喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定c含量的检测方法
【专利摘要】本发明公开了喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量测定方法，可同时检测喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量。本方法使用同一流动相系统，即可一次性完成喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量的检测，不仅能够快速、简便的获知该产品的质量情况，还解决了现有技术中使用的喘可治注射液的现执行标准【含量测定】项下“淫羊藿苷”的检测方法以及含量限度不合理导致喘可治注射液的淫羊藿苷的含量不合格的问题。
【专利说明】喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉属于药品质量控制【技术领域】，具体地说涉及一种喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量检测方法。
【背景技术】
[0002]喘可治注射液，主要成分为淫羊藿和巴戟天，具有温阳补肾，平喘止咳，有抗过敏、增强体液免疫与细胞免疫的功能，主治哮证属肾虚挟痰证，症见喘促日久，反复发作，面色苍白，腰酸肢软，畏寒，汗多；发时喘促气短，动则加重，喉有痰鸣，咳嗽，痰白清稀不畅；以及支气管炎、哮喘急性发作期间见上述症侯者，为淡黄色澄明液体。
[0003]喘可治注射液早在1999年6月就批准生产，由于当时研究、仪器设备水平较落后，以及其主要成分-淫羊藿药材的成份较为复杂，仅当时公开报道的成份就有数十种，因此导致对于喘可治注射液淫羊藿峰群的研究并不彻底，使得在当时的报道中通常将淫羊藿苷作为淫羊藿药材提取物中的主要有效成分。《中国药典》中Vol 12005.267部分记载了以淫羊藿苷作为淫羊藿的特征性成分并规定了其含量测定的方法，因此现有技术中一直以淫羊藿苷峰群(该淫羊藿苷峰群中包括淫羊藿苷、朝藿定C)代表淫羊藿苷作为检测喘可治注射液的含量测定及质量鉴定的标准。
[0004]但是，随着色谱技术的发展以及国内研究人员对淫羊藿药材的深入研究发现，在用于制备喘可治注射液的淫羊藿中药材一箭叶淫羊藿中，淫羊藿苷并不是其含量最高的成份，朝藿定C的含量要远高于其他成份。由此测得喘可治注射液中的朝藿定C的含量要远高于淫羊藿苷，并且诸多相关文献资料及多批样品的测定结果均证明了这一结论。这即导致现执行标准中仅以淫羊藿苷来计算含量限度的标准显得并不合理，喘可治注射液应以朝藿定C和淫羊藿苷之和来计算。更重要的是，按现执行标准【含量测定】项下对“淫羊藿苷”的检测方法进行测定，并不能将朝藿定C和淫羊藿苷的主峰进行区分，导致测定含量实际是两者的重叠峰之和，无法准确评价喘可治注射液的有效成分含量情况，使得对其质量的控制存在标准不一的问题。
【发明内容】
[0005]为此，本发明所要解决的技术问题在于现有标准中对喘可治注射液的检测方法无法准确评定其质量的问题，进而提供一种可准确测定喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量的检测方法，进而全面、准确的控制喘可治注射液的质量。
[0006]为解决上述技术问题，本发明的提供了一种喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C的含量检测方法，包括如下步骤:
[0007] 对照品溶液的制备:分别精密称取朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作为对照品储备液；精密吸取所述对照品储备液各1ml，并分别加入由体积比为50-60:50-40的甲醇_1_2%乙酸混合液稀释，并定容至1ml,即得；[0008]供试品溶液的制备:精密吸取所述喘可治注射液lml，并分别加入由体积比为50-60:50-40的甲醇-1-2%乙酸混合液稀释定容至10mL，即得；
[0009]色谱条件与系统适用性试验:照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1-2%的乙酸为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:O-1min,流动相A:流动相B为27%:73%— 30%:70%；l-4min,流动相A:流动相B为30%:70%— 20%:80%;4-6min，流动相 A:流动相 B 为 20%:80%— 27%:73% ;6_20min，流动相A:流动相 B 为 27%:73%^ 27%:73%;20-30min，流动相 A:流动相 B 为 27%:73%^ 80%:20% ;控制流动相流速为0.8-1.2ml/min ;控制柱温25_35°C ;检测波长为268_270nm ;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000 ；
[0010]测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定并计算。
[0011]所述的含量检测方法，包括如下步骤:
[0012]对照品溶液的制备:分别精密称取朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作为对照品储备液；精密吸取所述对照品储备液各1ml，并分别加入由体积比为55:45的甲醇-1.5%乙酸混合液稀释，并定容至10ml，SP得;
[0013]供试品溶液的制备:精密吸取所述喘可治注射液lml，并分别加入由体积比为55:45的甲醇-1.5%乙酸混合液稀释定容至1mL,即得；
[0014]色谱条件与系统适用性试验:照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1.5%的乙酸为流动相B进行梯度洗脱，控制流动相流速为lml/min ;控制柱温30°C ;检测波长为270nm ;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000 ；
[0015]测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定并计算。
[0016]所述的含量检测方法，在所述对照品溶液、供试品溶液制备步骤中，还包括将定容后的溶液采用0.45 μ m微孔滤膜滤过的步骤。
[0017]所述的含量检测方法，在所述对照品溶液制备步骤中，还包括将所述朝藿定C、淫羊藿苷对照品经五氧化二磷减压干燥12_16h的步骤。
[0018]所述的含量检测方法，所述喘可治注射液的原料药组成为:巴戟天5-50重量份，淫羊藿30-120重量份。
[0019] 所述的含量检测方法，所述喘可治注射液的制备方法为:按照选定重量份数取巴戟天、淫羊藿进行前处理工序，从众多的杂乱药材中拣选上好的药材，而后用水多次清洗，除去沙土、泥垢，将淫羊藿切成Icm左右小段、60°C以下干燥；巴戟天60°C以下干燥后，粉碎成20目粗粉；然后用此净原料进行第二提取工序，巴戟天净原料依次用8、7、6倍量水分别提取1.5、1、1小时，提取液浓缩成50°C下相对密度至1.2时，加入乙醇使含醇量达60%，回收乙醇,浓缩至相对密度为1.1时,分次上聚酰胺柱吸附,用水和一种30%大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析出结晶，在80°C以下真空干燥，得巴戟天提取物；淫羊藿净原料依次用15、10、10倍量水分别提取1.5、1、1小时，提取液浓缩成50°C下相对密度至1.2时，加入乙醇使含醇量达70%，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种35%大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析出结晶，在80°C以下真空干燥，得淫羊藿提取物；提取物用水配制成溶液，滤棒粗滤、再用滤球和0.45滤膜过滤、灌封、115°C 30分钟灭菌、用色水捡漏、灯检、印字、然后包装入库；其中安瓿处理提前备好:用纯水粗洗、注射用水精洗、最后灭菌干燥，用于灌封，即得。
[0020]本发明提供了一种所述的含量检测方法在喘可治注射液质量检测及控制领域的应用。
[0021]本发明提供了一种所述的含量检测方法在淫羊藿药材质量检测及控制领域的应用。
[0022]本发明所述的喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量测定方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1-2%乙酸为流动相B，流速为
0.8-1.2ml/min进行梯度洗脱检测喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量，本方法使用同一流动相系统，即可一次性完成喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C的含量测定，能够快速、简便的获知该产品的质量情况，解决了现有技术中喘可治注射液所使用的现执行标准【含量测定】项下“淫羊藿苷”的检测方法以及含量限度不合理导致喘可治注射液的淫羊藿苷的含量测定不合格的问题，并且本发明实验例中对该含量测定方法进行了完善的方法学验证，试验结果证明，本发明的方法可用来测定喘可治注射液的含量，其测定得到喘可治注射液朝藿定C的含量远远大于淫羊藿苷的含量，该测定结果与现有技术中相关文献资料报道的结果基本一致，本发明的方法可以替代喘可治注射液的执行标准【含量测定】项下“淫羊藿苷”的检测方法。 [0023]实验例
[0024]本发明通过下述实验例证明本发明所述方案的技术效果。
[0025]1.试验材料与方法
[0026]1.1试验仪器及试剂:
[0027]仪器:HP1050Series高效液相色谱仪，Agilent LC/MS Systems 工作站，HP79855AAutosampler 自动进样器；
[0028]试剂:乙腈、甲醇、乙酸、磷酸，均为色谱纯；
[0029]喘可治注射液样品:广州万正药业有限公司生产，批号为20090904、20091101、20091102、20100102、20100103、20100104、20100302、20100303、20100304 ；
[0030]淫羊藿苷对照品、朝藿定C对照品:购于中国食品药品检定研究院；
[0031]淫羊藿提取物:按照实施例1方法制得，批号为20090501、20090801、20091101。
[0032]1.2试验方法:
[0033]对照品溶液的制备:分别精密称取经五氧化二磷减压干燥12h的朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作为对照品储备液，精密吸取所述对照品储备液各1ml，分别置于1ml量瓶中，随后各加入体积比为55:45的甲醇-体积浓度1.5%乙酸的混合液稀释定容至刻度，摇匀，经0.45 μ m微孔滤膜滤过，即得；
[0034]阴性对照品溶液:不含淫羊藿提取物，其它与喘可治注射液相同，由广州万正药业有限公司提供；
[0035]供试品溶液的制备:精密吸取喘可治注射液1ml，置1ml量瓶中，加入体积比为55:45的甲醇-体积浓度1.5%乙酸的混合液稀释定容至刻度，摇匀，经0.45 μ m微孔滤膜滤过，即得；
[0036]色谱条件与系统适用性试验:照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以体积浓度1.5%乙酸为流动相B，流速为1.0ml/min进行梯度洗脱；柱温:30°C ;检测波长为270nm ;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000 ；
[0037]所述梯度洗脱程序具体为:0-lmin，流动相A:流动相B为27%:73%—30%:70%;l-4min,流动相A:流动相B为30%:70%^ 20%:80%;4_6min,流动相A:流动相B为20%:80%^ 27%:73% ;6-20min，流动相 A:流动相 B 为 27%:73%^ 27%:73% ;20_30min，流动相 A:流动相 B 为 27%:73% — 80%:20% ;
[0038]测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；
[0039]所述喘可治注射液为每1ml含朝藿定C C39H50O19和淫羊藿苷C33H4tlO15,按淫羊藿苷C33H40O15 计，总和不得少于 0.48mg, Img C39H50O19 相当于 0.8224mg C33H40O150
[0040]2方法学验证:
[0041]2.1阴性干扰试验:
[0042]精密吸取阴性对照品溶液，按1.2项的试验方法中制备的朝藿定C对照品储备液、按1.2的试验方法中制备淫羊藿苷对照品储备液各1ml，置1ml量瓶中，加甲醇:体积浓度1.5%乙酸=55:45的混合液稀释至刻度，摇匀，分别精密量取20 μ 1，按1.2的试验方法中的色谱条件与系统适用性试验测定，考察阴性对照液是否对主成分峰存在检测干扰。试验结果见下表1，色谱图见附图1。
[0043]表1阴性干扰试验结果
[0044]
【权利要求】
1.一种喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C的含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤: 对照品溶液的制备:分别精密称取朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇溶解分别制成每Irnl含0.8mg、0.02mg的溶液，作为对照品储备液；精密吸取所述对照品储备液各lml，并分别加入由体积比为50-60:50-40的甲醇_1_2%乙酸混合液稀释，并定容至10ml，即得； 供试品溶液的制备:精密吸取所述喘可治注射液1ml，并分别加入由体积比为50-60:50-40的甲醇-1-2%乙酸混合液稀释定容至10mL，即得； 色谱条件与系统适用性试验:照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ;以乙腈为流动相A，以体积浓度1-2%的乙酸为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱:O-1min,流动相A:流动相B为27%:73%— 30%:70%；l-4min,流动相A:流动相B为30%:70%— 20%:80%;4-6min，流动相 A:流动相 B 为 20%:80%^ 27%:73% ;6_20min，流动相A:流动相 B 为 27%:73%^ 27%:73%;20-30min，流动相 A:流动相 B 为 27%:73% — 80%:20% ;控制流动相流速为0.8-1.2ml/min ;控制柱温25_35°C ;检测波长为268_270nm ;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000 ； 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μ 1，注入液相色谱仪，测定并计笪
ο
2.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，包括如下步骤:对照品溶液的制备:分别精密称取朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作为对照品储备液；精密吸取所述对照品储备液各lml，并分别加入由体积比为55:45的甲醇-1.5%乙酸混合液稀释，并定容至10ml，即得；供试品溶液的制备:精密吸取所述喘可治注射液1ml，并分别加入由体积比为55:45的甲醇-1.5%乙酸混合液稀释定容至1mL,即得；色谱条件与系统适用性试验:照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1.5%的乙酸为流动相B进行梯度洗脱，控制流动相流速为lml/min ;控制柱温30°C ;检测波长为270nm ;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000 ；测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定并计笪
ο
3.根据权利要求1或2所述的含量检测方法，其特征在于，在所述对照品溶液、供试品溶液制备步骤中，还包括将定容后的溶液采用0.45 μ m微孔滤膜滤过的步骤。
4.根据权利要求1-3任一所述的含量检测方法，其特征在于，在所述对照品溶液制备步骤中，还包括将所述朝藿定C、淫羊藿苷对照品经五氧化二磷减压干燥12-16h的步骤。
5.根据权利要求1-4任一所述的含量检测方法，其特征在于，所述喘可治注射液的原料药组成为:巴戟天5-50重量份，淫羊藿30-120重量份。
6.根据权利要求5所述的含量检测方法，其特征在于，所述喘可治注射液的制备方法为: 按照选定重量份数取巴戟天、淫羊藿进行前处理工序，从众多的杂乱药材中拣选上好的药材，而后用水多次清洗，除去沙土、泥垢，将淫羊藿切成Icm左右小段、60度以下干燥；巴戟天60度以下干燥后，粉碎成20目粗粉；然后用此净原料进行第二提取工序，巴戟天净原料依次用8、7、6倍量水分别提取1.5、1、I小时，提取液浓缩成50度下相对密度至1.2时，加入乙醇使含醇量达60%，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种30 %大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析出结晶，在80度以下真空干燥，得巴戟天提取物；淫羊藿净原料依次用15、10、10倍量水分别提取1.5、1、I小时，提取液浓缩成50度下相对密度至1.2时，加入乙醇使含醇量达70%，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种35%大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析出结晶，在80度以下真空干燥，得淫羊藿提取物；提取物用水配制成溶液，滤棒粗滤、再用滤球和0.45滤膜过滤、灌封、115度30分钟灭菌、用色水捡漏、灯检、印字、然后包装入库；其中安瓿处理提前备好:用纯水粗洗、注射用水精洗、最后灭菌干燥，用于灌封，即得。
7.一种根据权利要求1-6任一所述的含量检测方法在喘可治注射液质量检测及控制领域的应用。
8.一种根据权利要求1-6任一所述的含量检测方法在淫羊藿药材质量检测及控制领域的应用 。
【文档编号】G01N30/02GK104034815SQ201410259478
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月11日 优先权日:2014年6月11日
【发明者】许铮弟 申请人:广州万正药业有限公司