一种利用比浊法测定鹿毛、饲料、鹿血样品中总硫的方法
【专利摘要】一种利用比浊法测定鹿毛、饲料、鹿血样品中总硫的方法，包括以下步骤：(1)试样消化：以浓硝酸、高氯酸和1.5％亚晒酸三者体积比为7∶2∶3组合成混合消化剂消化，其中，亚硒酸添加浓度为1.5～2.0％；(2)标准典线制作；(3)生物样品测定：用3ml浓度为3％吐温80保护剂在消化定容后75～120min内检测。本发明克服了重量法对含硫量较微和大批量样品分析中的不足，为大批量含硫量变化较大的鹿毛、饲料、鹿血生物样品中硫的测定提供了一个简单、快速、准确的方法。
【专利说明】-种利用比浊法测定鹿毛、饲料、鹿血样品中总硫的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种测定生物样品中总硫的方法，具体涉及一种利用比浊法测定鹿 毛、饲料、鹿血样品中总硫的方法。
【背景技术】
[0002] 目前，为了研究塔里木马鹿食毛症与硫含量关系，很有必要对其被毛、血液和采食 饲料中硫元素进行测定。然而，至今有关元素硫微量分析的文献报道并不多，主要集中在土 壤、岩石、石化等产品上，而生物样品中硫元素的分析报道较少。近些年来，硫测定方法主要 有比浊法、容量法和重量法三种。其中，重量法虽然准确，但手续繁长，不经济，而且样品前 处理过程非常复杂；容量法较重量法快速，但灵敏度差，准确性差，尤其对含有微量硫的生 物样品容量法就更难适用。比浊法较前两种方法快速、准确、经济，但未见分析资料报道对 液体、毛发等样品前处理过程，而且分析条件报道也很不统一，给分析测试工作带来了诸多 不便。因此，急需探索筛选出一个快速、灵敏准确，适合大批量鹿毛、饲料、鹿血样品中硫元 素的分析方法。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是，提供一种利用比浊法简单、快速、灵敏准确地测定 鹿毛、饲料、鹿血样品中总硫的方法。
[0004] 本发明解决其技术问题采用的技术方案是，一种利用比浊法测定鹿毛、饲料、鹿血 样品中总硫的方法，包括以下步骤： (1) 试样消化：先将鹿毛洗净、脱脂、干燥，或者用生理盐水配制成的1%肝素溶液的鹿 血用肝素40ul抗凝保存，接着平行称取0. 15g鹿毛、饲料样品或0. 15?2ml鹿血样品三 份，分别置于三个1〇〇毫升烧瓶或烧杯中，然后分别加入消化剂浓硝酸和高氯酸，在电炉上 加热，待消化液沸腾时移开电炉，并加入1.5%亚硒酸消化剂，复置于电炉上加热沸腾，其 中，加入消化剂浓硝酸、高氯酸、0.5%?1.5%亚晒酸三者的体积比为7 : 2 : 3;待消化 液呈淡黄色、清亮快干时，将所述烧瓶或烧杯移开电炉，稍冷加入10%盐酸I. 5ml继续加热 lmin，最后将消化液移入IOOml容量瓶中，用蒸馏水充分洗涤烧瓶后，把洗涤液一并移入容 量瓶，并定容至刻度，以同样方式做一空白消化； (2) 标准典线制作：取7只50ml容量瓶并编号，每只加入3.5ml甘油，10%盐酸2ml， 再依次加入硫的标准工作液〇? 〇、l. 〇、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0ml，其中硫含量依次为0? 0、 0. 1、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0mg/50ml，然后加用BaCl2-吐温80溶液10ml，用水补充至刻度定 容摇匀，并静置75?120min后于500nm处比色，以空白调零点，以已知50ml容量瓶内硫的 毫克数为横坐标，所测得光密度为纵坐标绘制标准曲线，并求出回归方程； (3) 生物样品测定：取25ml容量瓶，加3. 5 %甘油4ml，10 %盐酸Iml和样品消化液 10ml，0. 5mol/L BaCl2-吐温80溶液10ml，摇匀、静置，75?120min后，于500nm处比色，以 空白调零点，以所得光密度在标准曲线上查出硫的毫克数，或以回归方程计算。
[0005] 进一步，步骤（1)中，所述鹿毛用500ml蒸溜水分三次浸洗并晾干，然后经70°C烘 干后用索氏提取法脱脂处理；所述肝素为低分子含量肝素（LMW-H);所述亚晒酸的浓度为 1. 5%。
[0006] 在本发明中，消化条件是决定分析结果是否可靠的条件之一，以消化剂组合浓硝 酸：高氯酸：1.5%亚晒酸=7 : 2 : 3不仅测定结果高，而且测定值变异也较小，不仅适 合于含硫量低的固体、液体样，也适合于含硫量高的毛发样。为了缓解结晶沉淀速度，以黄 色粘稠状液体吐温-80作为保护剂，可提高比浊读数的再现性和结果的可靠性，同时吸光 度在75?120min之间读数普遍比较稳定。
[0007] 本发明与"重量法"相比，对含硫量不等的生物样品中同一类样品所测定的结果进 行比较，结果均差异不显著（P>〇. 05)。由此，本发明克服了重量法对含硫量较微和大批量 样品分析中的不足，为大批量含硫量变化较大的鹿毛、饲料、鹿血生物样品中硫的测定提供 了一个简单、快速、准确的方法。
【专利附图】
【附图说明】
[0008] 图1为吸光度与硫含量（y g)标准曲线。
[0009] 图2为不同浓度吐温-80测定时吸光度随时间变化曲线。
【具体实施方式】
[0010] 1、材料
[0011] 选用南疆某马鹿场母鹿精饲料、血液和毛发。
[0012] 2、主要仪器
[0013] 选用分光光度计。
[0014] 3、试剂（试剂均为分析纯） 1) 浓硫酸 2) 高氯酸（70% ) 3) 亚硒酸（1. 5% ):称取3. OOg亚硒酸溶于200ml水中备用； 4) 标准硫贮备液：称取I. 3615g烘干K2SO4溶于IOOml水中，移入250ml容量瓶中定容 至刻度（该溶液Iml相当于Img硫）； 5) 标准硫工作液：取标准硫贮备液IOml于IOOml容量瓶中定容（该溶液Iml相当于 100 U g 硫）； 6) 0. 5mol/L BaCl2-吐温80溶液：称取无水氯化钡52. 07g溶于300ml水中，加入吐温 80 -定量剧烈振荡至溶解，再移入500ml容量瓶中加水定容至刻度； 7) 10盐酸溶液：取浓卤酸68ml加水182ml，摇匀备用； 8) 3. 5 %甘油：取甘油7ml加水定容至刻度摇匀备用； 9) EDTA-洗涤液：称取EDTANa2盐75g溶于500ml水中，再加入26gNa0H，待溶后移入 IOOOml容量瓶中定容，用于清洗器皿中所沾硫酸钡结晶。
[0015] 实施例1 :鹿毛、饲料、鹿血样品中总硫的测定方法 (1)试样消化 饲料、毛发样：先将饲料、毛发样洗净、脱脂、干燥，平行称取〇. 15g样品三份，分别置于 三个100毫升凯氏烧瓶中，再加入7ml的浓硝酸、2ml高氯酸消化剂在电炉上加热至沸，待消 化液沸腾时移开电炉，并加入1. 5%亚硒酸3ml，复置于电炉上加热沸腾。待消化液呈淡黄 色、清亮快干时，将烧瓶移开电炉，稍冷加入10%盐酸I. 5ml继续加热约lmin，以除去剩余 硝酸。再将消化液移入IOOml容量瓶中，用蒸馏水充分洗涤烧瓶后，把洗涤液一并移入容量 瓶，并定容至刻度，以同样方式做一空白消化。 血样：动物全血用肝素抗凝保存，取2ml分别置于三只1001烧怀中，加入上述消化剂消 化，消化方法同上。 (2) 标准典线制作 取50ml容量瓶7只并编号，每只加入3. 5ml甘油，10 %盐酸2ml，再依次加入硫的标 准工作液 〇? 〇、l. 〇、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0ml，其中硫含量依次为 0? 0、0? 1、0. 2、0. 4、0. 6、 0. 8、1. 0mg/50ml，然后加用BaCl2-吐温80溶液10ml，用水补充至刻度定容摇匀，并静置 75min后，于500nm处比色，以空白调零点。以已知50ml容量瓶内硫的毫克数为横坐标，所 测得光密度为纵坐标绘制标准曲线，见图1，并求出回归方程。 (3) 样品测定 取25ml容量瓶，加3. 5%甘油4ml，10%盐酸Iml和样品消化液10ml，BaCl2-吐温80 溶液l〇ml，摇匀，静置75min后，于500nm处比色，以空白调零点。以所得光密度在标准曲线 上查出硫的毫克数，或以回归方程计算。 (4) 计算
【权利要求】
1. 一种利用比浊法测定鹿毛、饲料、鹿血样品中总硫的方法，其特征在于，包括以下步 骤： (1) 试样消化：先将鹿毛洗净、脱脂、干燥，或者用生理盐水配制成的1 %肝素溶液的鹿 血用肝素40ul抗凝保存，接着平行称取0. 15g鹿毛、饲料样品或0. 15?2ml鹿血样品三 份，分别置于三个100毫升烧瓶或烧杯中，然后分别加入消化剂浓硝酸和高氯酸，在电炉上 加热，待消化液沸腾时移开电炉，并加入1.5%亚硒酸消化剂，复置于电炉上加热沸腾，其 中，加入消化剂浓硝酸、高氯酸、0.5%?1.5%亚晒酸三者的体积比为7 : 2 : 3;待消化 液呈淡黄色、清亮快干时，将所述烧瓶或烧杯移开电炉，稍冷加入10%盐酸1. 5ml继续加热 lmin，最后将消化液移入100ml容量瓶中，用蒸馏水充分洗涤烧瓶后，把洗涤液一并移入容 量瓶，并定容至刻度，以同样方式做一空白消化； (2) 标准典线制作：取7只50ml容量瓶并编号，每只加入3. 5ml甘油，10%盐酸2ml， 再依次加入硫的标准工作液〇? 〇、l. 〇、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10. 0ml，其中硫含量依次为0? 0、 0. 1、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0mg/50ml，然后加用BaCl2-吐温80溶液10ml，用水补充至刻度定 容摇匀，并静置75?120min后于500nm处比色，以空白调零点，以已知50ml容量瓶内硫的 毫克数为横坐标，所测得光密度为纵坐标绘制标准曲线，并求出回归方程； (3) 生物样品测定：取25ml容量瓶，加3. 5 %甘油4ml，10 %盐酸lml和样品消化液 10ml，0. 5mol/L BaCl2-吐温80溶液10ml，摇匀、静置，75?120min后，于500nm处比色，以 空白调零点，以所得光密度在标准曲线上查出硫的毫克数，或以回归方程计算。
2. 根据权利要求1所述的利用比浊法测定鹿毛、饲料、鹿血样品中总硫的方法，其特征 在于，步骤（1)中，所述鹿毛用500ml蒸溜水分三次浸洗并晾干，然后经70°C烘干后用索氏 提取法脱脂处理；所述肝素为低分子含量肝素；所述亚晒酸的浓度为1. 5%。
【文档编号】G01N21/82GK104406959SQ201410642976
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月13日 优先权日:2014年11月13日
【发明者】钱文熙, 许贵善, 张玲 申请人:塔里木大学