一种高效液相色谱法测定长春胺有关物质的方法
【专利摘要】本发明涉及一种用HPLC法测定长春胺有关物质的方法，其特征在于选用十八烷基键合硅胶色谱柱，以乙腈-0.1M碳酸铵溶液（7:3）为流动相等度洗脱，检测器为紫外检测器，检测波长为260nm。该方法具有分离度良好，简单快速，专属性强，灵敏度高等特点，可用于长春胺制备过程中可能产生的相关杂质,包括中间体、副产物等有机杂质的检测和质量控制。
【专利说明】一种高效液相色谱法测定长春胺有关物质的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用HPLC法测定长春胺有关物质的方法，尤其是合成长春胺过程的中间体的测定方法，属于药物分析领域。
【背景技术】
[0002]长春胺是由夹竹桃植物蔓长春花(Vinca major)、小蔓长春花(V.minor)、直立长春花(V.erecta)、异性蔓长春花(V.dilormis)分离的生物碱。长春胺为脑血管扩张药，能维持或恢复脑血管的生理扩张，增加缺血区的正常脑血流量，提高脑对血氧的利用率，改善缺氧脑组织代谢。
[0003]长春胺国际市场需求量很大，目前已可半合成，其合成路线有很多，关于其原料药及中间体有关物质控制的报道国内几乎没有，中国药典尚无与其相关的质量控制标准，建立一种高效，快速，准确，专属性强的高效液相色谱方法对其有关物质进行检测和控制具有非常重要的意义。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于建立一种HPLC方法测定长春胺有关物质的方法。可用于长春胺原料药及长春胺在合成和储藏过程中可能产生的有关物质的检测和质量控制。
[0005]本发明提供了一种高效液相色谱法测定长春胺有关物质的方法，选用十八烷基键合硅胶色谱柱，流动相为乙腈-0.1M碳酸铵溶液(7:3)，检测器选用紫外检测器，检测波长为 260nm。
[0006]本发明具体的实施方案中，所述流动相选自0.1M碳酸铵和0.2M乙酸铵溶液，优选
0.1M碳酸铵溶液。
[0007]本发明具体的实施方案中，乙腈与0.1M碳酸铵溶液比例为80%?55%:20%?45%，优选乙腈比例为70%。
[0008]本发明具体的实施方案中，流动相流速根据色谱柱长短进行选择，可选用0.8 ml/min?L 5 ml/min。
[0009]本发明具体的实施方案中，检测波长优选260nm。
[0010]本发明提供的一种高效液相色谱法测定长春胺有关物质的方法，其具体的实施步骤包括:
取长春胺成品25mg,流动相超声溶解,配制成长春胺浓度为lmg/ml的供试品溶液。
[0011]取长春胺标准品25mg，流动相超声溶解，配制成长春胺浓度为lmg/ml的标准品溶液，取上述标准品溶液适量，流动相稀释500倍，配制成浓度为标准品溶液0.2%浓度的溶液，作为有关物质定量测定的对照品溶液。
[0012]取0.1ml合成长春胺的中间体I的终反应液，流动相稀释至10ml，作为中间体对照溶液I。
[0013]取0.1ml合成长春胺的中间体II的终反应液，流动相稀释至10ml，作为中间体对照溶液2。
[0014]分别准确吸取供试品溶液，对照品溶液，中间体对照溶液I和中间体对照溶液
(2)5 μ 1，注入液相色谱仪，长春胺主峰与相有关物质杂质峰之间的分离度应大于1.5，符合中国药典对分离度的要求，按主峰长春胺峰计算，理论塔板数为11549，大于5000，主峰与其他对照溶液峰的对称因子分别为0.98和0.96，均符合中国药典的标准。
[0015]本发明方法适用于长春胺测定的可以是长春胺纯品，粗品，原料药等以长春胺为主成分的产品。本发明的测定方法还适用于合成过程中的中间体1、中间体II及其他在合成过程中产生的未知中间产物的测定和质量控制。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1为长春胺供试品溶液色谱图。
[0017]图2为对照品溶液色谱图。
[0018]图3为长春胺合成过程中中间体I和中间体II的色谱图。
[0019]
【具体实施方式】
[0020]实施例1
长春胺纯品，购自欧洲sigma公司，纯度为99.83%。高效液相色谱仪选用美国Agilentl260型号仪器,检测器为DAD检测器,色谱柱为thermo C18,4.6 X 250mm, 5 μ m,检测波长260nm，进样量:5μ 1(G131?自动进样器)，流速lml/min，柱温:35°C，流动相:乙腈-0.1M碳酸铵溶液(7:3)等度洗脱。
[0021]实验步骤:
取长春胺纯品25mg,流动相超声溶解,配制成长春胺浓度为lmg/ml的供试品溶液。
[0022]取长春胺标准品25mg，流动相超声溶解，配制成长春胺浓度为lmg/ml的标准品溶液，取上述标准品溶液适量，流动相稀释500倍，配制成浓度为标准品溶液0.2%浓度的溶液，作为有关物质定量测定的对照品溶液。
[0023]分别取供试品溶液和对照品溶液，按照本发明色谱条件，分别注入液相色谱仪，按照本发明分析条件分析并记录色谱图。
[0024]图1为长春胺供试品溶液所得色谱图，长春胺保留时间为8.8min，5.4min，
11.4min分别为长春胺纯品中相关杂质。结果表明，在本发明色谱条件下，长春胺与其他杂质峰分离度均大于1.5，主峰及有关物质峰对称因子分别为0.98,0.95和1.02，符合中国药典相关标准。图2为对照品溶液图谱，所得主峰面积为7.41437，有关物质百分含量(C%)由如下公式计算:C= (A*W1*25*1*100) / (B*W2*500*25)
A为供试品溶液中杂质峰的峰面积 B为对照溶品溶液对照品峰面积 Wl为对照品重量 W2为供试品重量
经计算，得长春胺纯品中两个有关物质含量分别为0.1%和0.05%，长春胺纯度为99.85%，检测结果准确、可靠，该检测方法可用于才长春胺纯品中有关物质检测及其质量控制。
[0025]实施例2
采用与实施例1中类似的仪器设备和操作步骤进行实验，对本公司长春胺合成过程中的中间体进行测定和质量控制。
[0026]高效液相色谱仪选用美国Agilentl260型号仪器，检测器为VWD检测器，色谱柱为thermo C18，4.6 X 150mm，5 μ m，检测波长 260nm，进样量:5 μ I (G1315D 自动进样器)，流速lml/min,柱温:35°C，流动相:乙腈-0.1M碳酸铵溶液(7:3)等度洗脱。
[0027]实验步骤:
分别取0.1ml合成长春胺的中间体I的终反应液和合成长春胺的中间体II的终反应液，流动相稀释至10ml，作为长春胺有关物质定性对照液。另取车间合成的长春胺成品25mg,流动相超声溶解,配制成长春胺浓度为lmg/ml的供试品溶液。
[0028]分别取长春胺中间体1、中间体II对照液和供试品溶液，按本发明色谱条件进行测定并分析记录色谱图。
[0029]图3中化合物I和2分别为为中间体I和中间体II，中间体I和中间体II之间的峰分离度为1.53，峰对称因子分别为1.03和0.95，均符合中国药典标准，该检测方法可用于长春胺合成过程中的中间体的检测与质量控制。图3中中间体I和中间体II相对保留时间为2.1min和3.8min,供试品溶液中有关物质保留时间分别为5.4min和11.4min,本公司生产长春胺包含的关物质为合成过程中产生的其他未知杂质，非中间体I和中间体II。结果表明，本发明方法能较好的分离长春胺和长春胺合成过程中的中间体，可以用于长春胺合成过程中中间体的检测和质量控制。
【权利要求】
1.一种HPLC法测定长春胺有关物质的方法，其特征在于:选用十八烷基键合硅胶色谱柱，以乙腈-0.1M碳酸铵溶液(7:3)为流动相等度洗脱，检测器为紫外检测器，检测波长为260nmo
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述十八烷基键合硅胶色谱柱填料的颗粒粒径为3-5 μ m。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相比例为乙腈体积分数为70%，0.1M碳酸铵溶液体积分数为30%。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测器为紫外检测器，DAD检测器和VWD检测器均适用，检测波长为260nm。
【文档编号】G01N30/02GK103869018SQ201410116092
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年3月27日 优先权日:2014年3月27日
【发明者】彭学东, 张梅, 赵金召, 祁亚楠 申请人:张家港威胜生物医药有限公司