小儿碳酸钙d3颗粒维生素d3含量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种适用于小儿碳酸钙D3颗粒中维生素D3的检测方法。包括：包括如下步骤：(1)精密称取小儿碳酸钙D3颗粒，置离心管中，用二甲基亚砜-水（10﹕2）混合溶液制成每1ml中含2,6-二叔丁基对甲酚0.2mg的溶液；(2)将步骤(1)所得溶液超声，加入2,6-二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液，振摇，离心，分取上层溶液，作为供试品；(3)另取维生素D3对照品适量，精密称定，用异辛烷溶液溶解并制成每1ml中约含1μg的溶液，同法测定；(4)按外标法以峰面积计算，计算结果乘以1.09即得维生素D3含量。可操作性更强、准确度更高。
【专利说明】小儿碳酸钙D3颗粒维生素D3含量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种药品名为小儿碳酸钙D3颗粒中维生素D3的检测方法，属于药物分析【技术领域】。
【背景技术】
[0002]小儿碳酸钙D3颗粒是一种儿童补钙药品，每袋含碳酸钙0.75克(相当于钙0.3克)，维生素D3100国际单位(2.5微克)；最早由美国安士制药有限公司研发，于2009年生产上市，并于同年进口至国内分装销售，商品名“迪巧”，执行标准为进口标准(标准号为JX20070088)。
[0003]进口标准中维生素D3含量测定项下的检测方法如下:
[0004]色谱条件与系统适用性试验:用氨基键合硅胶为填充剂；以正己烷-异丙醇(99:O为流动相，流速为每分钟1.5ml，检测波长为265nm。取维生素D3对照品溶液在60°C
水浴中加热I小时(使产生前维生素D3),放冷,量取20 μ I,注入液相色谱仪,记录色谱图，维生素D3峰和前维生素D3峰的分离度均应大于5，理论板数按维生素D3峰计算应不低于5000，拖尾因子应不大于2.0。
[0005]测定法:取小儿碳酸钙D3颗粒25袋内容物，精密称定，计算每袋平均装量，研细，精密称取细粉适量(约相当于维生素D325 μ g)，置IOOml棕色量瓶中，加溶液[用二甲基亚砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6-二叔丁基对甲酹0.2mg的溶液]50ml,超声15分钟，保持超声水浴温度不超过30°C，精密加入0.02%2，6- 二叔丁基对甲酚的正己烷溶液25ml，振摇15分钟后，离心5分钟(4000rpm)，分取上层溶液，避光静置I小时后得澄清溶液作为供试品溶液，精密量取100 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素D3对照品适量，精密称定，用0.02%2，6-二叔丁基对甲酚的正己烷溶液溶解并制成每Iml中约含I μ g的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，计算结果乘以1.09即得维生素D3含量。
[0006]采用上述检测方法的测定法处理样品溶液时遇到如下问题:
[0007]1.离心机配套的离心管容积不足；
[0008]2.样品溶液从棕色量瓶转移至离心管时不能完全转移，残渣较多；
[0009]3.正己烷沸点仅为68.7°C，在室温较高时容易挥发，存在较大的环境污染和安全问题；
[0010]4.离心后不能立即进样还需要静置I小时。
【发明内容】
[0011]本发明的目的是提供一种可操作性更强、准确度更高的测定法，用于检测小儿碳酸钙D3颗粒中的维生素D3含量。
[0012]发明人对现有测定法进行如下改进:1.根据实际条件进行调整样品取样量和溶剂用量；2.棕色量瓶改为离心管(离心管材质为聚四氟乙烯或其他惰性材质)；3.正己烷改为异辛烷(沸点高达99.3°C) ；4.延长离心时间，离心后无需静置。[0013]本发明对小儿碳酸钙D3颗粒中维生素D3含量的测定法如下:(I)精密称取小儿碳酸钙D3颗粒，置离心管中，用二甲基亚砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6-二叔丁基对甲酚0.2mg的溶液；(2)将步骤(I)所得溶液超声15min，加入0.02%2，6- 二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液，振摇，离心，分取上层溶液，作为供试品；(3)另取维生素D3对照品适量，精密称定，用0.02%2，6-二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液溶解并制成每Iml中约含I μ g的溶液，同法测定；(4)按外标法以峰面积计算，计算结果乘以1.09即得维生素D3含量。
[0014]具体实施步骤:取小儿碳酸钙D3颗粒20袋内容物，精密称定，计算每袋平均装量，研细，精密称取细粉适量(约相当于维生素D310yg)，置50ml离心管(离心管材质为聚四氟乙烯或其他惰性材质)中，加溶液[用二甲基亚砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6- 二叔丁基对甲酚0.2mg的溶液]20ml，超声15分钟，保持超声水浴温度不超过30°C，精密加入0.02%2，6-二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液10ml，振摇15分钟后，离心10分钟(4000rpm)，无需静置直接分取上层溶液，作为供试品溶液，精密量取100 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取维生素D3对照品适量，精密称定，用0.02%2，6- 二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液溶解并制成每Iml中约含I μ g的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，计算结果乘以1.09即得维生素D3含量。
[0015]1.色谱条件与系统适用性试验:用氨基键合硅胶为填充剂；以正己烷-异丙醇(99: I)为流动相，流速为每分钟1.5ml，检测波长为265nm。取维生素D3对照品溶液在60°C水浴中加热I小时(使产生前维生素D3)，放冷，量取20 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，维生素D3峰和前维生素D3峰的分离度均应大于5，理论板数按维生素D3峰计算应不低于5000，拖尾因子应不大于2.0。
[0016]2.供试品溶液的制备:取小儿碳酸钙D3颗粒20袋内容物，精密称定，计算每袋平均装量，研细，精密称取细粉适量(约相当于维生素D310yg)，置50ml离心管(离心管材质为聚四氟乙烯或其他惰性材质)中，加溶液[用二甲基亚砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6- 二叔丁基对甲酚0.2mg的溶液]20ml，超声15分钟，保持超声水浴温度不超过30°C，精密加入0.02%2，6- 二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液10ml，振摇15分钟后，离心10分钟(4000rpm),无需静置直接分取上层溶液。
[0017]3.对照品溶液:取维生素D3对照品适量，精密称定，用0.02%2，6_ 二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液溶解并制成每Iml中约含I μ g的溶液。
[0018]4.测定:用氨基键合硅胶为填充剂；以正己烷-异丙醇(99:1)为流动相，流速为每分钟1.5ml，检测波长为265nm。分别精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各100 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，计算结果乘以1.09即得维生素D3含量。
【具体实施方式】
[0019]下面通过一个具体的实例来进一步具体说明本发明。
[0020]样品制备及检测操作具体步骤如下:
[0021]1.流动相的制备:取色谱纯的正己烷1000ml、异丙醇500ml分别用微孔滤膜滤过。
[0022]2.溶剂的制备:
[0023]二甲基亚砜-水混合溶液:取色谱纯的二甲基亚砜500ml，纯化水100ml，置同烧杯中混匀，加入分析纯的2，6- 二叔丁基对甲酚120mg使溶解。
[0024]0.02%2，6- 二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液溶:取色谱纯的异辛烷100ml，加入分析纯的2，6- 二叔丁基对甲酚20mg使溶解。
[0025]3.对照品溶液的制备:取维生素D3对照品10mg，精密称定，置100mL量瓶中，用0.02%2，6-二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液溶解；再精密量取1ml，置100mL量瓶中，用
0.02%2，6- 二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液稀释至刻度，制成每1ml中约含I μ g的溶液。
[0026]4.系统适用性试验溶液的制备:取少量对照品溶液在60°C水浴中加热I小时(使产生前维生素D3)，放冷。
[0027]5.供试品溶液的制备:取小儿碳酸钙D3颗粒20袋内容物，精密称定，计算每袋平均装量，研细，精密称取细粉4g (约相当于维生素D310y g)，置50ml离心管中，加二甲基亚砜-水混合溶液20ml，超声15分钟，保持超声水浴温度不超过30°C，精密加入0.02%2，6- 二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液10ml，振摇15分钟后，离心10分钟(4000rpm)，无需静置直接分取上层溶液。
[0028]6.系统适用性试验:用氨基键合硅胶为填充剂；以正己烷-异丙醇(99: I)为流动相，流速为每分钟1.5ml，检测波长为265nm。量取系统适用性试验溶液20 μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，维生素D3峰和前维生素D3峰的分离度均应大于5，理论板数按维生素D3峰计算应不低于5000，拖尾因子应不大于2.0。
[0029]7.供试品中维生素D3含量的测定:分别精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各?οομ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，计算结果乘以1.09即得维生素D3含量。计算公式如下:`[0030]
【权利要求】
1.小儿碳酸钙D3颗粒中维生素D3的检测方法，其特征在于包括如下步骤: (1)精密称取小儿碳酸钙D3颗粒，置离心管中，用二甲基亚砜-水(10: 2)混合溶液制成每Iml中含2，6- 二叔丁基对甲酹0.2mg的溶液； (2)将步骤(I)所得溶液超声15min，加入0.02%2，6-二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液，振摇，离心，分取上层溶液，作为供试品； (3)另取维生素D3对照品适量，精密称定，用0.02%2，6-二叔丁基对甲酚的异辛烷溶液溶解并制成每Iml中约含Iyg的溶液，同法测定； (4)按外标法以峰面积计算，计算结果乘以1.09即得维生素D3含量。
【文档编号】G01N30/02GK103869024SQ201410135528
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年4月4日 优先权日:2014年4月4日
【发明者】王超志, 涂涛 申请人:贵州联盛药业有限公司