药物中番泻苷a、番泻苷b的定量检测方法
【专利摘要】本发明涉及药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，所述检测方法采用高效液相色谱法进行检测，包括如下步骤：a.确定色谱条件；b.标准曲线绘制；c.样品含量测定。本发明所采用的定量检测方法分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于含番泻苷A及番泻苷B的药物质量控制。
【专利说明】药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种药物中番泻苷的检测方法，尤其是涉及一种药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法。
【背景技术】
[0002]番湾苷,来源于豆科灌木植物狭叶番湾Cassia angustifolia Vahl或尖叶番湾C.acutifolia Delile的叶。具有清热行滞，通便利水，排毒养颜，具有促进肠胃蠕动致泻的作用。并具一定抗菌功能，临床尚可用于急性胰腺炎、菌痢、流行性出血热、胆囊炎、产后回乳等。目前，市面上销售的通便宁片，主要由番泻叶干膏粉、牵牛子、白豆蘧、砂仁组成。其中番泻叶干膏粉占处方的三分之二，具有宽中理气，泻下通便的作用，用于治疗实热型便秘。因此，通便宁片中的番泻苷含量，是衡量其药效的一个重要指标。
[0003]1996年版的《中华人民共和国卫生部药品标准新药转正标准》第十一册收录了通便宁片的质量标准，其中公开了采用紫外光分光光度法测定其中的番泻总苷。《中国药典》(2005版)第一部附录VD公开了以紫外分光光度法测量番泻苷含量。上述方法虽然能够较好的进行测量，但方法步骤繁杂、操作条件苛刻，在实际中容易出现测量结果偏差大，不利于准确测量。
【发明内容】
[0004]为了解决现有检测技术偏差较大、操作复杂等问题，本发明提供了一种简单高效、精确度高的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法。
[0005]为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下:
[0006]药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，所述检测方法包括如下步骤:
[0007]a.确定色谱条件:
[0008]C18 色谱柱；
[0009]流动相:在IOOOml的乙腈-醋酸-醋酸钠缓冲液(ρΗ3.0-9.0) (I — 10)(20-60:40-80)混合溶液中，(20-60:40-80)表示的为流动相组分的体积比，在下文中出现的该形式的数值也代表了相应的体积比，加入1.25-4.96g四庚基溴化铵为流动相；
[0010]检测波长:240-360nm;
[0011]柱温:25-45°C;
[0012]体积流量:0.8-1.2ml/min;
[0013]进样量:5-30μ1;
[0014]本发明中，优选的色谱条件为:C18色谱柱，优选(依利特)Hypersil ODS C18柱(200mm X 4.Gmm, 5 μ m);
[0015]流动相:在IOOOml的乙腈-醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)(1- 10)(35: 65)混合溶液中，加入2.45g四庚基溴化铵为流动相；本发明采用的流动相选择，是经过发明人经过大量实验得出，如发明人分别对乙腈-1%冰醋酸(17:83)(扫描图谱见图1)、甲醇-质量浓度为0.5%的磷酸(42:58)(扫描图谱见图2)和乙腈-5mmol/l四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH=5.0) (I — 10)(体积比35:65)(扫描图谱见图3)作为流动相比较，在340nm的检测波长、^。(!'柱温、]^〗/!!^]!的体积流量和10 μ I的进样量的条件下,利用Waters600型高效液相色谱仪进行检测，发现以乙腈-5mmol/l四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(ρΗ5.0) (1 — 10) (35:65)为流动相，即在1000ml的乙腈-醋酸-醋酸钠缓冲液(ρΗ5.0)(I — 10) (35:65)的混合液中，加入5mmol的四庚基溴化铵配制而成，能得到分离度和峰型都达到要求的色谱峰。
[0016]检测波长:340nm;发明人将番泻苷A (扫描图谱见图4)和番泻苷B (扫描图谱见图5)在紫外光195~400nm波长范围内进行扫描，在270nm和340nm处有强吸收，但选用波长270nm为紫外检测波长时，样品液相色谱峰杂质较多，引起较大偏差，影响测定结果，因此选择340nm作为检测波长。
[0017]柱温:40°C;
[0018]体积流量:lml/min;
[0019]进样量:10μ1;
[0020]b.番泻苷A、番泻苷B的标准曲线绘制:取经真空干燥12h的番泻苷A及番泻苷B的对照品，在50ml棕色容量瓶中配制成0.2064mg/ml的番泻苷A标准液，在25ml棕色容量瓶配制成0.4048mg/ml的番泻苷B标准液，分别取5ml番泻苷A标准液和5ml番泻苷B标准液，混合均匀，制成混合液，然后分别吸取不同体积的混合液配制成不同浓度，如分别精密吸取番泻苷A和番泻苷B对照品标准液5ml，混合均匀，然后从该混合均匀的番泻苷A和番泻苷B的混合溶液中分别精密吸取lml、lml、2ml、5ml、4ml分别定容与20ml、10ml、10ml、20ml、5ml的容量瓶中。配制成不同浓度的对照品溶液。依次进样10 μ 1，以进样质量为横坐标，峰面积为纵坐标，采用步骤a中色谱条件并利用高效液相色谱仪进行检测(检测结果如表1、表2)，番泻苷A和番泻苷B分别在0.0516~1.032 μ g和0.1012~2.0240 μ g范围内与峰面积有良好的线性关系，将测得上述不同浓度标准液的进样质量和峰面积，通过线性回归得:
[0021]表1番湾苷A进样量与峰面积响应值
[0022]
【权利要求】
1.一种药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行检测，所述检测方法包括如下步骤: a.确定色谱条件: C18色谱柱； 流动相:在1000ml的乙腈-醋酸-醋酸钠缓冲液(pH3.0-9.0)(1 — 10)(20-60:40-80)混合溶液中，加入1.25-4.96g四庚基溴化铵为流动相； 检测波长:240-360nm;
柱温:25-45 0C ; 体积流量:0.8-1.2ml/min; 进样量:5-30 μ I ； b.番泻苷A、番泻苷B的标准曲线绘制:取经真空干燥12h的番泻苷A及番泻苷B的对照品，在50ml棕色容量瓶中配制成0.2064mg/ml的番泻苷A标准液，在25ml棕色容量瓶配制成0.4048mg/ml的番泻苷B标准液，分别取5ml番泻苷A标准液和5ml番泻苷B标准液，混合均匀，制成混合液，然后分别吸取不同体积的混合液配制成不同浓度，采用步骤a中色谱条件并利用高效液相色谱仪进行检测，以进样质量为横坐标，峰面积为纵坐标，将测得上述不同浓度标准液的进样质量和峰面积，通过线性回归得: 番泻苷 A 的线性方程为:Ya=768760Xa — 2437.4(r2=0.9997)； 番泻苷 B 的线性方程为:Yb=751201Xb — 659.67 (r2=0.9999)；` 其中，Ya表示番泻苷A利用高效液相色谱仪进行检测出的峰面积，Yb表示番泻苷A利用高效液相色谱仪进行检测出的峰面积，Xa表示番泻苷A的进样质量，Xb表示番泻苷B的进样质量，r为相关系数； c.样品含量测定:配制样品溶液，采用步骤a中色谱条件并利用高效液相色谱仪对样品溶液进行检测，根据测得峰面积通过b步骤中测得的线性方程分别计算样品中番泻苷A及番泻苷B的质量，然后通过与样品溶液中的样品重量相除分别计算出样品中番泻苷A及番湾苷B的含量。
2.根据权利要求1所述的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于所述a步骤确定的色谱条件为: 流动相:在1000ml的乙腈-醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)(1- 10)(35: 65)混合溶液中，加入2.45g四庚基溴化铵为流动相； 检测波长:340nm; 柱温:40 C ; 体积流量:lml/min; 进样量:10μ1。
3.根据权利要求2所述的药物中番泻苷Α、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于:所述c步骤中的样品溶液配制方法为:将称量好的药物样品加入溶剂中，经超声处理，放冷秤取重量，接着加入所述溶剂补足减失质量，然后经过滤制得样品溶液。
4.根据权利要求3所述的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于:所述c步骤中的样品溶液配制方法为:秤取药物样品0.14g置于容器中，加入25ml质量浓度为0.1%的NaHCO3溶液，称重，然后超声处理15min，放冷称质量，接着用质量浓度为0.1%的NaHCO3溶液补足减失质量，然后用厚度为0.45 μ m的微孔滤膜滤过，制得样品溶液。
5.根据权利要求1-4任一项所述的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于:所述c步骤中配制样品溶液所采用的溶剂为质量浓度为30%甲醇、质量浓度50%甲醇、甲醇-碳酸氢钠溶液和质量浓度0.1%的碳酸氢钠溶液中的一种。
6.根据权利要求5所述的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于:所述流动相中的乙腈为色谱纯乙腈，所述醋酸为分析纯冰醋酸。
7.根据权利要求5所述的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于:所述醋酸钠为分析纯醋酸钠，所述四庚基溴化铵为分析纯四庚基溴化铵。
8.根据权利要求1所述的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于:所述c步骤中配制样品溶液的温度< 80°C。
9.根据权利要求1所述的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于: 所述a步骤中的流动相:在1000ml的乙腈-醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0) (I — 10)(35:65)的混合液中，加入5m mo I的四庚基溴化铵配制而成； 所述 a 步骤中的 C18 色谱柱为 Hypersil ODS C18 柱(200_X4.6mm, 5 μ m)。
10.根据权利要求1所述的药物中番泻苷A、番泻苷B的定量检测方法，其特征在于:所述c步骤中的样品为通便宁`片。
【文档编号】G01N30/88GK103869036SQ201410039039
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年1月26日 优先权日:2014年1月26日
【发明者】胡燕, 卢少欢, 邓祝玲, 刘军, 刘声波 申请人:广州白云山奇星药业有限公司