检测综合42项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒的制作方法

本实用新型涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种检测综合42项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒。

背景技术：

目前，临床实验室检测样本中的42项常见食物过敏原，一般采用酶联免疫法(Elisa)进行检测，该方法是将过敏原包被在96微孔板中，通过临床样本的孵育反应，最后通过酶标仪进行结果判读。

这种检测方法由于一次实验只能检测单一指标，通量低，检测成本高，对于扩大过敏原检测项目存在着局限性。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种检测综合42项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，从而解决现有技术中存在的前述问题。

为了实现上述目的，本实用新型采用的技术方案如下：

一种检测综合42项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，包括：膜条，平行设置在所述膜条上的42条检测线、质控线和临界值线，所述42条检测线依次由：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、螃蟹、鸡蛋、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦、西瓜、橄榄、蓝莓、菠萝、橘子、桃、苹果、榴莲、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、草鱼、带鱼、扇贝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火鸡、羊肉、腰果、花生共42种常见食物特异性过敏原包被。

优选地，还包括透明的PVC胶片，所述膜条固定在所述PVC胶片上。

优选地，所述膜条为硝酸纤维素膜。

优选地，还包括样本稀释液、浓缩洗液、酶结合物和底物液，所述样本稀释液为含有山羊血清的Tris缓冲液，所述浓缩洗液为10×的Tris缓冲液，所述酶结合物为碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，所述底物液为NBT/BCIP。

本实用新型的有益效果是：本实用新型实施例提供的检测42项常见食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，采用线性免疫分析法，将牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、螃蟹、鸡蛋、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦、西瓜、橄榄、蓝莓、菠萝、橘子、桃、苹果、榴莲、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、草鱼、带鱼、扇贝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火鸡、羊肉、腰果、花生共42种常见食物特异性IgG过敏原和质控线及临界值线平行包被在硝酸纤维素膜上，通过一份临床样本和一次检测反应，即可检测人血清中的42种食物过敏原的IgG抗体，克服了当前Elisa方法学试剂盒相关抗体逐一单独检测在操作上的繁琐，大大提高检测效率。

附图说明

图1是本实用新型提供的免疫印迹试剂盒的膜条的布线结构示意图；

图2是本实用新型提供的免疫印迹试剂盒的膜条的布线截面示意图。

图中，各符号的含义如下：

1质控线，2临界值线，3-44依次为包被有如下42种常见食物特异性过敏原的检测线：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、螃蟹、鸡蛋、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦、西瓜、橄榄、蓝莓、菠萝、橘子、桃、苹果、榴莲、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、草鱼、带鱼、扇贝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火鸡、羊肉、腰果、花生，45PVC胶片，46双面胶，47膜条。

具体实施方式

为了使本实用新型的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图，对本实用新型进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施方式仅仅用以解释本实用新型，并不用于限定本实用新型。

如图1-2所示，本实用新型实施例提供了一种检测综合42项食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，包括：膜条47，平行设置在所述膜条上的42条检测线3-44、质控线1和临界值线2，42条检测线3-44依次由：牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、螃蟹、鸡蛋、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦、西瓜、橄榄、蓝莓、菠萝、橘子、桃、苹果、榴莲、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、草鱼、带鱼、扇贝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火鸡、羊肉、腰果、花生共42种常见食物特异性过敏原包被。

上述试剂盒中，42种常见食物过敏原的组合符合国人饮食习惯，进行42项综合检测更直观准确，为过敏疾病的预防及预后提供全面指导。

本实施例提供的试剂盒，还包括透明的PVC胶片45，膜条47固定在PVC胶片45上。

实际制作过程中，可以使用双面胶46将膜条47固定在PVC胶片45上。

本实施例提供的试剂盒，膜条47为硝酸纤维素膜。

过敏原的包被通过自动化点样仪高精度包被于硝酸纤维素膜，可根据检测需求进行合理排序和组合。

本实施例提供的试剂盒，还包括样本稀释液、浓缩洗液、酶结合物和底物液，所述样本稀释液为含有山羊血清的Tris缓冲液，所述浓缩洗液为10×的Tris缓冲液，所述酶结合物为碱性磷酸酶标记的羊抗人IgG，所述底物液为NBT/BCIP。

上述试剂盒的实验原理为，将包被有42种常见食物过敏原的膜条用样本缓冲液进行封闭处理，封闭膜上的非特异位点，从而阻止非特异性反应的发生。检测时，膜条与稀释的血清样本共同温育使血清中的抗体与膜条上的抗原结合。利用碱性磷酸酶标记羊抗人IgG检测此结合抗体。加入底物后，结合抗体上标记的酶催化底物反应，并在过敏原包被的位置产生可见的条带。根据条带是否显色，可判断受试者的抗体特性，如果明显显色判定为该抗体阳性，如果不显色则判定为阴性。通过以硝酸纤维素膜为载体进行包被，实现42种常见食物过敏原联合检测，大大提高了检测效率。

使用上述试剂盒，可以通过一份临床样本和一次检测同时检测42种常见食物过敏原，克服了多种过敏原逐一检测在操作上的繁琐，大大提高操作效率，有益于实现高通量。

上述结构的免疫印迹试剂盒，膜条的制备方法，包含以下步骤：

1)配制过敏原包被液，使用包被缓冲液，将共42种食物特异性过敏原和抗人IgG，人IgG稀释至相对的包被浓度。

2)使用高精度自动点样仪将配制好的过敏原包被液点样包被在硝酸纤维素膜上，形成检测线、临界值线和质控线。

3)使用惰性蛋白如牛血清白蛋白、酪蛋白或新生牛血清进行非特异性封闭。

4)将封闭好的膜条至于湿度低于30％的条件下干燥。

5)通过定制的双面胶将干燥后的膜条粘贴按相关序列固定于PVC衬板上。

6)使用斩切机将组装好的条斩切成单人份。

本试剂盒的其他组分包括：

上述结构的免疫印迹试剂盒，在使用时，首先进行以下的预处理：

浓缩洗液的稀释：稀释前应使其全部溶解。将浓缩洗液(10×)与蒸馏水或纯化水1:9稀释。例如：1份浓缩洗液(10×)加9份蒸馏水或纯化水。

酶结合物的配制：10倍浓缩。吸取所需酶结合物，并用样本缓冲液1:10稀释。

其使用方法包括以下步骤：

1.将抗原膜条置于孵育槽中，带有文字标记的一面朝上；每槽加入1.5ml样本缓冲液，将膜条在室温下摇摆摇床轻微晃动5分钟，其后弃去孵育槽中液体。

2.每槽加入1.5ml稀释的血清样品，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育30分钟。

3.弃去孵育槽中液体，每槽加入1.5ml清洗缓冲液，室温下在摇摆摇床上轻微晃动5分钟，弃去孵育槽中液体。再重复洗涤2次。

4.弃去孵育槽中液体，每槽加入1.5ml稀释后的酶结合物，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育30分钟。

5.重复步骤3。

6.弃去孵育槽中液体，每槽加入1.5ml底物液，室温下在摇摆摇床上轻微晃动孵育10分钟。

7.弃去孵育槽中液体，每槽加入1.5ml蒸馏水或纯化水，室温下在摇摆摇床上轻微晃动1分钟，弃去孵育槽中液体。再重复洗涤2次。.

8.膜条干燥后，可将抗原膜条粘贴于结果记录单上，以便保存实验结果。

上述结构的免疫印迹试剂盒，其性能鉴定的方法为：

位于检测膜条标志下方反应区域依次有质控线、临界值线。如果质控线出现强的颜色反应，临界值线有微弱显色，并且质控线显色强于临界值线，则说明实验结果有效。如果质控线未出现强的颜色反应，则说明实验结果无效。

可将结果判读卡的标示条带与膜条上的相应条带对齐，比对检测条带位置。

根据抗原条带显色程度，可将结果判读为阴性和阳性。

阳性：抗原条带显色较临界值线一致或更深；

阴性：抗原条带显色较临界值线浅。

通过采用本实用新型公开的上述技术方案，得到了如下有益的效果：本实用新型实施例提供的检测42项常见食物过敏原IgG抗体的免疫印迹试剂盒，采用线性免疫分析法，将牛肉、鸡肉、鳕鱼、玉米、螃蟹、鸡蛋、蘑菇、牛奶、猪肉、大米、虾、大豆、西红柿、小麦、西瓜、橄榄、蓝莓、菠萝、橘子、桃、苹果、榴莲、芒果、香蕉、哈密瓜、葡萄、柚子、草莓、龙虾、三文鱼、沙丁鱼、草鱼、带鱼、扇贝、蛤、芝麻、菠菜、青豆、火鸡、羊肉、腰果、花生共42种常见食物特异性IgG过敏原和质控线及临界值线平行包被在硝酸纤维素膜上，通过一份临床样本和一次检测反应，即可检测人血清中的42种食物过敏原的IgG抗体，克服了当前Elisa方法学试剂盒相关抗体逐一单独检测在操作上的繁琐，大大提高检测效率。

本说明书中的各个实施例均采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可。

本领域人员应该理解的是，上述实施例提供的方法步骤的时序可根据实际情况进行适应性调整，也可根据实际情况并发进行。

上述实施例涉及的方法中的全部或部分步骤可以通过程序来指令相关的硬件来完成，所述的程序可以存储于计算机设备可读取的存储介质中，用于执行上述各实施例方法所述的全部或部分步骤。所述计算机设备，例如：个人计算机、服务器、网络设备、智能移动终端、智能家居设备、穿戴式智能设备、车载智能设备等；所述的存储介质，例如：RAM、ROM、磁碟、磁带、光盘、闪存、U盘、移动硬盘、存储卡、记忆棒、网络服务器存储、网络云存储等。

最后，还需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、商品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、商品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、商品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上所述仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视本实用新型的保护范围。