一种基于uhplc技术的补骨脂多成分qams检测方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方法,包括以下步骤：1）制备补骨脂待测样品；2）用UHPLC检测补骨脂的成分；3）用UHPLC检测异补骨脂素对照品；4）用异补骨脂为参照物内比法测定骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂查耳酮及补骨脂酚的含量；其在补骨脂质量控制补骨脂炮制中具有良好的应用。
【专利说明】一种基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方法及其应 用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种中药材活性成分检测方法，更具体的说涉及一种基于UHPLC技术 的补骨脂多成分QAMS检测方法及其应用。 技术背景
[0002] 补骨脂为豆科植物补骨脂（PsoraleacorylifoliaL.)的干燥成熟果实，是常见 的药食同源的大宗药材，国外分布于印度、缅甸、斯里兰卡；国内除东北、西北地区外，各地 均有产，其主要产地有云南和四川，在安徽、江西等省区也有栽培；重庆市合川区为补骨脂 药材的道地产区之一，种植此药材已有上百年历史。补骨脂于唐宋时期引种到中国，沿用历 史悠久，早在《开宝本草》中就有其温肾助阳、纳气平喘，温脾止泻的记载，民间常以破故纸、 婆固脂、胡韭子、黑故子等别名沿用。现代药理研宄表明，补骨脂中多种类有效成分（香豆 素类、黄酮类、萜酚类成分等）具有显著的免疫调节，抗肿瘤，肝药酶诱导，壮骨，抗抑郁，抗 过敏等作用。补骨脂药材应用广泛，据不完全统计，中成药有近70个品种中有补骨脂的成 分；补骨脂又为药食同源品种，亦在食品与保健品开发中得到充分应用，并在驱杀害虫、日 用化工、改良土壤等方面应用上也有可观价值，加之其成本低廉，临床疗效显著，故补骨脂 的市场需求量大，全国年需求量为80, 000-100, 000kg，并成逐年上升趋势。故对其药材及炮 制饮片的工艺进行研宄，使补骨脂饮片质量得到整体提升，保证了饮片质量的稳定和临床 应用中的疗效和安全性；同时满足了市场需求，具有相当的市场需求和经济效益。
【发明内容】
[0003] 为解决上述问题，本发明提供了一种基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方 法，包括以下步骤：
[0004] 1)制备补骨脂待测样品；取过三号筛的样品粉末约0.5g，精密称定，置索氏提取 器中，加甲醇适量，加热回流提取2小时，放冷，转移至100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀，再取2mL提取液，用甲醇定容到10mL容量瓶中，过0. 22yL微孔滤膜，取续滤液，制得补 骨脂药材供试品溶液。
[0005] 2)用UHPLC检测补骨脂的成分；所述UHPLC的色谱条件为：色谱柱为 50mmX2. 0mm，1. 6ym色谱柱；流动相为乙腈-0. 2%冰醋酸水溶液，检测波长246nm;柱温 45°C;进样量4yL流速；0. 4mL/min;梯度洗脱为：
[0006] 0-0? 5min，23% 乙腈；
[0007] 0? 5-1. 2min，23 % -26 % 乙腈；
[0008] 1. 2-1. 9min，26% 乙腈；
[0009] 1. 9-5. 0min，26%-35% 乙腈；
[0010] 5. 0-8. 0min，35%-40% 乙腈；
[0011] 8. 0-10.Omin，40 %-55 % 乙腈；
[0012] 10. 0-13. 0min，55% 乙腈；
[0013] 13. 0-13. 5min，55%-75% 乙腈；
[0014] 13. 5-15. 8min，75% 乙腈；
[0015] 15. 8-16. 5min，75%-95% 乙腈。
[0016] 3)用UHPLC检测异补骨脂素对照品；
[0017] 精密称取补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素（补骨脂二氢黄 酮）、补骨脂定、补骨脂乙素（异补骨脂查耳酮）、补骨脂宁、补骨脂查耳酮及补骨脂酚对照 品适量，分别用甲醇溶解配制成一定质量浓度的储备液；精密吸取各对照品储备液适量， 置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成浓度分别为补骨脂素0. 326mg/mL、异补骨脂素 0? 165mg/mL、新补骨脂异黄酮0.371mg/mL、补骨脂甲素（补骨脂二氢黄酮）0? 168mg/mL、补 骨脂定〇? 213mg/mL、补骨脂乙素（异补骨脂查耳酮）0? 390mg/mL、补骨脂宁0? 743mg/mL、补 骨脂查耳酮〇. 〇32mg/mL、补骨脂酚5. 055mg/mL的混合对照品溶液；对照品UHPLC色谱图见 图1所示。
[0018] 4)用异补骨脂为参照物内比法测定骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂 甲素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂查耳酮及补骨脂酚的含量。
[0019] 上述任一项所述的基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方法在补骨脂炮制 中的应用。
[0020] 本发明的有益技术效果是：本发明提供了一种补骨脂成分低成本高效检测方法， 其在补骨脂质量控制补骨脂炮制中具有良好的应用。
【专利附图】
【附图说明】
[0021] 图1、混合对照品UHPLC图谱；
[0022] 图2、补骨脂药材样品UHPLC图谱；
[0023] 图3、补骨脂药材混合对照（A)、样品（B)、盐炙品（C)UHPLC图谱对比；
[0024] 图4、闷润时间（A)、炒制温度⑶对香豆素类含量（％ )影响的3D效应曲面图；
[0025] 图5、D-最优炮制设计中闷润时间（A)、加盐量（C)对香豆素类含量（％ )影响的 3D效应曲面图；
[0026] 图6、D-最优炮制设计中炒制温度（B)、加盐量（C)对香豆素类含量（％ )影响的 3D效应曲面图；
[0027]图7、D-最优炮制设计中闷润时间（A)、炒制温度⑶对黄酮类含量（％ )影响的 3D效应曲面图；
[0028] 图8、D-最优炮制设计中闷润时间（A)、加盐量（C)对香黄酮类含量（％ )影响的 3D效应曲面图；
[0029] 图9、D_最优炮制设计中炒制温度（B)、加盐量（C)对黄酮类含量（％ )影响的3D 效应曲面图；
[0030] 图l〇、D-最优炮制设计中闷润时间（A)、炒制温度（B)对单萜酚类含量（％ )影响 的3D效应曲面图；
[0031] 图11、D-最优炮制设计中闷润时间（A)、加盐量（C)对单萜酚类含量（％ )影响的 3D效应曲面图；
[0032] 图12、D_最优炮制设计中炒制温度（B)、加盐量（C)对单萜酚类含量（％ )影响的 3D效应曲面图；
[0033] 其中，图1至图3中，数字标识为：1补骨脂素对照品，2异补骨脂素对照品，3新补 骨脂异黄酮对照品，4补骨脂甲素对照品5补骨脂定对照品，6补骨脂乙素对照品，7补骨 脂宁对照品，8补骨脂查耳酮对照品，9补骨脂酚对照品。
【具体实施方式】
[0034] 实施例1基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方法的建立
[0035] UHPLC色谱条件
[0036] 经过考察得到补骨脂药材UHPLC方法，色谱柱为Shim-packXR-ODSIII色谱 柱（50_X2. 0_，1. 6ym;S/N11122273);流动相为乙腈-0. 2 %冰醋酸水溶液，梯 度洗脱：〇_〇. 5min，23 % 乙腈；0? 5-1. 2min，23 % -26 % 乙腈；1. 2-1. 9min，26 % 乙腈； 1. 9-5.Omin，26 % -35% 乙腈；5. 0-8.Omin，35 % -40 % 乙腈；8. 0-10.Omin，40 % -55% 乙 腈；10. 0-13.Omin，55 % 乙腈；13. 0-13. 5min，55 % -75 % 乙腈；13. 5-15. 8min，75 % 乙腈； 15. 8-16. 5min，75% -95 % 乙腈；流速：0. 4mL/min;检测波长 246nm;柱温 45°C;进样量 4yL〇
[0037] 对照品溶液的制备
[0038] 精密称取补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素（补骨脂二氢黄 酮）、补骨脂定、补骨脂乙素（异补骨脂查耳酮）、补骨脂宁、补骨脂查耳酮及补骨脂酚对照 品适量，分别用甲醇溶解配制成一定质量浓度的储备液；精密吸取各对照品储备液适量， 置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，配制成浓度分别为补骨脂素0.326mg/mL、异补骨脂素 0?165mg/mL、新补骨脂异黄酮0.371mg/mL、补骨脂甲素（补骨脂二氢黄酮）0?168mg/mL、补 骨脂定〇? 213mg/mL、补骨脂乙素（异补骨脂查耳酮）0?390mg/mL、补骨脂宁0?743mg/mL、补 骨脂查耳酮〇. 〇32mg/mL、补骨脂酚5. 055mg/mL的混合对照品溶液，对照品UHPLC色谱图见 图1所示。
[0039] 供试品溶液的制备
[0040] 取样品粉末（过三号筛）约〇.5g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回 流提取2小时，放冷，转移至100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇勾，再取2mL提取液，用甲醇 定容到10mL容量瓶中，过0. 22yL微孔滤膜，取续滤液，制得补骨脂药材供试品溶液，补骨 脂样品溶液UHPLC色谱图见图2所示。
[0041] 外标法线性关系考察
[0042] 取混合对照品加甲醇稀释成一系列浓度的混合对照品溶液，在2. 1. 1色谱条件 下，注入UHPLC液相色谱仪，以对照品含量为横坐标，峰面积积分为纵坐标，绘制标准曲线 详见表1。
[0043] 表1各对照品的线性方程、相关系数及线性范围考察结果
[0044]
【权利要求】
1. 一种基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 1) 制备补骨脂待测样品； 2) 用UHPLC检测补骨脂的成分； 3) 用UHPLC检测异补骨脂素对照品； 4) 用异补骨脂为参照物内比法测定骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲 素、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂查耳酮及补骨脂酚的含量。
2. 根据权利要求1所述的基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方法，其特征在 于：所述UHPLC的色谱条件为：色谱柱为50mmX 2. Omm，1. 6Mm色谱柱；流动相为乙腈-0. 2% 冰醋酸水溶液，检测波长246nm ;柱温45°C ;进样量4ML流速；0. 4 mL/min ;梯度洗脱为： 〇-〇? 5 min，23% 乙腈； 0? 5-1. 2 min，23%-26% 乙腈； 1. 2-1. 9 min，26% 乙腈； 1. 9-5. 0 min，26%-35% 乙腈； 5. 0-8. 0 min，35%-40% 乙腈； 8. 0-10. 0 min，40%-55% 乙腈； 10. 0-13. 0 min，55% 乙腈； 13. 0-13. 5 min，55%-75% 乙腈； 13. 5-15. 8 min，75% 乙腈； 15. 8-16. 5 min，75%-95% 乙腈。
3. 根据权利要求1所述的基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方法，其特征在 于：步骤1)制备补骨脂待测样品为：取过三号筛的样品粉末约0. 5g，精密称定，置索氏提取 器中，加甲醇适量，加热回流提取2小时，放冷，转移至100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇 匀，再取2mL提取液，用甲醇定容到10mL容量瓶中，过0. 22ML微孔滤膜，取续滤液，制得补 骨脂药材供试品溶液。
4. 权利要求1-3任一项所述的基于UHPLC技术的补骨脂多成分QAMS检测方法在补骨 脂炮制中的应用。
【文档编号】G01N30/02GK104458941SQ201410696341
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月27日 优先权日:2014年11月27日
【发明者】励娜, 张小梅, 梁旭明, 姚媛媛, 杨荣平 申请人:重庆市中药研究院