本发明涉及化学分析
技术领域：
，具体地说涉及一种婴幼儿乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量测定方法。
背景技术：
：1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯(opo)是2008年卫生部新增加的一种新资源食品，它是类似于母乳脂肪的一种甘油三酯。母乳脂肪中约70％的棕榈酸连结在甘油三酯的sn-2位上，而sn-1，3位主要是不饱和脂肪酸。棕榈酸是人体重要的产能脂肪酸，它在甘油三酯上的位置对其消化和吸收有很大的影响，sn-2位上的棕榈酸能以sn-2位单甘脂的形式被吸收，而sn-1，3位上的棕榈酸则易与矿物质(钙、镁等)形成不溶性的盐流失掉，同时也造成矿物质和能量的流失。因此，1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯作为一种新型的食品添加剂，具有促进机体对能量吸收，促进钙、镁等骨骼矿物质吸收，缓解婴幼儿便秘等功能。目前，1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的研究在国外已逐步从实验室阶段转向工业化生产和应用，它主要应用于婴幼儿配方食品中。opo被作为一种显著有效的营养功能成分正在被广泛的添加到婴幼儿配方乳粉中，国际大型婴幼儿配方乳粉生产企业争相把“添加opo”作为宣传亮点，大量已经添加“opo”的婴幼儿配方乳粉正在市场上流通。然而，国内尚无任何关于opo的检测标准和检测方法，无法衡量婴幼儿配方乳粉中是否添加opo，添加量如何以及添加范围是否合理安全等问题。因此，亟待建立婴幼儿配方乳粉中opo含量检测方法。技术实现要素：针对现有技术的种种不足，为了解决上述问题，现提出一种婴幼儿乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量测定方法，该方法操作简单、准确可靠，可准确测定婴幼儿乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种婴幼儿乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量测定方法，该方法包括如下步骤：s1：制备混合标准溶液：1)称取100mg十七碳酸甘油三酯标准品于100ml容量瓶中，加入适量正己烷使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，得到十七碳酸甘油三酯标准溶液；2)称取100mg1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准品于100ml容量瓶中，加入适量正己烷使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，得到1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准溶液；3)移取2ml十七碳酸甘油三酯标准溶液和2ml1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准溶液于10ml容量瓶中，加入适量正己烷稀释至刻度，摇匀，得到混合标准溶液；s2：制备试样溶液：1)使用毛氏提取法提取婴幼儿乳粉中的脂肪；2)将提取出的脂肪用正己烷洗入容量瓶中，得到脂肪溶液；3)吸取脂肪溶液1ml于10ml容量瓶中，加入1ml十七碳酸甘油三酯标准溶液，用正己烷定容至刻度，摇匀，得到试样溶液；s3：在规定的色谱条件下，取混合标准溶液和试样溶液各1μl，分别注入气相色谱仪，记录所得的混合标准溶液中组分峰面积和试样溶液中组分的峰面积；s4：1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量计算公式如下：其中，wi-试样溶液中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量，单位为(g/100g)；ai-试样溶液中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯峰面积；as内-混合标准溶液中十七碳酸甘油三酯峰面积；v-试样溶液体积，单位为(ml)；c-混合标准溶液中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯浓度，单位为(μg/ml)；f-稀释倍数；as-混合标准溶液中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的峰面积；ay内-试样溶液中十七碳酸甘油三酯的峰面积；m–试样的质量，单位为(g)；进一步，所述气相色谱法检测条件为：气相色谱仪：带氢火焰离子化检测器；色谱柱：100％二甲基聚硅氧烷耐高温色谱柱(柱长15m，内径0.25mm，膜厚0.1μm)；进样口温度：320℃；检测器温度：370℃；程序升温：300℃，保持3min，以20℃/min的速率升温至380℃，保持10min；载气：氮气，恒压模式；进样体积：1.0μl。进一步，所述毛氏提取法提取婴幼儿乳粉中的脂肪包括如下步骤：1)称取混匀后的乳粉1g(精确至0.0001g)，加入10ml65℃±5℃的水，将试样洗入抽脂瓶的小球中，充分混合，直到试样完全分散，放入流动水中冷却；2)加入2.0ml氨水，充分混合后立即将抽脂瓶放入65℃±5℃的水浴中，加热15min-20min，不时取出振荡，取出后，冷却至室温，静止30s；3)加入10ml乙醇，缓和但彻底地进行混合，加入25ml乙醚，塞上瓶塞，按约100次/min振荡1min，抽脂瓶冷却后打开塞子，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈，使冲洗液流入抽脂瓶；4)加入25ml石油醚，塞上润湿的塞子，轻轻振荡30s后，静止至少30min，直到上层液澄清，并明显与水相分离；5)打开瓶塞，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶，如果两相界面低于小球与瓶身相接处，则沿瓶壁边缘慢慢地加入水，使液面高于小球和瓶身相接处，以便于倾倒；6)将上层液倒入已准备好的脂肪收集瓶中，避免倒出水层；7)重复步骤3-6，进行第二次提取，其中加入的乙醇为5ml、乙醚为15ml、石油醚为15ml；8)合并两次的提取液，采用旋转蒸发的方法除去脂肪收集瓶中的溶剂，得到提取出的脂肪。进一步，所述含量测定方法中采用的试剂为分析纯试剂，采用的水为gb/t6682中规定的一级水，本发明中所述的氨水、乙醇的纯度可用本领域常规使用纯度，较佳的选用分析纯；正己烷、乙醚和石油醚较佳的选用色谱纯。本发明所用试剂和原料均市售可得。进一步，1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字，在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值，不得超过算术平均值的10％。本发明的有益效果是：本发明提供的1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量测定方法操作简单，采用毛氏提取法提取乳粉中的脂肪后，稀释至合适浓度，通过气相色谱法使1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯从脂肪溶液中分离，通过与标准甘油三酯溶液加以比对而得以定性，用内标法定量，结果以碳数为c52的甘油三酯计其含量，该方法准确可靠，可准确测定配方乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量，具有规范化、准确化程度高，受环境变化影响小的特点。具体实施方式为了使本领域的人员更好地理解本发明的技术方案，下面对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的其它类同实施例，都应当属于本申请保护的范围。一种婴幼儿乳粉中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量测定方法，该方法包括如下步骤：s1：制备混合标准溶液：1)称取100mg十七碳酸甘油三酯标准品(美国nu-chek)于100ml容量瓶中，加入适量正己烷使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，得到十七碳酸甘油三酯标准溶液；2)称取100mg1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准品(瑞士sigma公司)于100ml容量瓶中，加入适量正己烷使之溶解，并稀释至刻度，摇匀，得到1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准溶液；3)移取2ml十七碳酸甘油三酯标准溶液和2ml1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯标准溶液于10ml容量瓶中，加入适量正己烷稀释至刻度，摇匀，得到混合标准溶液；s2：制备试样溶液：1)使用毛氏提取法提取婴幼儿乳粉中的脂肪，具体步骤如下：a)称取混匀后的乳粉(圣元优博系列)1g(精确至0.0001g)，加入10ml65℃±5℃的水，将试样洗入抽脂瓶的小球中，充分混合，直到试样完全分散，放入流动水中冷却；b)加入2.0ml氨水，充分混合后立即将抽脂瓶放入65℃±5℃的水浴中，加热15min～20min，不时取出振荡，取出后，冷却至室温，静止30s；c)加入10ml乙醇，缓和但彻底地进行混合，加入25ml乙醚，塞上瓶塞，按约100次/min振荡1min，抽脂瓶冷却后打开塞子，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈，使冲洗液流入抽脂瓶；d)加入25ml石油醚，塞上润湿的塞子，轻轻振荡30s后，静止至少30min，直到上层液澄清，并明显与水相分离；e)打开瓶塞，用少量的混合溶剂冲洗塞子和瓶颈内壁，使冲洗液流入抽脂瓶，如果两相界面低于小球与瓶身相接处，则沿瓶壁边缘慢慢地加入水，使液面高于小球和瓶身相接处，以便于倾倒；f)将上层液倒入已准备好的脂肪收集瓶中，避免倒出水层；g)重复步骤3-6，进行第二次提取，其中加入的乙醇为5ml、乙醚为15ml、石油醚为15ml；h)合并两次的提取液，采用旋转蒸发的方法除去脂肪收集瓶中的溶剂，得到提取出的脂肪。2)将提取出的脂肪用正己烷洗入25ml容量瓶中，并用正己烷定容至刻度，得到脂肪溶液；3)吸取脂肪溶液1ml于10ml容量瓶中，加入1ml十七碳酸甘油三酯标准溶液，用正己烷定容至刻度，摇匀，得到试样溶液；以上采用的试剂为分析纯试剂，其中，氨水、乙醇的纯度选用分析纯，正己烷、乙醚和石油醚较佳的选用色谱纯，采用的水为gb/t6682中规定的一级水，本发明所用试剂和原料均市售可得。s3：在规定的色谱条件下，取混合标准溶液和试样溶液各1μl，分别注入气相色谱仪，记录所得的混合标准溶液中组分峰面积和试样溶液中组分的峰面积；其中，所述气相色谱法检测条件为：气相色谱仪：带氢火焰离子化检测器；色谱柱：100％二甲基聚硅氧烷耐高温色谱柱(柱长15m，内径0.25mm，膜厚0.1μm)；进样口温度：320℃；检测器温度：370℃；程序升温：300℃，保持3min，以20℃/min的速率升温至380℃，保持10min；载气：氮气，恒压模式；进样体积：1.0μl。s4：1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯含量计算公式如下：其中，wi-试样溶液中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量，单位为(g/100g)；ai-试样溶液中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯峰面积；as内-混合标准溶液中十七碳酸甘油三酯峰面积；v-试样溶液体积，单位为(ml)；c-混合标准溶液中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯浓度，单位为(μg/ml)；f-稀释倍数；as-混合标准溶液中1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的峰面积；ay内-试样溶液中十七碳酸甘油三酯的峰面积；m–试样的质量，单位为(g)；计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字，在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值，不得超过算术平均值的10％。通过上述方法对同一婴幼儿奶粉样品进行6次同步实验，计算出1，3-二油酸-2-棕榈酸甘油三酯的含量，结果见表1：表1同一种婴幼儿奶粉的opo含量的测定样品opo峰面积保留时间(min)样品opo含量(mg/g)1194.148.1895.352194.288.1825.383196.448.1875.344196.218.1935.375195.868.1895.386197.898.1825.38由表1结果计算得到的相对标准偏差rsd＝0.33％，表明其重现性良好。通过上述方法在婴幼儿奶粉中加入不同量的opo标品，与本底做比较，对照标准曲线，结果如表2所示：表2回收率测定由表2可得，实验的回收率在95.8％～98.2％之间，表明本方法测定opo含量准确度很高。以上已将本发明做一详细说明，以上所述，仅为本发明之较佳实施例而已，当不能限定本发明实施范围，即凡依本申请范围所作均等变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖范围内。当前第1页12