一种卵母细胞免疫荧光染色后快速压片的方法与流程

本发明属于细胞生物学技术领域，具体涉及一种卵母细胞免疫荧光染色后快速压片的方法。

背景技术：

卵母细胞荧光染色实验常涉及到染多种抗体，为了减少非特异性结合经常采用低温长时间孵育的方法，这已经增加了荧光淬灭的可能性，而最后一步的压片经常需要在显微镜下观察好压片的程度，而又一次大大增加了荧光淬灭的可能性。

技术实现要素：

为了减少卵母细胞染色后观察时荧光淬灭的问题，本发明提供了一种卵母细胞免疫荧光染色后快速压片的方法，步骤如下：取载玻片，在载玻片中间位置靠近边缘处的上下两侧各贴一小块透明胶布，然后将已经染完色的卵母细胞及含有dapi的封固液置于两胶布正中位置，在盖玻片四角涂上不多于10μl的羊毛脂，然后将盖玻片压于载玻片上即可；所述胶布宽0.2-0.3cm，长1.0-1.5cm，粘贴的厚度为37-78μm；所述胶布靠近载玻片宽边的一端距离载玻片宽边1.0-1.4cm；靠近载玻片边缘处的胶布长边与载玻片边缘的距离小于0.2cm。

优选地，所述胶布宽0.3cm，长1.2cm。

优选地，所述胶布靠近载玻片宽边的一端距离载玻片宽边1.1cm。

优选地，所述载玻片规格为25mm*75mm；所述盖玻片的规格为25mm*25mm。

优选地，所述羊毛脂涂抹的量为5μl。

有益效果

本发明利用简单易得的原料快速简便压片，减少了荧光淬灭风险，为研究卵母细胞发育的分子机制提供新的技术支持。

附图说明

图1卵母细胞压片制备示意图；其中1为载玻片，2为在载玻片上贴的两块胶布，3为染色后的卵母细胞，4为盖玻片；

图2卵母细胞压片成品图；

图3卵母细胞荧光显微镜镜检结果，其中红色为连有tritc的抗体，绿色为连有fitc的抗体，蓝色为dapi染色效果，a为合并图，b为染色质染色图，c为膜蛋白染色图,d为微丝蛋白染色图。

具体实施方式

实施例1.卵母细胞免疫荧光染色后快速压片的方法。

本实施例以经过染色的去除透明带的猪卵母细胞为例，描述快速制备压片的方法。

取干净的载玻片一张，规格为25mm*75mm，在其中间位置靠近边缘处的上下两侧各贴一小块透明胶布1层，厚度约为38μm，所贴的胶布宽0.3cm，长1.2cm，每个胶布靠近载玻片宽边的一端距离载玻片宽边1.1cm，靠近载玻片边缘处的胶布长边与载玻片边缘的距离小于0.2cm，如图1所示；本实施例中使用的盖玻片规格为25mm*25mm，将已经染完色的猪卵母细胞及含有dapi的商品化的封固液置于两胶布正中位置，在盖玻片四角涂上5μl的羊毛脂，用于辅助粘合及支撑盖玻片，然后将盖玻片压于载玻片上，盖玻片距离载玻片边缘距离为0.5cm，于暗盒中等封固液固化即可进行检测。

实施例2.重复实施例1，与实施例1的不同在于，本实施例中羊毛脂的涂抹量为10μl。

实施例3.重复实施例1，与实施例1的不同在于，本实施例中所贴的胶布宽0.2cm，长1.5cm。

对比例1.重复实施例1，与实施例1的不同在于，本对比例中载玻片上未粘贴胶布。

以实施例1为例，采用激光共聚焦显微镜观察猪卵母细胞，结果如下，利用本发明方法制备的压片，可清晰看到显示蓝色荧光的染色质，显示圈状绿色荧光的膜蛋白以及有圈状红色荧光的微丝蛋白。而对比例1中的压片方法观察到的是整面的红色或绿色荧光。

虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

技术特征：

1.一种卵母细胞免疫荧光染色后快速压片的方法，其特征在于，步骤如下：取载玻片，在载玻片中间位置靠近边缘处的上下两侧各贴一小块透明胶布，然后将已经染完色的卵母细胞及含有dapi的封固液置于两胶布正中位置，在盖玻片四角涂上不多于10μl的羊毛脂，然后将盖玻片压于载玻片上即可；所述胶布宽0.2-0.3cm，长1.0-1.5cm，粘贴的厚度为37-78μm；所述胶布靠近载玻片宽边的一端距离载玻片宽边1.0-1.4cm；靠近载玻片边缘处的胶布长边与载玻片边缘的距离小于0.2cm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶布宽0.3cm，长1.2cm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述胶布靠近载玻片宽边的一端距离载玻片宽边1.1cm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载玻片规格为25mm*75mm；所述盖玻片的规格为25mm*25mm。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述羊毛脂涂抹的量为5μl。

技术总结
一种卵母细胞免疫荧光染色后快速压片的方法，属于细胞生物学技术领域。为了减少卵母细胞染色后观察时荧光淬灭的问题，本发明提供了一种卵母细胞免疫荧光染色后快速压片的方法，步骤如下：取载玻片，在载玻片中间位置靠近边缘处的上下两侧各贴一小块透明胶布，然后将已经染完色的卵母细胞及含有DAPI的封固液置于两胶布正中位置，在盖玻片四角涂上不多于10μL的羊毛脂，然后将盖玻片压于载玻片上即可；所述胶布宽0.2‑0.3cm，长1.0‑1.5cm，粘贴的厚度为37‑78μm。本发明减少了荧光淬灭风险，为研究卵母细胞发育的分子机制提供新的技术支持。

技术研发人员：王丽英;许保增;赵伟刚;杨镒峰;孟庆江;常彤
受保护的技术使用者：中国农业科学院特产研究所
技术研发日：2019.09.16
技术公布日：2019.12.10