本发明涉及生物学实验技术领域，进一步涉及流式细胞术的操作方法改良，具体涉及一种用于流式细胞学检测骨髓或外周血样本的前处理方法。
背景技术：
流式细胞术检测血液肿瘤已经被广泛使用，而前期处理属于质量控制中很重要的环节，前期操作处理不当，会造成数据分析时碎片过多，出现假阳性，造成误诊。传统处理方法由于方法学缺点，产生碎片量较大，在某些状态不佳的样本中，碎片量甚至会大于检测的细胞本身，严重影响数据分析。样本处理质量对流式细胞术分析至关重要，室温下溶血，裂解红细胞不充分，产生大量大小不均一的碎片，在25至50摄氏度之间，溶血效果差别很大，温度过低，溶血不充分，后期碎片难以有效除去，温度过高，会裂解有核细胞，严重影响实验结果。
技术实现要素：
本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种用于流式细胞学检测骨髓或外周血样本的前处理方法，以解决现有技术中在利用流式细胞术检测血液系统肿瘤时，处理骨髓以及外周血样本易产生大量碎片而影响分析的技术问题。
为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种用于流式细胞学检测骨髓或外周血样本的前处理方法，包括以下步骤：
1)将样本与抗体混匀，在室温下避光孵育15min；
2)向步骤1)所得混合物中加入1ml溶血素，混匀，在37℃条件下避光孵育15min；
3)向步骤2)所得混合物中加入3mlpbs缓冲液，混匀后固液分离取沉淀；
4)向步骤3)所得固形物中加入3mlpbs缓冲液，混匀后固液分离取沉淀；
5)用300μlpbs缓冲液重悬步骤4)所得固形物，即得到待测产物。
作为优选，还包括以下步骤6)：利用流式细胞仪检测步骤5)所得的待测产物。
作为优选，步骤1)和步骤2)中所述混匀，均是利用涡旋振荡器完成的。
作为优选，步骤1)所述室温是25℃。
作为优选，步骤2)所述溶血素是由coulter公司出品的市售溶血素。
作为优选，步骤3)和步骤4)所述的固液分离，均为离心。
作为优选，所述离心，是以190g的离心力，离心处理5min。
本发明提供了一种用于流式细胞学检测骨髓或外周血样本的前处理方法，该技术方案在传统操作步骤基础上改进部分步骤，可以大大减少碎片产生，可以使分析结果更加准确，保证诊断结果的准确。具体来看，本发明使用温箱维持37℃，在此条件下溶血，可以达到最优效果；此外，本发明使用离心速度单位为离心力，保证不同规格，大小的离心机产生相同的离心力度，而且采用特定的190g离心力，可以最大程度去除37℃下溶血产生的碎片。从而显著降低待测产物中的碎片含量，为流式细胞术检测的准确性奠定了基础。本发明以创新性的技术改进实现了良好的技术效果，同时成本较低、易于实现，因此具有突出的推广前景。
具体实施方式
以下将对本发明的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
实施例1
一种用于流式细胞学检测骨髓或外周血样本的前处理方法，包括以下步骤：
1)将样本与抗体混匀，在室温下避光孵育15min；
2)向步骤1)所得混合物中加入1ml溶血素，混匀，在37℃条件下避光孵育15min；
3)向步骤2)所得混合物中加入3mlpbs缓冲液，混匀后固液分离取沉淀；
4)向步骤3)所得固形物中加入3mlpbs缓冲液，混匀后固液分离取沉淀；
5)用300μlpbs缓冲液重悬步骤4)所得固形物，即得到待测产物。
在以上技术方案的基础上，满足以下条件：
还包括以下步骤6)：利用流式细胞仪检测步骤5)所得的待测产物。
步骤1)和步骤2)中所述混匀，均是利用涡旋振荡器完成的。
步骤1)所述室温是25℃。
步骤2)所述溶血素是由coulter公司出品的市售溶血素。
步骤3)和步骤4)所述的固液分离，均为离心。
所述离心，是以190g的离心力，离心处理5min。
实施例2
一种用于流式细胞学检测骨髓或外周血样本的前处理方法，包括以下步骤：
1)将样本与抗体混匀，在室温下避光孵育15min；
2)向步骤1)所得混合物中加入1ml溶血素，混匀，在37℃条件下避光孵育15min；
3)向步骤2)所得混合物中加入3mlpbs缓冲液，混匀后固液分离取沉淀；
4)向步骤3)所得固形物中加入3mlpbs缓冲液，混匀后固液分离取沉淀；
5)用300μlpbs缓冲液重悬步骤4)所得固形物，即得到待测产物。
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明。凡在本发明的申请范围内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。