一种化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，包括如下步骤：(1)样品的预处理：样品用体积比为2:1的2％甲酸溶液和乙腈作为溶剂涡旋振荡、超声提取，提取液经离心处理及Waters?Oasis?MCX混合型固相萃取小柱净化后得到净化液；(2)将所述净化液上机测定，采用液相色谱-质谱/质谱的方法对目标物质进行定性及定量分析。本发明化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法准确、稳定性好、可靠且灵敏度高。
【专利说明】一种化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种抗生素的测定方法，特别是涉及一种化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法。
【背景技术】
[0002]氟喹诺酮类抗生素，又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是人工合成的含4-喹诺酮母核的抗菌药物，属于抗生素中的一大类。自1962年美国发现第一种氟喹诺酮药物萘啶酸(抗菌谱窄，已弃之不用)以来，发展历程大致可分为四个阶段，至今数以万计的氟喹诺酮类衍生物已被合成。由于其抗菌谱广、给药方便、活性强且价格低廉等特点而被广泛用于治疗各种感染性疾病。在祛痘化妆品中添加该类药物，可明显改善祛痘效果，但其对中枢神经系统及胃肠道可造成不良反应，而且痤疮内的细菌一旦对其产生耐药性，会造成严重后果。我国化妆品卫生规范及欧盟化妆品法规(EC1223/2009)等均规定，在化妆品中禁止添加氟喹诺酮类抗菌药物。因此，建立化妆品中该类抗生素的分析检测方法显得尤为必要。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是提供一种准确、稳定性好、可靠且灵敏度高的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法。
[0004]一种化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，包括如下步骤:
[0005](I)样品的预处理:样品用体积比为2:1的2%甲酸溶液和乙腈作为溶剂涡旋振荡、超声提取，提取液经离心处理及Waters Oasis MCX混合型固相萃取小柱净化后得到净化液；
[0006](2)将所述净化液上机测定，采用液相色谱-质谱/质谱的方法对目标物质进行定性及定量分析；
[0007]其中液相色谱条件为:采用Waters XBridge C18, 3.5 μ m, 2.1mmX 150mm的色谱柱分离，以0.1 %甲酸水溶液和含0.1 %甲酸的甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱，柱温:35°C ；流速:0.2mL/min ;进样量:5 μ L ；
[0008]质谱条件为:电离方式:ESI+ ;毛细管电压:3.0OkV ;脱溶剂气温度:400°C ;脱溶剂气流速:800L/hr ;锥孔气流速:50L/hr ;离子源温度:150°C ;萃取电压:3.0OV ;射频透镜电压:0.1OV ;碰撞气体:氩气；数据采集模式:多反应监测。
[0009]本发明所述的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其中所述方法能对化妆品中16种氟喹诺酮类抗生素进行测定，所述16种氟喹诺酮类抗生素为:麻保沙星、氟罗沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙星、帕珠沙星、双氟沙星、沙拉沙星、加替沙星、司帕沙星和莫西沙星。
[0010]本发明所述的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其中步骤(2)中流动相采用如表I所示的梯度洗脱程序，其中A为含0.1%甲酸的甲醇溶液，B为0.1%甲酸水溶液。
[0011]表I液相色谱梯度洗脱程序
【权利要求】
1.一种化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其特征在于:包括如下步骤: (1)样品的预处理:样品用体积比为2:1的2%甲酸溶液和乙腈作为溶剂涡旋振荡、超声提取，提取液经离心处理及Waters Oasis MCX混合型固相萃取小柱净化后得到净化液； (2)将所述净化液上机测定，采用液相色谱-质谱/质谱的方法对目标物质进行定性及定量分析； 其中液相色谱条件为:采用Waters XBridge C18, 3.5 μ m, 2.1mmX 150mm的色谱柱分离，以0.1 %甲酸水溶液和含0.1 %甲酸的甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱，柱温:35°C ;流速:0.2mL/min ;进样量:5 μ L ； 质谱条件为:电离方式=ESI+ ;毛细管电压:3.0OkV ;脱溶剂气温度:400°C ;脱溶剂气流速:800L/hr ;锥孔气流速:50L/hr ;离子源温度:150°C ;萃取电压:3.0OV ;射频透镜电压:0.1OV ;碰撞气体:氩气；数据采集模式:多反应监测。
2.根据权利要求1所述的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其特征在于:所述方法能对化妆品中16种氟喹诺酮类抗生素进行测定，所述16种氟喹诺酮类抗生素为:麻保沙星、氟罗沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙星、帕珠沙星、双氟沙星、沙拉沙星、加替沙星、司帕沙星和莫西沙星。
3.根据权利要求2所述的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其特征在于:步骤(2)中流动相采用如表1所示的梯度洗脱程序，其中A为含0.1%甲酸的甲醇溶液，B为0.1%甲酸水溶液。 表1液相色谱梯度洗脱程序
4.根据权利要求3所述的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其特征在于:步骤(2)中16种氟喹诺酮类抗生素化合物的质谱相关参数见表2。 表216种氟喹诺酮类化合物的分子式及质谱采集参数
5.根据权利要求4所述的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其特征在于:所述Waters Oasis MCX混合型固相萃取小柱的规格为3mL,含60mg填料,使用前采用3mL甲醇活化和3mL水平衡。
6.根据权利要求5所述的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其特征在于:步骤(I)具体包括如下步骤: 分别称取水剂、膏霜类化妆品试样各0.5g于两支25mL比色管中，分别加入体积比为2:1的2%甲酸水溶液和乙腈的混合溶液至IOmL刻度，涡旋振荡30s，然后在超声波清洗仪中超声提取30min，取出，静置至室温，将上清液全部转移至聚丙烯离心管中，在离心机上以5000r/min高速离心10min后，取2mL上清液至IOmL氮吹管中，氮吹至近干，加入2mL0.1%甲酸水溶液重新溶解残渣形成复溶液，所述复溶液过预先用3mL甲醇活化和3mL水平衡的Waters Oasis MCX, 3cc, 60mg混合型固相萃取小柱； 先依次加入3mL2%甲酸水溶液和3mL甲醇分别淋洗,弃去淋洗液,再先后两次用ImL体积比为20:80的氨水和甲醇的混合溶液作为洗脱液进行洗脱，洗脱流速控制在I~2mL/min，合并两次所得洗脱液至同一 IOmL氮吹管中，将合并后的洗脱液氮吹至近干，残渣用ImL的体积比为25:75的含0.1%甲酸的甲醇溶液和0.1 %甲酸水溶液的混合溶液复溶，复溶后的溶液过0.22 μ m微孔滤膜后得到净化液，所述净化液供上机测定。
7.根据权利要求6所述的化妆品中氟喹诺酮类抗生素的测定方法，其特征在于:所述方法还包括标准溶液的配制，包括如下步骤: 准确称取16种氟喹诺酮类抗生素标准品各25mg，精确至0.0OOlg,分别置于50mL容量瓶中，麻保沙星、双氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、莫西沙星、沙拉沙星、培氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、加替沙星、氧氟沙星、单诺沙星及氟罗沙星均用含I %甲酸的40%乙腈水溶液溶解，洛美沙星及司帕沙星用甲醇溶解，帕珠沙星用体积比为90:10的甲醇-氨水混合溶液溶解，分别用对应溶液溶解并定容至50mL刻度，分别得到浓度为500 μ g/mL的16种氟喹诺酮标准储备溶液；分别量取各标准储备溶液ImL置于同一 50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，混匀，得到每种氟喹诺酮类抗生素的质量浓度均为10 μ g/mL的混合标准储备溶液，然后用体积比为25:75的含0.1 %甲酸的甲醇溶液和0.1 %甲酸水溶液的混合溶液将其稀释成浓度分别为 0.1 μ g/L、0.2 μ g/L、0.5 μ g/L、I μ g/L、2 μ g/L、5 μ g/L、10 μ g/L、20 μ g/L、.50 μ g/L、100 μ g/L、200 μ g/L、500 μ g/L、I μ g/mL、2 μ g/mL、5 μ g/mL 的系列混合标准工作溶液。
【文档编号】G01N30/88GK103969383SQ201410181477
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2014年4月30日 优先权日:2014年4月30日
【发明者】马强, 孟宪双, 白桦, 张庆, 陈云霞, 李晶瑞, 马会娟, 王元成 申请人:中国检验检疫科学研究院