一种鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法
【专利摘要】一种鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，该方法包括取待检降糖中药进行薄层层析，在吡格列酮和罗格列酮相对应的Rf值处找到疑似斑点，其特征在于，还包括以下三个步骤：1、采集疑似斑点的一系列的一维表面增强拉曼光谱，得到待检降糖中药的动态谱图，2、对动态光谱图进行预处理，并绘制得到待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图；3、根据待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图，判断待检降糖中药中是否有吡格列酮和罗格列酮。根据本发明所提供的技术方案，能够对降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮进行快速鉴别，检测结果准确可靠，成本低，操作方便。
【专利说明】一种鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，属于医药分析【技术领域】。
【背景技术】
[0002]近年来，一些药厂为了谋求高额利益，在降糖中药中添加价格低廉、药效相当的降糖西药盐酸吡格列酮、马来酸罗格列酮或二者的混合物，这些降糖西药虽然也能起到降糖作用，但毒副性较大，尤其是马来酸罗格列酮，因其会大幅增加服用者心脏病发作及卒中风的几率，美国食品和药物管理局已于2011年全面下架该产品。患者如果长期服用添加了这些降糖西药降糖中药，不仅会引起低血糖等多种不良反应，甚至会危及生病，产生严重的后果。因此，鉴定降糖类中药中是否添加了吡格列酮或罗格列酮，是药监部门的一项重要工作。
[0003]目前针对降糖中药中掺杂马来酸罗格列酮和盐酸吡格列酮的检测的方法主要有TLC、HPLC、LC-MS等。TLC法虽然简单快速，但仅能对降糖药中是否掺假作出粗浅判断，对掺假降糖中药中具体掺杂的是什么成份不能进行鉴定，且该方法易受中药基质和掺假量的影响而显示出假阳性或假阴性的结果。HPLC和LC-MS虽然能够对掺假降糖中药中具体掺杂的是吡格列酮还是罗格列酮还是二者的混合物作出判断，但分析周期长、实验条件苛刻，需要特定的色谱柱、流动相等，检测成本较高，尤其是当药监部门需要在现场对降糖中药中是否添加盐酸吡格列酮或马来酸罗格列酮或二者均有添加作出检测和判断时，这些方法将难以适用。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，以解决上述问题。
[0005]为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是:
[0006]一种降糖中药中添加吡格列酮或罗格列酮的鉴定方法，该方法包括取待检降糖中药进行薄层层析，在吡格列酮和罗格列酮相对应的Rf值处找到疑似斑点，其特征在于，还包括以下三个步骤:
[0007]步骤一:动态光谱图的采集
[0008]取表面增强剂点于疑似斑点上，采用拉曼光谱仪，选取一定强度的激光对疑似斑点持续照射进行微扰，并采集疑似斑点的一系列的一维表面增强拉曼光谱，得到待检降糖中药的动态谱图，每张一维表面增强拉曼光谱的积分时间相同，一定强度为IOOmW?200mW之间的任意数值，表面增强剂为金溶胶、银溶胶或金银合胶，表面增强剂的点样量为2 μ L ?10 μ L ;
[0009]步骤二:二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制
[0010]对动态光谱图进行预处理，包括选取300CHT1?1700CHT1谱段、采用Sgolay法进行平滑并采用airPLS法进行基线校正，得到待检降糖中药的预处理拉曼光谱图，根据预处理拉曼光谱图，绘制得到待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图；
[0011]步骤三:对是否添加吡格列酮或罗格列酮进行鉴定
[0012]根据待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图，当该谱图中含有与吡格列酮的相关峰的出峰位置相差I~w波数的相关峰，则判断待检降糖中药中含有吡格列酮，当该谱图中含有与罗格列酮的相关峰的出峰位置相差-W~W波数的相关峰，则判断待检降糖中药中含有罗格列酮，当该谱图中不含有与吡格列酮和罗格列酮的的相关峰的出峰位置相差-W~W波数的相关峰，则判断待检降糖中药中不含有吡格列酮和罗格列酮，W为IcnT1~5cm_1之间的任意数值,吡格列酮的相关峰的出峰位置为MHcnT1, 430cm_1, 475cm_1, 824cm_1,罗格列酮的相关峰的出峰位置为:739011' 1255CHT1，1329cm^0
[0013]本发明还提供了这样的技术方案:
[0014]一种降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的鉴定方法，该方法包括:取待检降糖中药进行薄层层析，在吡格列酮和罗格列酮相对应的Rf值处找到疑似斑点，其特征在于，还包括以下三个步骤:[0015]步骤一:动态光谱图的采集
[0016]将待检降糖中药、吡格列酮标准品和罗格列酮标准品进行薄层层析后，在薄层板上找到疑似斑点、吡格列酮和罗格列酮三个斑点，
[0017]取表面增强剂分别点于三个斑点上，采用拉曼光谱仪，选取一定强度的激光分别对三个斑点持续照射进行微扰，并分别采集三个斑点的一系列一维表面增强拉曼光谱，得到疑似斑点、吡格列酮和罗格列酮的动态光谱图，每个斑点的所有一维表面增强拉曼光谱的积分时间均相同，一定强度为IOOmW~200mW之间的任意数值，表面增强剂为金溶胶、银溶胶或金银合胶，表面增强剂的点样量为2μ L~10μ L ;
[0018]步骤二:二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制
[0019]分别对待检降糖中药、吡格列酮标准品和罗格列酮标准品的动态光谱图进行预处理，包括选取SOOcnr1~HOOcnT1谱段、采用Sgolay法进行平滑并采用airPLS法进行基线校正，得到待检降糖中药、吡格列酮标准品和罗格列酮标准品的预处理拉曼光谱图，根据预处理拉曼光谱图，分别绘制得到三者的二维相关表面增强拉曼光谱图；
[0020]步骤三:二维相关表面增强拉曼光谱图的分析与判断
[0021]将待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图分别与吡格列酮标准品以及罗格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼光谱图进行比对，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中含有与吡格列酮标准品的相关峰的出峰位置相差-W~w波数的相关峰，则判断待检降糖中药中含有吡格列酮，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中含有与罗格列酮标准品的相关峰的出峰位置相差-W~W波数的相关峰，则判断待检降糖中药中含有罗格列酮，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中不含有与吡格列酮标准品和罗格列酮标准品的的相关峰的出峰位置相差-W~W波数的相关峰，则判断待检降糖中药中不含有批格列酮和罗格列酮，W为1cm-1~5cm-1之间的任意数值。
[0022]本发明的技术方案的进一步特征在于:吡格列酮标准品为盐酸吡格列酮标准品，罗格列酮标准品为马来酸罗格列酮标准品。
[0023]上述本发明的技术方案的进一步特征在于:一定强度为200mW。[0024]上述本发明的技术方案的进一步特征在于:二维相关表面增强拉曼光谱图为同步
-1'TfeP曰。
[0025]上述本发明的技术方案的进一步特征在于:激光由拉曼光谱仪自身的激光光源提供。
[0026]上述本发明的技术方案的进一步特征在于:表面增强剂为纳米银溶胶。
[0027]上述本发明的技术方案的进一步特征在于:表面增强剂的点样量为4μ L?6μ L。
[0028]上述本发明的技术方案的进一步特征在于:w为5CHT1。
[0029]与【背景技术】相比，本发明的技术方案的优点和积极效果如下:
[0030]1.能够对降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮进行快速鉴别
[0031]本发明的技术方案采用激光对疑似斑点处进行微扰，采用拉曼光谱仪检测得到待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图，通过判断该维相关表面增强拉曼光谱图中是否含有与吡格列酮或罗格列酮的出峰位置相同的自动峰或相关峰，即可实现对待检降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮进行判定，与HPLC和LC-MS相比，不需要苛刻的实验条件和复杂的样品前处理工作，即可快速的鉴定出待检降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮。
[0032]2.特征性强，检测结果准确可靠
[0033]由于拉曼光谱法具有极强的特征性，且对检测物质的含量要求很低，因此根据本发明的技术方案所得出的鉴定结果准确可靠，与TLC相比，避免了假阳性或假阴性结果的出现，能够为药监部门的工作人员提供科学的依据和指导。
[0034]3.成本低，操作方便
[0035]本发明的技术方案采用薄层板和拉曼光谱仪即可施行，设备和实验环境要求简单，成本低，操作方便，当采用的拉曼光谱仪为便携式或手持式时，可以实现对降糖中药中是否添加马来酸罗格列酮和盐酸吡格列酮进行现场快速鉴定。
【专利附图】
【附图说明】
[0036]图1为本发明的技术方案在实施例一中的流程图；
[0037]图2为实施例一中待检降糖中药的预处理后拉曼光谱图；
[0038]图3为实施例一中盐酸吡格列酮标准品的预处理后拉曼光谱图；
[0039]图4为实施例一中马来酸罗格列酮标准品的预处理后拉曼光谱图；
[0040]图5为实施例一中待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱；
[0041]图6为实施例一中盐酸吡格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱；
[0042]图7为实施例一中马来酸罗格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱；
[0043]图8为本发明的技术方案在实施例二中的流程图；
[0044]图9为实施例二中待检降糖中药的预处理后拉曼光谱图；
[0045]图10为实施例二中待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱；[0046]图11为实施例三中待检降糖样品的预处理后拉曼光谱图；以及
[0047]图12为实施例三中待检降糖样品的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱。
【具体实施方式】
[0048]以下结合附图，对本发明所涉及的药品中是否添加结构类似物的检测方法做进一步说明。
[0049]以下实施例中所涉及的概念解释:
[0050]同步谱:表征的是两个波数处信号强度变化的方向和协同程度，当两个动态变化同相(反相)，值为正(负)；当动态变化正交时，值为零。
[0051]相关峰:对角线和非对角线区域均会出现，包括自动峰和交叉峰。
[0052]自动峰:位于主对角线上的相关峰，表示的是同一扰动下的同一个波数的自相关光谱峰，其强度反映体系对外扰的敏感程度。
[0053]交叉峰:位于非对角线上的交叉峰，表示位于不同波数的峰的同步变化，表示两个峰的变化有共同的机理和起源。
[0054]<实施例一 >
[0055]一、仪器和样品
[0056](I)仪器:BWS415_785H型便携式拉曼光谱仪(美国必达泰克公司)，激发波长785nm ；
[0057](2)银溶胶制备:取硝酸银(AgNO3) 17mg加二次去离子水IOOml溶解，加入I %的柠檬酸三钠1.6ml，置微波炉中以高火加热6min，溶液呈灰绿色，冷却至室温，加水至刻度处，备用。
[0058](3)待检降糖中药溶液和对照品溶液的制备:取A药厂某批次生产的降糖中药作为待检降糖中药，分别取待检降糖中药、盐酸吡格列酮标准品、及马来酸罗格列酮标准品适量，制成lmol/L的待检降糖中药、盐酸吡格列酮标准品、及马来酸罗格列酮标准品的甲醇溶液。
[0059]二、对待检降糖中药进行检测
[0060]图1为本发明的技术方案在实施例一中的流程图。
[0061]如图1所示，在本实施例一中，测定该待检降糖中药中是否添加盐酸吡格列酮或马来酸罗格列酮，包括以下三个步骤:
[0062]步骤一(SI):动态光谱图的采集
[0063]取I μ I待检降糖中药、盐酸吡格列酮标准品及马来酸罗格列酮标准品的甲醇溶液分别点于硅胶薄层板(以下简称薄层板)上，经二氯甲烷-甲醇-水(体积比8:2:0.2)展开后，取出挥干，于紫外灯254nm下检视盐酸吡格列酮标准品和马来酸罗格列酮标准品在薄层板上的斑点位置，分别标记为吡格列酮和罗格列酮，检视该待检降糖中药的色谱条带中与盐酸吡格列酮标准品和马来酸罗格列酮标准品相应位置的也存在色谱斑点，将该色谱斑点标记为疑似斑点，取5μ I银溶胶，分别滴于疑似斑点、吡格列酮和罗格列酮三个斑点上。
[0064]将拉曼光谱仪的激光强度调至200mW，采用该拉曼光谱仪自身的激光光源提供的200mff的激光，对疑似斑点处持续照射进行微扰，同时采集疑似斑点处的一系列表面增强拉曼光谱，每张表面增强拉曼光谱的积分时间均为5s，所得一系列表面增强拉曼光谱即为待检降糖中药的动态光谱。在光谱采集过程中，保持激光强度不变，激光照射点不变。
[0065]参照上述方法，分别得到盐酸吡格列酮标准品和马来酸罗格列酮标准品的的动态光谱。
[0066]步骤二(S2):二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制
[0067]图2为实施例一中待检降糖中药的预处理后拉曼光谱图。
[0068]图3为实施例一中盐酸吡格列酮标准品的预处理后拉曼光谱图。
[0069]图4为实施例一中马来酸罗格列酮标准品的预处理后拉曼光谱图。
[0070]利用Matlab7.6软件对该待检降糖中药的动态光谱图进行预处理，包括谱段选取(300cm—1?1700cm-1)、平滑(Sgolay法)和基线校正(airPLS法)，得到如图2所示的该待检降糖中药的预处理拉曼光谱图，参照预处理上述操作，分别得到如图3所示的盐酸吡格列酮标准品的预处理后拉曼光谱图、以及如图4所示的马来酸罗格列酮标准品的预处理后拉曼光谱图。
[0071]图5为实施例一中待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱。
[0072]图6为实施例一中盐酸吡格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱。
[0073]图7为实施例一中马来酸罗格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱。
[0074]通过2Dshiger versionl.3软件，软件动态光谱设置为平均光谱，contour参数为8，对待检降糖中药的预处理拉曼光谱图进行处理，绘制得到该待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱图，将盐酸吡格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼同步光谱(300cm 1 ?1700cm O 划分为如图 5 所不的 300cm 1 ?500cm \ 500cm 1 ?IOOOcm \ 和IOOOcm 1 ?1700cm 1 三个区段，其中 5_a 为 IOOOcm 1 ?1700cm 1 区段，5_b 为 500cm 1 ?IOOOcm 1 区段，5_c 为 300cm 1 ?500cm 1 区段。
[0075]参照上述绘制方法和分区方法，分别绘制得到盐酸吡格列酮标准品和马来酸罗格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼同步光谱图并进行分区，得到如图6所示的盐酸吡格列酮的二维相关表面增强拉曼同步光谱和如图7所示的马来酸二维相关表面增强拉曼同步光谱，如图6所示，6-a为盐酸吡格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼同步光谱中IOOOcm 1 ?1700cm 1 区段图，6_b 为 500cm 1 ?IOOOcm 1 区段，6_c 为 300cm 1 ?500cm 1 区段；如图7所示，7-a为马来酸罗格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼同步光谱中lOOOcm—1?1700cm 1 区段图，7_b 为 500cm 1 ?1000cm 1 区段，7_c 为 300cm 1 ?500cm 1 区段。
[0076]步骤三(S3):对是否添加吡格列酮或罗格列酮进行鉴定
[0077]将待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图分别与吡格列酮标准品以及罗格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼光谱图进行比对，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中含有与吡格列酮标准品的相关峰的出峰位置相差-W?w波数的相关峰，则判断待检降糖中药中含有吡格列酮，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中含有与罗格列酮标准品的相关峰的出峰位置相差-W?W波数的相关峰，则判断待检降糖中药中含有罗格列酮，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中不含有与吡格列酮标准品和罗格列酮标准品的的相关峰的出峰位置相差-W~W波数的相关峰，则判断待检降糖中药中不含有吡格列酮和罗格列酮，W为5CHT1。
[0078]对照图5，6，7，对该待检降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮或二者均有添加进行分析。
[0079]对照图5-a、图6-a、图7_a，在lOOOcnT1~HOOcnT1区段，待检降糖中药中含有与罗格列酮的相关峰的出峰位置相同的自动峰1255CHT1和1329CHT1。
[0080]对照图5-b、图6-b、图7-b，在500CHT1~lOOOcnT1区段，待检降糖中药中含有与吡格列酮的相关峰的出峰位置相同的自动峰627CHT1，还含有与罗格列酮的相关峰的出峰位置相同的自动峰739CHT1。
[0081]对照图5-c、图6-c、图7-c，在300(^1~δΟΟαιT1区段，待检降糖中药中含有475cm_1处自动峰,及414CHT1与43001^1处的正交叉峰,均与吡格列酮的相关峰的出峰情况相同。
[0082]综合1000cm 1 ~1700cm \500cm 1 ~1000cm 1 和 300cm 1 ~500cm 1 三个区段，待检降糖中药的谱图中出现414cm—1，430cm—1，475cm—1，824cm—1处相关峰，说明含有盐酸吡格列酮，出现739CHT1，1255CHT1，1329cm^处相关峰，说明含有马来酸罗格列酮。
[0083]根据以上分析结果，说明该药厂该批次生产的降糖中药掺有吡格列酮和罗格列酮。
[0084]<实施例二 >
[0085]一、仪器和样品
[0086](I)仪器:BWS415_785H型便携式拉曼光谱仪(美国必达泰克公司)，激发波长785nm ；
[0087](2)银溶胶制备:取硝酸银(AgNO3) 17mg加二次去离子水100mL溶解，加入I %的柠檬酸三钠1.6ml，置微波炉中以高火加热6min，溶液呈灰绿色，冷却至室温，加水至刻度处，备用。
[0088](3)待检降糖中药溶液和对照品溶液的制备:取B药厂某批次生产的降糖中药作为待检降糖中药，制成lmol/L的待检降糖中药的甲醇(分析纯)溶液。
[0089]二、对待检降糖中药进行检测
[0090]图8为本发明的技术方案在实施例二中的流程图。
[0091]如图8所示，在本实施例二中，测定该待检降糖中药中是否添加盐酸吡格列酮或马来酸罗格列酮，该方法包括:取I μ I待检降糖中药的甲醇溶液点于硅胶薄层板(以下简称薄层板)上，经二氯甲烷-甲醇-水(8:2:0.2)展开后，取出挥干，于紫外灯254nm下检视，在吡格列酮或罗格列酮相对应的Rf值处找到疑似斑点(Rf值为0.9)，还包括以下三个步骤:
[0092]步骤一(SI’):动态光谱图的采集
[0093]取5 μ I银溶胶滴于疑似斑点上，将拉曼光谱仪的激光强度调至200mW，采用该拉曼光谱仪自身的激光光源发射激光，对疑似斑点持续照射进行微扰，同时采集疑似斑点的一系列表面增强拉曼光谱，得到该待检降糖中药的动态光谱，每张表面增强拉曼光谱的积分时间均为5s，在光谱采集过程中，保持激光强度不变，激光照射点不变。[0094]步骤二(S2’ ):二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制
[0095]图9为实施例二中待检降糖中药的预处理后拉曼光谱图。
[0096]图10为实施例二中待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱。
[0097]利用Matlab7.6软件对该待检降糖中药的动态光谱图进行预处理，包括谱段选取(300cm—1~1700cm-1)、平滑(Sgolay法)和基线校正(airPLS法)，得到如图9所示的该待检降糖中药的预处理拉曼光谱图。
[0098]通过2Dshiger versionl.3软件,软件动态光谱设置为平均光谱，contour参数为8，对待检降糖中药的预处理拉曼光谱图进行处理，绘制得到如图10所示的该待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱图，将该待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱(300cm 1~1700cm:)划分为如图10所不的300cm 1~500cm \ 500cm 1~1000cm \和lOOOcnT1 ~1700cm-1 三个区段，其中 10_a 为 1000cm-1 ~1700cm-1 区段，10_b 为 δΟΟαι1 ~1000crn 1 区段，10_c 为 300cm 1 ~500cm 1 区段。
[0099]步骤三(S3’ ):对是否添加吡格列酮或罗格列酮进行鉴定
[0100]根据该待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱图，当该谱图中含有与吡格列酮的相关峰的出峰位置相差I~w波数的相关峰，则判断待检降糖中药中含有吡格列酮，当该谱图中含有与罗 格列酮的相关峰的出峰位置相差-W~W波数的相关峰，则判断待检降糖中药中含有罗格列酮，当该谱图中不含有与吡格列酮和罗格列酮的的相关峰的出峰位置相差-W~W波数的相关峰，则判断待检降糖中药中不含有吡格列酮和罗格列酮，W为δαι1,吡格列酮的相关峰的出峰位置为MHcnT1, 430cm_1, 475cm_1, 82401^1,罗格列酮的相关峰的出峰位置为:739cm \ 1255cm \ 1329cm、
[0101]由图10-a、10-b、10-C可知，本实施例所提供的待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱图中在414cm—1，430cm—1，475cm—1，824cm—1处的存在相关峰，说明该药厂该批次生产的降糖中药掺有吡格列酮。
[0102]〈实施例三〉
[0103]一、仪器和样品
[0104](I)仪器:BWS415_785H型便携式拉曼光谱仪(美国必达泰克公司)，激发波长785nm ；
[0105](2)银溶胶制备:取硝酸银(AgNO3) 17mg加二次去离子水100mL溶解，加入I %的柠檬酸三钠1.6ml，置微波炉中以高火加热6min，溶液呈灰绿色，冷却至室温，加水至刻度处，备用。
[0106](3)待检降糖中药溶液和对照品溶液的制备:取C药厂某批次生产的降糖中药作为待检降糖中药，制成lmol/L的待检降糖中药的甲醇(分析纯)溶液。
[0107]二、对待检降糖中药进行检测
[0108]在本实施例三中，取I μ I待检降糖中药的甲醇溶液点于硅胶薄层板(以下简称薄层板)上，经二氯甲烷-甲醇-水(8:2:0.2)展开后，取出挥干，于紫外灯254nm下检视，在盐酸吡格列酮或马来酸罗格列酮相对应的Rf值处找到疑似斑点，参照实施例二中步骤一至步骤三的操作，对疑似斑点进行动态光谱图的采集、二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制、以及对是否添加吡格列酮或罗格列酮进行鉴定。[0109]图11为实施例三中待检降糖中药的预处理后拉曼光谱图；
[0110]图12为实施例三中待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱划分为三个区段后得到的同步相关光谱。
[0111]通过Matlab7.6软件对动态光谱图进行预处理后得到如图11所示的该待检降糖中药的预处理拉曼光谱图，经2Dshiger versionl.3软件绘制得到如图12所示的该降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱图，
[0112]由图12-a、12-b、12_c可知，本实施例所提供的待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱图中在在739CHT1，1255cm-1, 1329^1处的存在相关峰，说明该药厂该批次生产的降糖中药掺有马来酸罗格列酮。
[0113]〈实施例四〉
[0114]一、仪器和样品
[0115](I)仪器:BWS415-785H型便携式拉曼光谱仪(美国必达泰克公司)，激发波长785nm ；
[0116](2)银溶胶制备:取硝酸银(AgNO3) 17mg加二次去离子水100mL溶解，加入I %的柠檬酸三钠1.6ml，置微波炉中以高火加热6min，溶液呈灰绿色，冷却至室温，加水至刻度处，备用。
[0117](3)待检降糖 中药溶液和对照品溶液的制备:取D药厂某批次生产的降糖中药作为待检降糖中药，制成lmol/L的待检降糖中药的甲醇(分析纯)溶液。
[0118]二、对待检降糖中药进行检测
[0119]在本实施例四中，取I μ I待检降糖中药的甲醇溶液点于硅胶薄层板(以下简称薄层板)上，经二氯甲烷-甲醇-水(8:2:0.2)展开后，取出挥干，于紫外灯254nm下检视，在盐酸吡格列酮或马来酸罗格列酮相对应的Rf值处找到疑似斑点，参照实施例二中步骤一至步骤三的操作，对疑似斑点进行动态光谱图的采集、二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制、以及对是否添加吡格列酮或罗格列酮进行鉴定。
[0120]通过Matlab7.6软件对动态光谱图进行预处理后得到该待检降糖中药的预处理拉曼光谱图，经2Dshiger versionl.3软件绘制得到该降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱图，谱图显示，在414011' 430cm_1, 475cm_1, 824cm_1处没有出现相关峰,说明该待检降糖中药中不含有吡格列酮，在739CHT1，1255CHT1，1329cm^处也没有出现相关峰，说明该待检降糖中药中也不含有罗格列酮。
[0121]实施例的作用与效果
[0122]与【背景技术】相比，上述实施例一至四所提供的降糖中药中添加吡格列酮或罗格列酮的鉴定方法的作用与积极效果为:
[0123]1.能够对降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的进行快速鉴别
[0124]本发明的技术方案采用激光对疑似斑点处进行微扰，采用拉曼光谱仪检测得到待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图，通过判断该维相关表面增强拉曼光谱图中是否含有与吡格列酮或罗格列酮的出峰位置相同的自动峰或相关峰，即可实现对待检降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮进行判定，与HPLC和LC-MS相比，不需要苛刻的实验条件和复杂的样品前处理工作，即可快速的鉴定出待检降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮。[0125]2.特征性强，检测结果准确可靠
[0126]由于拉曼光谱法具有极强的特征性，且对检测物质的含量要求很低，因此根据本发明的技术方案所得出的鉴定结果准确可靠，与TLC相比，避免了假阳性或假阴性结果的出现，能够为药监部门的工作人员提供科学的依据和指导。
[0127]3.成本低，操作方便
[0128]本发明的技术方案采用薄层板和便携式拉曼光谱仪进行施行，设备和实验环境要求简单，成本低，操作方便，可以对降糖中药中是否添加马来酸罗格列酮和盐酸吡格列酮进行现场快速鉴定。
[0129]4.微扰设计巧妙，简便快速、易于操作
[0130]采用实验所需的拉曼光谱仪自身的激光对点样处进行持续照射，从而产生热量对待测样品进行微扰，获得系列动态SERS谱图，进而得到二维相关谱图。整个实验过程无需外加干扰实验，只需调控激光能量即可，避免了人为施加微扰措施时可能出现的因温度过高或PH变化过大等所致的样品体系破坏的缺点，且操作简单，易于重现，便于药监人员进行现场检测。[0131]当然，本发明所涉及的一种降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的鉴定方法并不仅仅限定于上述实施例中的内容。以上内容仅为本发明构思下的基本说明，而依据本发明的技术方案所作的任何等效变换，均属于本发明的保护范围。
[0132]另外，在上述实施例一至四中，拉曼光谱仪的激光强度为200mW。本发明的所涉及的激光强度可以为在动态光谱采集过程中保证无样品灼烧情况出现所采用的任何强度，优选IOOmW~200mW之间的任意数值，优选200mW。
[0133]另外,在上述实施例一至四中，w为5cm-1,本发明的技术方案w可以选自IcnT1至5cm_1之间的任意数值,优选5cm-1。
[0134]另外，在上述实施例中，表面增强剂的点样量为5μ L,在本发明的技术方案中，表面增强剂的点样量可以选自2 μ L~10 μ L之间的任意数值，优选4μ L~6 μ L之间的数值。
[0135]另外，在上述实施例一至四中，选择二维相关表面增强拉曼同步光谱图的同步谱进行分析，本发明的技术方案还可以针对二维相关表面增强拉曼同步光谱图的异步谱进行分析。
[0136]另外，在上述实施例一至四中，动态光谱的采集是等间隔时间段进行采集，本发明的技术方案还可以是按照间隔时间递增或者按照间隔时间递减进行采集，只要保证每张谱图的积分时间相同即可。
[0137]另外，在上述实施例一至四中，所采用的表面增强剂为纳米银溶胶，本发明的技术方案采用的表面增强剂还可以为金溶胶或者金银合胶，优选纳米银溶胶。
[0138]另外，在上述实施例一至四中，所采用的激光由拉曼光谱仪自身的激光光源提供，本发明的技术方案所需的激光还可以通过外加激光光源提供。
[0139]另外，在上述实施例一至四中，采用Matlab7.6软件对动态光谱图进行预处理后得到待检降糖中药的预处理拉曼光谱图，采用2Dshiger versionl.3软件绘制得到降糖中药的二维相关表面增强拉曼同步光谱图，所采用的谱图处理软件仅是本发明的技术方案的基本说明，还可以选择其他能够对一维拉曼光谱图进行处理得到二维拉曼光谱图的软件。
[0140]另外，实施例一所采用的技术方案还可以对仅含有一种掺杂物或不含有掺杂物的待检降糖中药进行鉴定，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中含有与吡格列酮标准品的相关峰的出峰位置相差-W?W波数的相关峰，则待检降糖中药中含有吡格列酮，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中含有与罗格列酮标准品的相关峰的出峰位置相差-W?W波数的相关峰，则待检降糖中药中含有罗格列酮，当待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中不含有与吡格列酮和罗格列酮的相关峰的出峰位置相差-W?W波数的相关峰，则待检降糖中药中不含有吡格列酮和罗格列酮。
[0141]另外，上述实施例二至四所采用的技术方案，也能够对掺杂有罗格列酮和吡格列酮两种掺假物的待检降糖中药进行鉴定。
[0142]另外，在上述实施例二至四所采用的技术方案中，吡格列酮或罗格列酮相对应的Rf值为0.9，本发明的技术方案所涉及的吡格列酮或罗格列酮相对应的Rf值会存在一定的误差，在0.85-0.95之间。
【权利要求】
1.一种鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，该方法包括:取待检降糖中药进行薄层层析，在吡格列酮和罗格列酮相对应的Rf值处找到疑似斑点，其特征在于，还包括以下三个步骤: 步骤一:动态光谱图的采集 取表面增强剂点于所述疑似斑点上，采用拉曼光谱仪，选取一定强度的激光对所述疑似斑点持续照射进行微扰，并采集所述疑似斑点的一系列的一维表面增强拉曼光谱，得到所述待检降糖中药的动态谱图，每张一维表面增强拉曼光谱的积分时间相同，所述一定强度为IOOmW~200mW之间的任意数值，所述表面增强剂为金溶胶、银溶胶或金银合胶，所述表面增强剂的点样量为2 μ L~10 μ L ; 步骤二:二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制 对所述动态光谱图进行预处理，包括选取300cm-1~17OOcm-1谱段、采用Sgolay法进行平滑并采用airPLS法进行基线校正，得到所述待检降糖中药的预处理拉曼光谱图，根据所述预处理拉曼光谱图，绘制得到所述待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图； 步骤三:对添加吡格列酮或罗格列酮进行鉴定 根据所述待检降糖中药的所述二维相关表面增强拉曼光谱图，当该谱图中含有与所述吡格列酮的相关峰的出峰位置相差I~w波数的相关峰，则判断所述待检降糖中药中含有所述吡格列酮，当该谱图中含有与所述罗格列酮的相关峰的出峰位置相差-W~w波数的相关峰，则判断所述待检降糖中药中含有所述罗格列酮，当该谱图中不含有与所述吡格列酮和所述罗格列酮的的相关峰的出峰位置相差-W~w波数的相关峰，则判断所述待检降糖中药中不含有所述吡格列酮和所述罗格列酮，w为IcnT1~5cm—1之间的任意数值，所述吡格列酮的相关峰的出峰位置为:414(^1, 430cm_1, 475cm_1, 824(^1,所述罗格列酮的相关峰的出峰位置为:739cm \ 1255cm \ 1329cm、
2.一种鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，该方法包括:取待检降糖中药进行薄层层析，在吡格列酮和罗格列酮相对应的Rf值处找到疑似斑点，其特征在于，还包括以下三个步骤: 步骤一:动态光谱图的采集 将所述待检降糖中药、吡格列酮标准品和罗格列酮标准品进行薄层层析后，在薄层板上找到疑似斑点、吡格列酮和罗格列酮三个斑点， 取表面增强剂分别点于三个所述斑点上，采用拉曼光谱仪，选取一定强度的激光分别对三个所述斑点持续照射进行微扰，并分别采集三个所述斑点的一系列一维表面增强拉曼光谱，得到所述疑似斑点、所述吡格列酮和所述罗格列酮的动态光谱图，每个斑点的所有一维表面增强拉曼光谱的积分时间均相同，所述一定强度为IOOmW~200mW之间的任意数值，所述表面增强剂为金溶胶、银溶胶或金银合胶，所述表面增强剂的点样量为2 μ L~10 μ L ; 步骤二:二维相关表面增强拉曼光谱图的绘制 分别对所述待检降糖中药、所述吡格列酮标准品和所述罗格列酮标准品的所述动态光谱图进行预处理，包括选取SOOcnr1~HOOcnT1谱段、采用Sgolay法进行平滑并采用airPLS法进行基线校正，得到所述待检降糖中药、所述吡格列酮标准品和所述罗格列酮标准品的预处理拉曼光谱图，根据所述预处理拉曼光谱图，分别绘制得到三者的二维相关表面增强拉曼光谱图；步骤三:二维相关表面增强拉曼光谱图的分析与判断 将所述待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图分别与所述吡格列酮标准品以及所述罗格列酮标准品的二维相关表面增强拉曼光谱图进行比对，当所述待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中含有与所述吡格列酮标准品的相关峰的出峰位置相差I~W波数的相关峰，则判断所述待检降糖中药中含有吡格列酮，当所述待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中含有与所述罗格列酮标准品的相关峰的出峰位置相差I~W波数的相关峰，则判断所述待检降糖中药中含有罗格列酮，当所述待检降糖中药的二维相关表面增强拉曼光谱图中不含有与所述吡格列酮标准品和所述罗格列酮标准品的的相关峰的出峰位置相差I~W波数的相关峰，则判断所述待检降糖中药中不含有吡格列酮和罗格列酮，W为Icm-1~5cm-1之间的任意数值。
3.根据权利要求2所述的鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，其特征在于:所述吡格列酮标准品为盐酸吡格列酮标准品，所述罗格列酮标准品为马来酸罗格列酮标准品。
4.根据权利要求1或2所述的鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，其特征在于:所述一定强度为200mW。
5.根据权利要求1或2所述的鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，其特征在于:所述二维相关表面增强拉曼光谱图为同步谱。
6.根据权利要求1或2所述的鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，其特征在于:所述激光由拉曼光谱仪自身的激光光源提供。
7.根据权利要求1或2所述的鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，其特征在于:所述表面增强剂为纳米银溶胶。
8.根据权利要求1或2所述的鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，其特征在于:所述表面增强剂的点样量为4μ L~6μ L。
9.根据权利要求1或2所述的鉴定降糖中药中是否添加吡格列酮或罗格列酮的方法，其特征在于:w为5CHT1。
【文档编号】G01N21/65GK103954608SQ201410211927
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年5月20日 优先权日:2014年5月20日
【发明者】陆峰, 朱青霞, 李皓, 柴逸峰 申请人:中国人民解放军第二军医大学