专利名称：有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定试纸，属于农药检测领域。
背景技术：
民以食为天，农药使用或滥用的食品安全问题日益加剧，对集贸市场、批发市场、超市、生产基地蔬菜的有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测，实现蔬菜的无公害化，具有重大意义。终端现场，包括家庭、市场、社区等的共同特点是应在较短时间内完成检测，不需要给出量化值，只需了解是否超标即可。此类技术应具有易用性、快速性和足够灵敏度，能进行超标或不超标的判断。急需探索一种操作简便、快速、灵敏度足够高的技术和手段对农药残留测定。目前，按国家标准(GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测)广泛应用的农药残毒速测卡是利用对有机磷和氨基甲酸脂类农药高敏感的胆碱酯酶和显色剂做成的速测卡，不易保存，操作需人工用手捏压，难度大，增加了随机性和不确定性，并且，易受温度影响，检测耗时长。温敏性微胶囊对环境温度变化能智能响应，具有温度敏感性的微胶囊在温度发生变化时，其囊壁会表现为通透性的改变，能够有效控制囊心的负载和释放。
发明内容
本发明目的是克服现有技术的不足，在保持成本低廉的同时提供操作方便、保存时间长、易于推广、提高检测精度、减少检测时间的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测试纸，可以作定性及半定量分析使用。本发明的检测原理是胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯(红色)水解为乙酸与靛酚(蓝色)，有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，胆碱酯酶便失去催化靛酚乙酸酯水解的能力，根据水解、变色过程的颜色改变，可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在，靠目测就可判断农药残留情况，即:蓝色(_)、浅蓝色( + )、白色(+)。本发明的技术方案是利用温敏微胶囊技术制成检测试纸，在特定温度临界区域，释放包裹的胆碱酯酶，催化靛酚乙酸酯水解显色，进而判定农药残留情况。一种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸，包括如下制作步骤:
(I)温敏微胶囊制备
按照2g =IOOmL的比例，配制琼脂糖和0.lmol/L、pH=7.0的磷酸盐缓冲液的混合液，力口入压力锅中加热至0.05KPa，保持15-20min，常压自然冷至37°C，然后滴加20ml、13% NaOH溶液，滴加1.5ml硫酸二甲酚，37°C恒温进行甲基化反应，边搅拌边逐滴加入0.5mol/L的CH3COOH,调节pH至中性pH=7.0，加入一定量的lU/ml的胆碱酯酶，加入已消毒处理的37°C石蜡油，使之分散均匀，放入O°C冰水浴中固化，5000r/min离心除去油相3min，反复3次，油相除净后，得到温敏微胶囊； (2)显色液制备
取0.5 ml,0.2%靛酚乙酸酯母液，加入到50mL、0.lmol/L、pH=7.0的磷酸缓冲液中；
(3)试纸制备
将温敏微胶囊和显色液按1:1比例混合后，涂布在原试纸上，并在室温下风干得到温敏微胶囊涂层，涂层厚度约为100-200 μ m。本发明方法制作的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸的使用按照如下步骤:
(1)选取代表性的蔬菜，去除表面泥土，剪成Icrn左右见方碎片，取5g放入瓶中，加入10ml、约37°C -40°C的蒸馏水或缓冲溶液，震摇50次左右，静置2_5分钟；
(2)每批测定时设一个蒸馏水或缓冲液作为样本提取液的空白对照，以作参照；
(3)取试纸浸入约37°C_40°C的样本提取液中，静止30s-lmin，观察颜色变化；
(4)与空白对照比较，颜色变为天蓝色或与空白对照相同，为阴性结果，白色不变色或略有浅蓝色均为阳性结果，说明农药残留量较高，对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步确定具体农药品种和含量。本发明的有益效果是，一次性使用，价格低廉，不需要专门配制试剂，省去分析仪器的维护工作；使用较人工挤压更简单，结果判定一目了然，无须培训；试剂用量更少，检测时间更短，在Imin内完成；胆碱酯酶受微胶囊保护更稳定，保存时间长；溶液的370C -40°C热环境容易实现，温度控制更方便、精准，不会出现不够湿润和温度太低情况；便于推广，是农贸市场、超市、学校、酒店、工厂等场所快速检测农药残留的首选。
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。图1是温敏微胶囊的DSC升降温热分析曲线。图2是部分农药的检测结果表。
具体实施例方式一种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸，包括如下制作步骤:
(1)温敏微胶囊制备
按照2g =IOOmL的比例，配制琼脂糖和0.lmol/L、pH=7.0的磷酸盐缓冲液的混合液，力口入压力锅中加热至0.05KPa，保持15-20min，常压自然冷至37°C，然后滴加20ml、13% NaOH溶液，滴加1.5ml硫酸二甲酚，37°C恒温进行甲基化反应，边搅拌边逐滴加入0.5mol/L的CH3COOH,调节pH至中性pH=7.0，加入一定量的lU/ml的胆碱酯酶，加入已消毒处理的37°C石蜡油，使之分散均匀，放入O°C冰水浴中固化，5000r/min离心除去油相3min，反复3次，油相除净后，得到温敏微胶囊；
(2)显色液制备
取0.5 ml,0.2%靛酚乙酸酯母液，加入到50mL、0.lmol/L、pH=7.0的磷酸缓冲液中；
(3)试纸制备
将温敏微胶囊和显色液按1:1比例混合后，涂布在原试纸上，并在室温下风干得到温敏微胶囊涂层，涂层厚度约为100-200 μ m。
本发明方法制作的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸的使用按照如下步骤:
(1)选取代表性的蔬菜，去除表面泥土，剪成Icrn左右见方碎片，取5g放入瓶中，加入10ml、约37°C -40°C的蒸馏水或缓冲溶液，震摇50次左右，静置2_5分钟；
(2)每批测定时设一个蒸馏水或缓冲液作为样本提取液的空白对照，以作参照；
(3)取试纸浸入约37°C_40°C的样本提取液中，静止30s-lmin，观察颜色变化；
(4)与空白对照比较，颜色变为天蓝色或与空白对照相同，为阴性结果，白色不变色或略有浅蓝色均为阳性结果，说明农药残留量较高，对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步确定具体农药品种和含量。使用DSC (Pyris Diamond，PERKIN-ELMER)对温敏微胶囊进行量热分析，结果如图1所示，可知升温降温曲线几乎完全相同，相变热变化相同，凝固温度和融化温度分别为23°C和36°C。可知，当使用温度为37°C_40°C，微胶囊壁材发生融化，释放胆碱酯酶，并催化靛酚乙酸酯分解。按本发明所述步骤对部分常用农药实施检测，配制农药的不同浓度标准样液，并喷洒至蔬菜表面，模拟样品进行检测，结果如图2所示，与“GB/T 5009.199-2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测”比较，均达到国标所述的灵敏度要求的检出限，并且全部50份阳性样品，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率达95%。
权利要求
1.一种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸，其特征在于，包括如下制作步骤: (1)温敏微胶囊制备 按照2g =IOOmL的比例，配制琼脂糖和0.lmol/L、pH=7.0的磷酸盐缓冲液的混合液，力口入压力锅中加热至0.05KPa，保持15-20min，常压自然冷至37°C，然后滴加20ml、13% NaOH溶液，滴加1.5ml硫酸二甲酚，37°C恒温进行甲基化反应，边搅拌边逐滴加入0.5mol/L的CH3COOH,调节pH至中性pH=7.0，加入一定量的lU/ml的胆碱酯酶，加入已消毒处理的37°C石蜡油，使之分散均匀，放入O°C冰水浴中固化，5000r/min离心除去油相3min，反复3次，油相除净后，得到温敏微胶囊； (2)显色液制备 取0.5 ml,0.2%靛酚乙酸酯母液，加入到50mL、0.lmol/L、pH=7.0的磷酸缓冲液中； (3)试纸制备 将温敏微胶囊和显色液按1:1比例混合后，涂布在原试纸上，并在室温下风干得到温敏微胶囊涂层，涂层厚度约为100-200 μ m。
2.根据权利要求1所述的一种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸，其特征在于，使用方法按照如下步骤: (1)选取代表性的蔬菜，去除表面泥土，剪成Icm左右见方碎片，取5g放入瓶中，加入10ml、约37°C -40°C的蒸馏水或缓冲溶液，震摇50次左右，静置2_5分钟； (2)每批测定时设一个蒸馏水或缓冲液作为样本提取液的空白对照，以作参照； (3)取试纸浸入约37°C_40°C的样本提取液中，静止30s-lmin，观察颜色变化； (4)与空白对照比较，颜色变为天蓝色或与空白对照相同，为阴性结果，白色不变色或略有浅蓝色均为阳性结果，说明农药残留量较高，对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步确定具体农药品种和含量。
全文摘要
本发明涉及一种有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定试纸。本发明的技术方案是利用温敏微胶囊技术制成检测试纸，在特定温度临界区域，释放包裹的胆碱酯酶，催化靛酚乙酸酯水解显色，进而判定农药残留情况。本发明为一次性使用，价格低廉，不需要专门配制试剂，省去分析仪器的维护工作；使用较人工挤压更简单，结果判定一目了然，无须培训；试剂用量更少，检测时间更短，在1min内完成；胆碱酯酶受微胶囊保护更稳定，保存时间长；溶液的37℃-40℃热环境容易实现，温度控制更方便、精准，不会出现不够湿润和温度太低情况；便于推广，是农贸市场、超市、学校、酒店、工厂等场所快速检测农药残留的首选。
文档编号G01N21/78GK103163131SQ20131011660
公开日2013年6月19日 申请日期2013年4月7日 优先权日2013年4月7日
发明者郑艺华, 刘君 申请人:青岛大学