R-BMPA中杂质BMPA-3的分析检测方法与流程

r-bmpa中杂质bmpa-3的分析检测方法
技术领域
1.本发明属于药物分析技术领域，涉及(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺.二盐酸盐中杂质bmpa-3的分析检测方法。


背景技术：

2.(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺.二盐酸盐(r-bmpa)中杂质bmpa-3，结构如下所示，由结构式可知，该杂质具有氨基甲酸酯结构，为遗传毒警示结构，根据其致突变潜力和致癌潜力归为3类，为保证用药安全性，需按照基因毒性杂质的限度严格控制。
[0003][0004]
目前没有(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐中杂质bmpa-3的分析检测方法的相关报道，为了保证生产和研发质量，需要对其质量进行控制，因此，研发一种(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐中杂质bmpa-3检测方法，对医药行业来说显得尤为迫切和重要。


技术实现要素：

[0005]
本发明目的在于提供一种稳定性好、重现性好、精密度高，用于(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐中杂质bmpa-3的检测方法。应用该方法测定杂质bmpa-3，方便可行，准确度高，能有效控制(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐的质量，进而控制枸橼酸托法替布的质量，提高药物的安全性。
[0006]
本发明所述方法具体的说是一种气相色谱-质谱分析方法，采用质谱检测器，选择适当色谱柱及升温程序，对(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐中杂质bmpa-3进行定量分析。
[0007]
本发明所采取的技术方案是：
[0008]
(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺.二盐酸盐中杂质bmpa-3的分析检测方法，采用气相色谱-质谱法，氦气为载气，碰撞气为氮气；
[0009]
供试品：取含有bmpa-3的r-bmpa供试品用乙腈稀释成每1ml中含10mg～20mg的溶液作为供试品溶液；
[0010]
进样体积：1～10μl；
[0011]
色谱柱：以5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱；
[0012]
柱温程序：初始柱温为95℃～105℃，以每分钟10℃～15℃的速率升至230℃～250℃，维持5～15分钟，进样口温度为245℃～255℃，利用质谱检测器，质荷比为96.9，离子源温度为230℃～250℃，流速为1.0ml/min～2.0ml/min，对(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌
啶-3-胺二盐酸盐中杂质bmpa-3进行定量测定。
[0013]
在一些实施例中，柱温程序为：初始柱温为100℃，以每分钟15℃的升温速度升至250℃，保持10分钟；进样口温度250℃；离子源温度为250℃。
[0014]
在一些实施例中，供试品在稀释之前经过以下处理：将供试品溶于水和二氯甲烷后用氢氧化钠水溶液中和，氢氧化钠水溶液滴加完毕后用二氯甲烷萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩至干，真空隔膜泵减压抽至干，得油状物游离碱，进行后续稀释步骤。
[0015]
在一些实施例中，氢氧化钠水溶液中氢氧化钠的用量为1～1.5倍供试品摩尔量。
[0016]
在一些实施例中，所述的进样体积为1μl。
[0017]
在一些实施例中，所述的载气为纯度在99.999％以上的氦气，碰撞气为纯度在99.999％以上的氮气。
[0018]
在一些实施例中，所述的色谱柱为5％苯基-95％甲基聚硅氧烷(或极性相似)为固定液的毛细管柱为色谱柱，具体可以包括以下色谱柱：db-5、hp-5、bp-5、at-5、rtx-5、ov-5、se-54等。
[0019]
本发明的有益效果是：本发明利用灵敏度高的气相色谱-质谱法，对(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐中杂质bmpa-3进行检测，提高了(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐产品质量控制的检测手段，同时提高了该产品的安全性。
附图说明
[0020]
图1为空白溶剂图谱；
[0021]
图2为对照品溶液图谱；
[0022]
图3为供试品溶液图谱。
具体实施方式
[0023]
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
[0024]
仪器：气相色谱-质谱联用仪；
[0025]
试剂：乙腈、二氯甲烷、氢氧化钠、无水硫酸钠；
[0026]
色谱柱：5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱。
[0027]
实施例1：
[0028]
照气相色谱法(中国药典2020年版四部通则0521)和质谱法(中国药典2020年版四部通则0431)测定。
[0029]
色谱条件：用5％苯基-95％甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱(hp-5或极性相近的色谱柱)；起始温度100℃，以每分钟15℃的速率升至250℃，维持10分钟；进样口温度为250℃；进样体积1μl。
[0030]
质谱条件：离子源为电子轰击源(ei)；离子源温度为250℃；载气为氦气，碰撞气为氮气；流速为2.0ml/min；质谱传输接口为250℃；质谱检测模式为sim模式，质荷比为96.9；溶剂延迟4分钟，ms off 7分钟。
[0031]
对照品：贮备液a：取杂质bmpa-3对照品约30mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙腈
溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取10ml，置100ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀，即得。
[0032]
对照品：贮备液b：精密量取对照品贮备液a 3ml，置100ml量瓶，用乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。
[0033]
对照品溶液：取r-bmpa约120mg，精密称定，置10ml量瓶中，加对照品贮备液b溶解并稀释制成每1ml约含bmpa-3 0.9μg的溶液，摇匀，即得。
[0034]
供试品溶液：取本品约10g，置分液漏斗中，加水50ml使溶解，滴加氢氧化钠溶液(称取1.63g氢氧化钠，溶于30g纯化水，搅拌溶解即得)，待全部滴加完毕后，用二氯甲烷提取2次，每次50ml，合并提取液，加入无水硫酸钠5g，搅拌10分钟，抽滤滤液于30～40℃旋蒸至无液体流出后再旋蒸60分钟，得到黄色油状物游离碱(r-bmpa)。取r-bmpa约120mg，置10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释制成每1ml约含12mg的溶液，摇匀，即得。
[0035]
精密量取供试品溶液和对照品溶液各1μl，分别注入气相色谱-质谱联用仪，记录色谱图。按标准加入法以峰面积计算，bmpa-3含量应不大于0.0075％。
[0036]
结果如图1到图3所示，从结果看，本检测方法可以准确、灵敏的检测出bmpa-3，目前没有(3r,4r)-1-苄基-n,4-二甲基哌啶-3-胺二盐酸盐中杂质bmpa-3的分析检测方法的相关报道，该杂质具有氨基甲酸酯结构，为遗传毒警示结构，必须严格控制该杂质的残留，本方法可以有效的检测该杂质，为用药安全提供了重要保障。