用于惰性液相色谱系统和柱的系统适用性测试的化合物的制作方法

本公开涉及用于惰性lc系统和柱的系统适用性测试的化合物。更具体地，该技术涉及用于在液相色谱、色谱柱和耦接的检测器中检测暴露的金属的探针化合物。

背景技术：

1、液相色谱(lc)是一种分析分离技术，其能够基于混合物的化合物与固定相之间的差异相互作用(定义为主要相互作用)来分离化学物质的混合物，该主要相互作用是混合物、设计的固定相与来自具体选择的流动相/环境条件的调节之间的预期相互作用。这些相互作用取决于许多受控变量，例如流动相组成、温度和流速。因为给定分离的分析品质因数取决于大量变量，这些变量直接影响主要化学相互作用的范围和程度，所以小心地通过仔细制备流动相、适当恒温控制设备和使用可重复制造的色谱柱，在一致的设定点操作。

技术实现思路

1、探针化合物与色谱系统和柱中暴露的金属相互作用的程度可用于设计和执行产生有用信息的适用性实验。评估惰性lc系统和柱的适用性的一种技术使用探针化合物作为阳性对照和阴性对照。可选择可适合作为一对以起到阳性对照和阴性对照作用的化合物。阳性对照和阴性对照的一个示例是腺苷-5'-三磷酸(atp)和腺苷。还可使用腺苷和atp以及其他核苷酸的化学改性的类似物以便适应替代的检测模式，诸如荧光检测。一组atp类似物和相关的非相互作用阴性对照分别为2'(3')-o-(4-苯甲酰基苯甲酰基)腺苷5'-三磷酸(bz-atp)和二苯甲酮。同样，不可水解的核苷酸类似物是感兴趣的，因为众所周知天然的焦磷酸酯键易于水解。其他化学部分可用于系统适用性标准。

2、确认仪器性能是任何分析测量的关键方面。当分析易于金属吸附的化合物时，需要确认的不仅仅是机械仪器的性能。验证所选lc的惰性也是重要的。本公开提出了评估色谱系统的惰性的新方法。

3、关于标准品稳定性的考虑导致被称为ampcp的核苷酸类似物的使用，与atp和adp不同，所述ampcp不含有焦磷酸酯键，从而使得其是水解稳定的。使用ampcp的流动注射分析，相对于基于金属合金的仪器，可从惰性lc系统观察到更高且更一致的回收率。

4、还证实能够将ampcp与作为阴性对照的咖啡因配对，其中ampcp的使用成功地鉴定了金属的存在，同时咖啡因有助于验证总体机械性能。

5、在一个方面，本公开包括用于评估系统惰性的试剂盒。该试剂盒包括阳性对照和阴性对照，该阳性对照包含具有不可水解的α-β键的核苷酸二磷酸或其化学改性的类似物，其中该阳性对照含有金属相互作用部分，该阴性对照不含金属相互作用部分。在一些实施方案中，试剂盒还包括用于形成阴性对照和阳性对照的混合物的溶液(例如，系统适应性溶液)的容器。在一些实施方案中，具有不可水解的α-β键的核苷酸二磷酸是腺苷5’-(α,β-亚甲基)二磷酸(ampcp)。在一些实施方案中，阴性对照和阳性对照的混合物的溶液是等摩尔混合物。在一些实施方案中，阴性对照和阳性对照有相同的发色团，有相同的最大uv吸收波长，以及在该波长下表现出相同的消光系数。在一些实施方案中，阴性对照由腺苷组成或基本上由腺苷组成(例如，腺苷在水或水/极性溶剂混合物中的稀释溶液)。在一些实施方案中，阴性对照由咖啡因组成或基本上由咖啡因组成(例如，咖啡因在水或水/极性溶剂混合物中的稀释溶液)。

6、在另一个方面，本公开包括用于评估系统惰性的试剂盒。该试剂盒包括具有阳性对照和阴性对照的溶液，该阳性对照包含腺苷-5'-三磷酸(atp)或其化学改性的类似物，该阴性对照不含金属相互作用部分；以及容纳溶液的容器。在一些实施方案中，阴性对照和阳性对照有相同的发色团，有相同的最大uv吸收波长，以及在该波长下表现出相同的消光系数。在一些实施方案中，阴性对照和阳性对照的溶液是等摩尔混合物。在一些实施方案中，腺苷-5'-三磷酸(atp)的化学改性的类似物为2'(3')-o-(4-苯甲酰基苯甲酰基)腺苷5'-三磷酸(bz-atp)化合物。在一些实施方案中，阴性对照由腺苷组成或基本上由腺苷组成。在一些实施方案中，阴性对照由咖啡因组成或基本上由咖啡因组成。

7、在另一个方面，本公开包括用于评估系统惰性的试剂盒。该试剂盒包括：阳性对照，该阳性对照包含金属相互作用部分；阴性对照，该阴性对照不含金属相互作用部分；以及容纳系统适应性溶液的容器。在一些实施方案中，阴性对照和阳性对照有相同的发色团，有相同的最大uv吸收波长，以及在该波长下表现出基本上相同的消光系数。在一些实施方案中，阴性对照和阳性对照是化合物，并且其中阴性对照和阳性对照之间的差异是一系列三个磷酸酯基团。在一些实施方案中，阳性对照为腺苷-5'-三磷酸(atp)或其化学类似物，并且阴性对照为腺苷或咖啡因。在一些实施方案中，阳性对照为腺苷5'-(α,β-亚甲基)二磷酸(ampcp)或其化学类似物，并且阴性对照为腺苷或咖啡因。在一些实施方案中，阳性对照为具有不可水解的α-β键的核苷酸二磷酸。在一些实施方案中，阴性对照由腺苷组成或基本上由腺苷组成。在一些实施方案中，阴性对照由咖啡因组成或基本上由咖啡因组成。在一些实施方案中，阴性对照和阳性对照具有不同的光谱特性。在一些实施方案中，阴性对照和阳性对照的溶液是等摩尔混合物。在一些实施方案中，阳性对照为具有以下结构的亚乙烯基腺苷5'-(α,β-亚甲基)二磷酸：

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9、在一个方面，本公开包括用于评估系统惰性的试剂盒。该试剂盒包括具有阳性对照的溶液的容器，该阳性对照包含金属相互作用部分，其中该阳性对照为具有以下结构的亚乙烯基腺苷5'-(α,β-亚甲基)二磷酸：

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11、本发明的该方面的实施方案还可包括以下特征中的一者或多者。该试剂盒还可包括注射器，该注射器用于将阳性对照注射到液体分析系统的至少一部分中(例如，注射到柱被移除的lc系统的流体处理系统中；注射到lc柱中，注射到柱在适当位置的lc系统中等)。试剂盒的一些实施方案还包括阴性对照的容器，该阴性对照不含金属相互作用部分(例如，腺苷、咖啡因等)。

12、本公开的上述方面和特征可组合并提供优于现有技术的多种优点。在一些实施方案中，在惰性lc系统和柱的系统适用性测试中使用本公开的化合物有许多有益效果。例如，本公开使用探针化合物以检测液相色谱、色谱柱和耦接的检测器中暴露的金属。这些化合物(例如，适用性样品)可有助于分析者在将不提供有意义的结果的分离上花费资源(例如，时间和金钱)之前(并且不需要花费该资源)来确定系统对于特定应用的适用性。即，通过在期望的分离或应用之前确定系统的惰性的适用性，分析者将知道不会在注定失败的分离/应用上浪费资源。该信息可以防止时间和费用的资源浪费，因为系统对于特定应用的适用性的知识将消除或大大减少注定要给出不良质量结果的实验。

技术特征：

1.一种用于评估系统惰性的试剂盒，所述试剂盒包括：

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述具有不可水解的α-β键的核苷酸二磷酸是腺苷5’-(α,β-亚甲基)二磷酸(ampcp)。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，还包含用于形成所述阴性对照和所述阳性对照的溶液的容器。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述阴性对照和所述阳性对照有相同的发色团，有相同的最大uv吸收波长，以及在所述波长下表现出相同的消光系数。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述阴性对照由腺苷组成或基本上由腺苷组成。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述阴性对照由咖啡因组成或基本上由咖啡因组成。

7.一种用于评估系统惰性的试剂盒，所述试剂盒包括：

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中所述阴性对照和所述阳性对照有相同的发色团，有相同的最大uv吸收波长，以及在所述波长下表现出相同的消光系数。

9.根据权利要求7所述的试剂盒，还包含用于形成所述阴性对照和所述阳性对照的溶液的容器。

10.根据权利要求7所述的试剂盒，其中所述腺苷-5'-三磷酸(atp)的化学改性的类似物为2'(3')-o-(4-苯甲酰基苯甲酰基)腺苷5'-三磷酸(bz-atp)化合物。

11.根据权利要求7所述的试剂盒，其中所述阴性对照由腺苷组成或基本上由腺苷组成。

12.根据权利要求7所述的试剂盒，其中所述阴性对照由咖啡因组成或基本上由咖啡因组成。

13.一种用于评估系统惰性的试剂盒，所述试剂盒包括：

14.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阴性对照和所述阳性对照有相同的发色团，有相同的最大uv吸收波长，以及在所述波长下表现出基本上相同的消光系数。

15.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阴性对照和所述阳性对照是化合物，并且其中所述阴性对照和所述阳性对照之间的差异是一系列三个磷酸酯基团。

16.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阳性对照为腺苷-5'-三磷酸(atp)或其化学类似物，并且所述阴性对照为腺苷或咖啡因。

17.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阳性对照为腺苷5'-(α,β-亚甲基)二磷酸(ampcp)或其化学类似物，并且所述阴性对照为腺苷或咖啡因。

18.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阳性对照为具有不可水解的α-β键的核苷酸二磷酸。

19.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阴性对照由腺苷组成或基本上由腺苷组成。

20.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阴性对照由咖啡因组成或基本上由咖啡因组成。

21.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阴性对照和所述阳性对照具有不同的光谱特性。

22.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述系统适应性溶液包含所述阴性对照和所述阳性对照的等摩尔混合物。

23.根据权利要求13所述的试剂盒，其中所述阳性对照为具有以下结构的亚乙烯基腺苷5'-(α,β-亚甲基)二磷酸：

技术总结
本公开涉及一种用于评估系统惰性的试剂盒。所述试剂盒包括包含金属相互作用部分的阳性对照和不含金属相互作用部分的阴性对照。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括容纳系统适应性溶液(例如，阳性对照和阴性对照的等摩尔混合物)的容器。

技术研发人员：A·帕特尔,M·A·劳伯,K·温德姆,M·德拉诺,J·西蒙妮
受保护的技术使用者：沃特世科技公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12