囊各种适宜的剂型。
4.根据权利要求2所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述脑震宁制剂是国家药品标准WS3-B-3312-98中涉及的脑震宁颗粒,所述脑震宁颗粒是以下列重量份的原料制成:当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375 g，茯苓250 g，陈皮250 g，竹茹250 g，炒酸枣仁250 g，柏子仁250 g;制法是:以上i^一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35 ·1.38 (55 0C )的清膏，加入适量的蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成lOOOg，即得。
5.根据权利要求2所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述脑震宁制剂是依据国家药品标准YBZ27112005中的处方和制法制得的颗粒、胶囊、片齐U、分散片、口服液、软胶囊各种适宜的剂型。
6.根据权利要求2所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述脑震宁制剂是国家药品标准YBZ27112005中涉及的脑震宁颗粒，所述脑震宁颗粒是以下列重量份的原料制成:当归333.4g，地黄333.4g，牡丹皮250g，川芎250g，地龙250g，丹参625 g，茯苓416.7g，陈皮416.7g，竹茹416.7 g，炒酸枣仁416.7 g，柏子仁416.7 g;制法是:以上i^一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35 1.38 (550C )的清膏，以糊精为辅料，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成lOOOg，即得。
7.根据权利要求1所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述正丁醇饱和的碱溶液是用正丁醇和碱溶液充分振摇，混匀，除去多余的正丁醇，即得正丁醇饱和的碱溶液。
8.根据权利要求7所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述碱溶液为氨水、碳酸氢钠溶液、氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液中的任一种。
9.根据权利要求1 8任一项所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述的鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者任四种、或者全部: (1)所述脑震宁制剂中丹参的鉴别方法，是以原儿茶醛对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑 震宁制剂，加甲醇或乙醇10 30mL，超声处理10 60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.1% 1%盐酸溶液10 30mL使溶解，用乙酸乙酯提取I 5次，每次10 30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于丹参I IOg的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取原儿茶醛对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含0.5 2mg的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸7 10:0.5 2:0.5 1.5为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以1% 10%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2)所述脑震宁制剂中当归和川芎的鉴别方法，是以阿魏酸对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或乙醇10 30mL，超声处理10 60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30 60mL，加热使溶解，放冷，用乙醚或30 60°C石油醚提取I 5次，每次10 20mL，合并乙醚或石油醚液，用1% 10%碳酸钠溶液或碳酸氢钠溶液提取I 5次，每次10 20mL，合并碱液，用10%_30%盐酸或5% 20%硫酸调节pH值至2 3，用甲苯提取I 5次，每次10 20mL，弃去甲苯液，再用乙醚或30 60°C石油醚提取I 5次，每次10 20mL，合并乙醚或石油醚液，挥干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，制成每1mL含生药量相当于当归1 5g、川芎0.5 3g的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品，加甲醇或乙醇制成每1mL含0.5 2mg的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇20 30:1:1 5为展开剂，展开，取出，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (3)所述脑震宁制剂中炒酸枣仁的鉴别方法，是以酸枣仁皂苷A、B对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加50% 100%的乙醇溶液50 80mL，超声处理10 60分钟,滤过,水浴蒸去乙醇至无醇味,加水10 30mL,搅拌均勻,用乙醚或30 60°C石油醚提取1 5次，每次10 30mL，弃去乙醚或石油醚液，水浴蒸去乙醚或石油醚至无醚味，用水饱和的正丁醇提取1 6次,每次10 30mL,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的氨水洗涤1 5次，每次10 30mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤1 5次，每次10 30mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，制成每1mL含生药量相当于炒酸枣仁1 5g的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇或乙醇制成每ImL含酸枣仁皂苷A、B对照品各0.2 2mg的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷或三氯甲烷-甲醇-水20 30:8 12:2 4下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1% 5%香草醛硫酸溶液，立即检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (4)所述脑震宁制剂中牡丹皮的鉴别方法，是以丹皮酚对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水50 300mL，用中国药典2010年版附录XD挥发油提取装置进行提取，采用甲法提取1 3小时，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液10 150mL,用乙醚或30 60°C石油醚萃取1 5次，每次10 30mL,自然挥干,加丙酮使溶解，制成每1mL含生药量相当于牡丹皮2 1Og的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取丹皮酹对照品，加丙酮制成每1mL含0.5 2mg的溶液,作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯2 5:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1% 10%三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点； (5)所述脑震宁制剂中陈皮的鉴别方法，是以橙皮苷对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水5 30mL，离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取1 6次，每次2 30mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇或乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于陈皮0.2 5g的溶液，作为供试品溶液；②对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 15μ L,分别点于同一 0.1% 5%氢氧化钠溶液制备的娃胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水80 120:15 20:10 15为展开剂,展开,取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水15 25:8 12:1 12:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1% 5%三氯化铝溶液，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
10.根据权利要求9所述的脑震宁制剂的鉴别方法，其特征在于:所述的鉴别方法包括如下鉴别方法的任一种、或者任两种、或者任三种、或者任四种、或者全部: (1)所述脑震宁制剂中丹参的鉴别方法，是以原儿茶醛对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或无水乙醇20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加0.3%盐酸溶液20mL使溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇或无水乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于丹参2 Sg的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:另取原儿茶醛对照品，加甲醇或无水乙醇制成每ImL含Img的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5 10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮-甲酸8:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，置氨气中熏后，原儿茶醛斑点显黄色，再喷以2% 5%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (2)所述脑震宁制剂中当归和川芎的鉴别方法，是以阿魏酸对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加甲醇或无水乙醇30mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL，加热使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，用2%碳酸钠溶液提取3次，每次15mL，合并碱液，用18% 19%盐酸调节pH值至2 3，用甲苯提取2次，每次15mL，弃去甲苯液，再用乙醚提取3次，每次15mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇或无水乙醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于当归I 5g、川芎0.5 3g的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取阿魏酸对照品，加甲醇或无水乙醇制成每ImL含I 2mg的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5 10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-甲醇25:1:3为展开剂，展开，取出，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点； (3)所述脑震宁制剂中炒酸枣仁的鉴别方法，是以酸枣仁皂苷A、B对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加80%的乙醇溶液60mL，超声处理30分钟，滤过，水浴蒸去乙醇至无醇味，加水20mL，搅拌均匀，用乙醚提取3次，每次20mL，弃去乙醚液，水浴蒸去乙醚无醚味，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨水洗涤2次，每次20mL，正丁醇层再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL，弃去水层，正丁醇层蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于炒酸枣仁I 5g的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取酸枣仁皂苷A、B对照品，加甲醇制成每ImL含酸枣仁皂苷A、B对照品各0.5 Img的溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5 10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水25:10:3下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，立即检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点； (4)所述脑震宁制剂中牡丹皮的鉴别方法，是以丹皮酚对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水100 200mL，用中国药典2010年版附录XD挥发油提取装置进行提取，采用甲法提取2小时，收集由挥发油装置分离出的蒸馏液50 70mL，用乙醚萃取2次，每次20mL，自然挥干，加丙酮使溶解，制成每ImL含生药量相当于牡丹皮2 IOg的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取丹皮酹对照品，加丙酮制成每ImL含I 2mg的溶液,作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯3:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点； (5)所述脑震宁制剂中陈皮的鉴别方法，是以橙皮苷对照品为对照的薄层色谱鉴别方法，包括以下步骤: ①供试品溶液的制备:取脑震宁制剂，加水20mL，离心，取上清液，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成每ImL含生药量相当于陈皮0.3 2g的溶液，作为供试品溶液； ②对照品溶液的制备:取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液； ③测定法:照中国药典2010年版一部附录VIB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各2 10 μ L,分别点于同一 0.5% 1%氢氧化钠溶液制备的娃胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水100:17:13为展开剂，展开,取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水20:10:1 10:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝溶液，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
全文摘要
本发明涉及脑震宁制剂的鉴别方法，属于中药制剂质量控制技术领域。本发明脑震宁制剂包括颗粒、胶囊、片剂、分散片、口服液、软胶囊各种适宜的剂型，创新提出了脑震宁制剂中丹参、当归、川穹、酸枣仁、牡丹皮、陈皮六味药材的薄层色谱鉴别方法，在现有鉴别方法的基础上研制成功了3项新的鉴别方法，同时对已有的脑震宁颗粒的2项鉴别方法做出了突破性的创新。该方法专属性强，重现性、耐用性好，可用于该中药制剂中的相应药味鉴别。
文档编号G01N30/90GK103115996SQ201310046420
公开日2013年5月22日 申请日期2013年2月6日 优先权日2013年2月6日
发明者姚娟娟, 吴月侠, 张玲变, 李新兴, 朱平, 王金生 申请人:山西振东安特生物制药有限公司