用于SARS-COV-2中和抗体的免疫测定及其材料的制作方法

背景技术：

技术实现思路

1、本发明涉及开发新型免疫测定，用于通过检测表达sars-cov-2的刺突蛋白变体和/或中和sars-cov-2刺突蛋白变体的抗体来检测感染sars-cov-2的个体。免疫测定可以通过标准免疫测定形式或在自动化平台上进行。在各种实施方式中，免疫测定使用一种或多种sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段。可以将sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段固定在基材上并用于检测获自对象的生物样品(也称为“患者样品”)中的中和抗体，任选地，与生物样品中的一种或多种细胞因子组合。本发明的其他方面提供了用于本文所述的免疫测定的抗原/基材组合。

2、本发明还涉及开发用于检测中和和/或保护性抗体的新型单重和/或多重免疫测定。多重免疫测定可以进一步检测疑似病毒感染患者样品中针对sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段的高亲合力(avidity)中和和/或保护性抗体，以及任选地，一种或多种选自下述的细胞因子：il-1β、ifn-γ、ifnγ诱导型蛋白10(ip-10)和单核细胞趋化蛋白1(mcp-1)、il-4、il-10、il-2r、il-6、粒细胞集落刺激因子(g-csf)、巨噬细胞炎症蛋白-1a和tnf-α。公开的单重和/或多重免疫测定旨在鉴定包含能够中和和/或阻断ace2受体与特定sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段结合的抗体的对象(患者样品)，以及任选地，受sars-cov感染、经中和sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段的抗体治疗的患者或用包含sars-cov2刺突蛋白或其片段(包括本文公开的sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段)的疫苗免疫的对象中的一种或多种细胞因子的水平。本文公开的免疫测定可以用于评估针对sars-cov-2刺突蛋白及其变体的疫苗在产生中和抗体方面的有效性和/或评估待给予对象的恢复期血浆或抗体混合物中或在给予对象恢复期血浆或包含刺突蛋白中和抗体的抗体混合物后不同时间点的中和抗体的存在。

技术特征：

1.一种包含颗粒或珠群体的基材，其包含颗粒或珠的两个或更多个独立的亚群，各颗粒或珠亚群能够通过特异性可检测参数区分，并且各珠亚群包含固定在其上的不同的sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段，以及任选地，另一珠亚群包含固定在其上的sars-cov-2刺突蛋白或其片段。

2.如权利要求1所述的基材，其中，所述基材是玻璃、塑料、聚苯乙烯或硝化纤维。

3.如权利要求1所述的基材，其中，所述群体包含选自下述的颗粒或珠的两个或更多个独立的亚群：

4.如权利要求3所述的基材，其中，所述特异性可检测物理参数是荧光染料(荧光团)、发光剂、电子致密试剂、放射性同位素或粒径。

5.如权利要求4所述的基材，其中，所述特异性可检测参数是荧光团。

6.一种用于检测哺乳动物中的中和和/或保护性抗体的方法，其包括获得所述哺乳动物的生物样品，使所述生物样品与包含权利要求1所述的基材的基材接触，并且检测与所述基材表面上的sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段结合的中和抗体的存在与否。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述哺乳动物是人、非人类灵长类动物、犬科动物或猫科动物。

8.如权利要求6所述的方法，其中，所述中和抗体的存在与否包括使所述基材与人ace2受体接触并检测ace2受体与基材亚群的结合的存在与否，所述基材亚群上已固定有sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段，检测到ace2受体与基材亚群的结合表明缺失对特定的sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段具有特异性的中和抗体。

9.如权利要求8所述的方法，其中，ace2受体与基材亚群的结合使用经可检测标记的ace2受体的特异性抗体或经可检测标记的ace2受体检测。

10.如权利要求6所述的方法，其中，与包含给定sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段的基材结合的中和抗体使用物种特异性抗免疫球蛋白(ig)抗体检测。

11.如权利要求6所述的方法，所述方法进一步包括检测所述生物样品中选自下述的细胞因子的存在、不存在或数量：il-1β，ifn-γ，ifnγ诱导型蛋白10(ip-10)、单核细胞趋化蛋白1(mcp-1)，il-4，il-10，il-2r，il-6，粒细胞集落刺激因子(g-csf)，巨噬细胞炎症蛋白-1a和tnf-α。

12.如权利要求11所述的方法，其中，所述一种或多种细胞因子选自：il-6、il-2r、粒细胞集落刺激因子、ip-10、mcp-1、巨噬细胞炎性蛋白-1a、tnf-α及其组合。

13.一种用于检测哺乳动物中高亲合力中和抗体的方法，其包括获得所述哺乳动物的生物样品，使所述生物样品与包含权利要求1所述的基材的基材接触，并且检测与所述基材表面上的sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段结合的高亲合力中和抗体的存在与否。

14.如权利要求13所述的方法，其中，所述方法包括：

15.如权利要求14所述的方法，其中，所述离液剂是氯化钠、硫氰酸钠和/或尿素。

16.如权利要求13所述的方法，其中，所述方法包括检测存在于基材上的sars-cov-2刺突蛋白或其片段和/或sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段，所述基材具有经可检测标记的ace2受体或具有经可检测标记的ace2受体特异性抗体。

17.如权利要求13所述的方法，其中，与包含给定sars-cov-2刺突蛋白或其片段和/或sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段的基材结合的高亲合力抗体使用物种特异性抗免疫球蛋白(ig)抗体检测，其中，所述抗ig抗体经生物素化，并且所述抗igg抗体与中和抗体的结合用荧光团标记的亲和素或链霉亲和素或用荧光团标记的抗igg抗体检测。

18.一种用于检测哺乳动物中中和抗体的方法，其包括获得所述哺乳动物的生物样品，使所述生物样品与权利要求1中所述的基材接触并检测与所述基材表面上的sars-cov-2刺突蛋白变体或其片段结合的中和抗体的存在与否，所述生物样品获自疑似感染该病毒的个体，用sars-cov-2中和抗体或恢复期血浆治疗的个体，或用包含sars-cov2刺突蛋白的疫苗疫苗免疫的个体。

19.如权利要求9所述的方法，其中，所述ace2受体是截短的或修饰的ace2受体或者是ace2受体融合蛋白。

20.如权利要求19所述的方法，其中，所述ace2受体融合蛋白包含与ace2受体的羧基末端融合的免疫球蛋白fc结构域。

21.如权利要求20所述的方法，其中，所述融合蛋白在fc结构域上经生物素化并使用链霉亲和素-pe检测。

技术总结
本发明涉及开发新型免疫测定，用于检测患者样品中针对SARS‑CoV‑2刺突蛋白变体或其片段的中和抗体和/或高亲合力中和抗体，以及任选地，一种或多种细胞因子。还提供了新型多重和单重免疫测定，用于检测患者样品中针对SARS‑CoV‑2刺突蛋白变体或其片段的中和抗体和/或高亲合力中和抗体，以及任选地，一种或多种细胞因子。

技术研发人员：Q·高,R·考尔,S·周,R·P·沃克
受保护的技术使用者：生物辐射实验室股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14