清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法
【专利摘要】本发明提供了一种清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法。具体操作步骤为：（一）采集校正集并采集原始光谱数据；（二）清开灵注射液中间体指标成分含量的测定；（三）校正模型的建立与检验；（四）在线测定清开灵注射液生产过程的中间体新样品。本发明测定时间大为缩短，通常每个样品在1min之内完成，其检测精度也逼近于标准方法；本发明有望可以解决清开灵注射液生产过程混配阶段传统离线测定耗时长、效率低、检测滞后等问题，同时为清开灵注射液等品种的质量提升提供有力的技术保障。
【专利说明】清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于中药液体制剂的质量检测【技术领域】，特别涉及一种用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法。
【背景技术】
[0002]中药注射液按照《中华人民共和国药典》(2010年版)的定义是“系指药材经提取、纯化后制成的供注入体内的溶液、乳状液及供临用前配制成溶液的粉末或浓溶液的无菌制剂。”清开灵注射液主要是有桅子、板蓝根、金银花、黄芩苷、胆酸、猪去氧胆酸、珍珠母和水牛角等组方药材经现代生产工艺制备而成。清开灵注射液通过血管给药方式大大提高了中药对人身的药物有效供给和生物利用率，并进而提高了功效。清开灵注射液目前在清热解毒、镇静安神等方面有明显优势。
[0003]在清开灵注射液的实际生产过程中，由于清开灵注射液混配过程受到诸多方面的约束，其检测多是采用离线操作、事后分析，因此该检测过程存在很多缺陷。例如生产工艺复杂，无法及时反馈待测样品的含量参数等质量问题，存在着分析结果滞后，费时费力，操作繁琐等情况，这些不利于清开灵注射液的在线质量快速分析，提高生产效率，不适合中药现代化生产发展的需要。因此，迫切需要研究一种快速、高效、准确、便利的分析检测方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于克服现有技术中无法在线操作，同时准确测量清开灵注射液中间体各成分的缺点与不足，提供一种用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，该方法可以有效地解决清开灵注射液生产过程中的中间体指标成分的含量快速测定，提闻生广效率。
[0005]本发明的目的是通过如下技术方案来实现的:
一种用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，包括如下步骤:
S1:采集校正集并采集原始光谱数据
从清开灵注射液中间体的样品中采集样品作为校正集，并利用近红外光谱仪采集校正集的原始光谱数据；
其中，所述清开灵注射液中间体的样品是指清开灵注射液混配阶段所得滤液，所述清开灵注射液中间体的样品包括银黄混合液和六混液；
所述银黄混合液的制备方法为将黄芩苷用注射用水溶解，调pH至7.5，加入金银花提取液，混匀即为银黄混合液，所述银黄混合液成分中包括黄芩苷和绿原酸；
所述六混液的制备方法为将桅子液、板蓝根液和水牛角、珍珠母水解液混合液合并然后加到胆酸、猪去氧胆酸的75%乙醇溶液中，并添加乙醇使乙醇总含量达75%，调节混合液PH值至7.0，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，加水，冷藏，即为六混液，所述六混液成分中包括胆酸、猪去氧胆酸、桅子苷；
采集的清开灵注射液中间体的样品应根据样品的批次、组方药材的来源等因素合理挑选校正集，在挑选建立校正模型时应尽可能的增大这些因子的变异范围，以得到代表性尽可能好的校正集。
[0006]优选的,所述校正集的数量至少为15个；进一步优选的,所述校正集的数量为22个。
[0007]S2:清开灵注射液中间体指标成分含量的测定
将步骤SI中已经采集完近红外光谱的清开灵注射液中间体的样品进行含量测定，具体操作步骤如下:
当测定银黄混合液时，
采用高效液相色谱仪，按照《中华人民共和国药典》(2010年版第一增补本)中清开灵注射液项下黄芩苷含量测定方法测定样品中的黄芩苷含量；
采用高效液相色谱仪，按照《中华人民共和国药典》(2010年版一部)中金银花项下绿原酸含量测定方法测定样品中的绿原酸含量；
当测定六混液时，
采用高效液相色谱仪，按照《中华人民共和国药典》(2010年版第一增补本)中清开灵注射液项下胆酸测定方法测定样品中的胆酸含量；
采用高效液相色谱仪，按照《中华人民共和国药典》(2010年版第一增补本)中清开灵注射液项下猪去氧胆酸测定方法测定样品中的猪去氧胆酸含量；
采用高效液相色谱仪，按照《中华人民共和国药典》(2010年版一部)中桅子药材含量测定方法测定样品中的桅子苷含量；
采用凯氏定氮仪，按照《中华人民共和国药典》(2010年版一部)中附录IX L第二法测定样品中的含氮量。
[0008]在近红外光谱的采集过程中，不可避免的由于仪器状态、环境干扰以及测定条件的细微差异导致光谱的变化，通过对光谱信号进行预处理以消除此类影响，改善模型的性能，本发明主要采用了多种预处理方法如无预处理、卷积平滑、卷积求导、多元散色校正、标准正态变量变换和归一化中的一种或几种对光谱进行优化，以寻求最佳的光谱预处理方法。
[0009]在近红外光谱区域，不同波段的光谱吸收信息对于最后建立的模型的贡献价值不同，在特定的波段范围处，针对特定组分的吸收强度可能小于杂质的吸收或者干扰因素影响，且难以抽取对特征信息进行有效提取；采用化学计量学方法尤其是偏最小二乘法可以对全谱数据信息进行处理，但是为了改善模型的性能，提高计算速度，应该在建模过程中对光谱的波段范围进行优选，波段范围选择的方法一般包括全波段、相关系数法和迭代优化等方法中的一种或者几种，一般选取的波段范围为12000?4000 cnT1中的部分或全部范围。
[0010]S3:校正模型的建立与检验
S31:将步骤SI获得的校正集的原始光谱数据进行预处理和波段范围选择，得到清开灵注射液中间体指标成分含量特征光谱信息；
S32:以偏最小二乘法对得到的清开灵注射液中间体指标成分含量特征光谱信息分别和步骤S2所测得的指标成分含量的真实值进行关联建立校正模型，并采用参数检验校正模型； 其中，黄芩苷的波段选择方法为迭代优化2 (M=I, 2, 3),选择波段范围5804.685?6402.509 cnT1，光谱预处理方法为归一化，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为4 ；
绿原酸的波段选择方法为迭代优化2 (M=I )，选择波段范围5793.114?6387.082 cnT1和7586.588?8180.556 cnT1，光谱预处理方法为卷积平滑，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为4;
胆酸的波段选择方法为迭代优化3，选择波段范围7563.446?8153.557和8751.382?9341.492CHT1，光谱预处理方法为二阶卷积求导，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为2;
猪去氧胆酸和含氮量的波段选择方法为相关系数法，阈值> 0.4，光谱预处理方法为二阶卷积求导，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为3 ；
桅子苷的波段选择方法为迭代优化I，选择波段范围7609.729?8809.235 cnT1，光谱预处理方法为无谱图预处理，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为5 ；
S33:在化学计量学分析系统中导入步骤S32中所得的各校正模型；
为保证所建立模型的准确性，通常要对所建立的校正模型进行预测，利用近红外光谱仪采集清开灵注射液生产过程中的中间体新样品的原始光谱数据，将所采集清开灵注射液生产过程中的中间体新样品的原始光谱数据输入到已导入校正模型的化学计量学分析系统中，经软件系统计算得到未知清开灵注射液生产过程中的中间体指标成分含量，即预测值；并采用S2中的相应的标准方法测得清开灵注射液生产过程中的中间体新样品的实际含量，即真实值，将预测值与真实值进行对比，以检验所建立的校正模型的预测能力。
[0011]S4:在线测定清开灵注射液生产过程的中间体新样品
利用近红外光谱仪采集清开灵注射液生产过程的中间体新样品的原始光谱数据，将所得原始光谱数据输入到已导入校正模型的化学计量学分析系统中，经软件系统计算得到新样品中各成分的含量。
[0012]化学计量学分析系统是一种可进行数据运算处理的软件，其可以对所获得的光谱数据进行光谱预处理、回归校正、预测分析的功能，在本发明中，所选用的化学计量学分析系统优选的采用OPUS、Unscrambler、Matlab、TQ或广州白云山明兴制药有限公司质量监控系统。
[0013]进一步优选的，所述化学计量学分析系统为TQ或广州白云山明兴制药有限公司质量监控系统。
[0014]在本发明中，利用近红外光谱仪采集在线测定清开灵注射液生产过程的中间体新样品的操作条件与采集校正集原始光谱数据的操作条件相同；
具体操作条件如下:在室温(15?30 °C)下，利用Antaris MX傅立叶近红外过程分析仪(赛默飞世尔科技公司，产地为美国，光源:卤钨灯，检测器:InGaAs检测器，其中，分辨率为8 cnT1,扫描次数为32次,扫描光谱范围为10000?4 000 cnT1,光程为2 mm)进行数据米集。
[0015]在本发明中用到的评价校正模型的参数，其具体意义是:
(O 决定系数:R2 (The coefficient of determination)
【权利要求】
1.一种用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，其特征在于，包括如下步骤: S1:采集校正集并采集其原始光谱数据 从清开灵注射液中间体的样品中采集样品作为校正集，并利用近红外光谱仪采集校正集的原始光谱数据； 其中，所述清开灵注射液中间体的样品是指清开灵注射液混配阶段所得滤液，所述清开灵注射液中间体的样品包括银黄混合液和六混液； 52:清开灵注射液中间体指标成分含量的测定 将步骤SI中已经采集完近红外光谱的清开灵注射液中间体的样品进行含量测定，具体操作步骤如下: 当测定银黄混合液时，按照《中华人民共和国药典》中的方法测定样品中的黄芩苷和绿原酸含量； 当测定六混液时，按照《中华人民共和国药典》中的方法测定样品中的胆酸、猪去氧胆酸和桅子苷的含量，并测定样品中的含氮量； 53:校正模型的建立与检验 531:将步骤SI获得的校正集的原始光谱数据进行预处理和波段范围选择，得到清开灵注射液中间体指标成分含量的特征光谱信息； 532:以偏最小二乘法对得到的清开灵注射液中间体指标成分含量的特征光谱信息分别和步骤S2所测得的指标成分含量的真实值进行关联建立校正模型，并采用参数检验校正模型； 其中，黄芩苷的波段选择方法为迭代优化2 (M=l，2，3)，选择波段范围5804.685~.6402.509 cnT1，光谱预处理方法为归一化，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为.4 ； 绿原酸的波段选择方法为迭代优化2 (M=I )，选择波段范围5793.114~6387.082 cnT1和7586.588~8180.556 cnT1，光谱预处理方法为卷积平滑，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为4; 胆酸的波段选择方法为迭代优化3，选择波段范围7563.446~8153.557和.8751.382~9341.492CHT1，光谱预处理方法为二阶卷积求导，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为2; 猪去氧胆酸和含氮量的波段选择方法为相关系数法，阈值> 0.4，光谱预处理方法为二阶卷积求导，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为3 ； 桅子苷的波段选择方法为迭代优化I，选择波段范围7609.729~8809.235 cnT1，光谱预处理方法为无谱图预处理，采用偏最小二乘法建立校正模型时，主因子数为5 ； . 533:在化学计量学分析系统中导入步骤S32中建立的各校正模型； . 54:在线测定清开灵注射液生产过程的中间体新样品 利用近红外光谱仪采集清开灵注射液生产过程的中间体新样品的原始光谱数据，将所得原始光谱数据输入到已导入校正模型的化学计量学分析系统中，经软件系统计算得到新样品中各成分的含量； 其中，采集清开灵注射液生产过程的中间体新样品的操作条件与采集校正集原始光谱数据的操作条件相同。
2.根据权利要求1所述的用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，其特征在于，所述化学计量学分析系统为OPUS、Unscrambler、Matlab、TQ或广州白云山明兴制药有限公司质量监控系统。
3.根据权利要求2所述的用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，其特征在于，所述化学计量学分析系统为TQ或广州白云山明兴制药有限公司质量监控系统。
4.根据权利要求1所述的用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，其特征在于，所述校正集的数量至少为15个。
5.根据权利要求4所述的用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，其特征在于，所述校正集的数量为22个。
6.根据权利要求1所述的用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，其特征在于，采集清开灵注射液生产过程的中间体新样品的具体操作条件如下: 在室温15~30 °(:下，利用Antaris MX傅立叶近红外过程分析仪进行数据采集；具体操作条件为:光源为卤鹤灯，检测器为InGaAs检测器,其中，分辨率为8 cnT1,扫描次数为32次，扫描光谱范围为10000~4000 cnT1，光程为2 mm。
7.根据权利要求1所述的用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，其特征在于，步骤S32中所述参数是指交叉检验的校正标准偏差、校正标准偏差和决定系数中的一种或几种。
8.根据权利要求7所述的用于清开灵注射液中间体指标成分含量快速测定的方法，其特征在于，步骤S32中所述参数是指交叉检验的校正标准偏差、校正标准偏差和决定系数。
【文档编号】G01N21/359GK103940775SQ201410215259
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年5月21日 优先权日:2014年5月21日
【发明者】刘顺国, 高建胜, 肖雪, 谭仲森, 罗国安, 刘明颖, 陈艳, 陈育娟, 覃炳达, 周小琴 申请人:广州白云山明兴制药有限公司