一种植物激素的检测方法和应用与流程

本发明属于植物激素检测，具体涉及一种植物激素的检测方法和应用。

背景技术：

1、玉米赤霉烯酮是真菌在生长繁殖过程中产生的次生有毒代谢产物，其可代谢生成α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇和玉米赤霉酮等五种物质。

2、玉米赤霉烯酮及其代谢物具有雌激素的作用，摄入被其污染的食品，对人类健康具有潜在的危害。gb 2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》中规定了谷物及其制品(小麦、小麦粉、玉米、玉米面)限量标准为60μg/kg；中华人民共和国农业农村部公告第250号中规定了食品动物中禁止使用玉米赤霉醇。国家体育总局公布的第45号《2020年兴奋剂目录公告》中规定，玉米赤霉醇作为蛋白同化制剂品种，被禁止使用。

3、乳制品及巧克力是日常消费品，对人体提供蛋白质、脂肪、碳水化合物和多种矿物质等营养品，受到大众的喜爱。其安全也受到各方的关注。调研发现，目前未见冷冻饮品、巧克力中玉米赤霉烯酮及其代谢物残留检测的相关研究。因为乳制品包括纯牛奶、发酵乳、奶酪、含巧克力冷冻饮品、不含巧克力冷冻饮品等，其组成非常复杂，除饮用水外，还可以由生牛乳、乳粉、食用植物油、糖类、大豆蛋白、麦芽糊精、谷物、果蔬等组成，因此有被玉米赤霉烯酮及其代谢物残留污染的可能性。对于乳制品和巧克力，在进行前处理实验时，需要考虑如何高效地将目标物从复杂基质中提取出来，同时实现杂质与目标物的有效分离。因此，迫切需要开发一种简单、快速、高效、适用范围广的方法，可满足乳制品中玉米赤霉烯酮及其代谢物残留的同时检测。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种植物激素的检测方法，该检测方法具有灵敏度高、准确性高等特点。

2、为达到上述目的，本发明提供了一种植物激素的检测方法，包括以下步骤：提取：提取待检测物中的植物激素，得粗提物；净化：使粗提物经固相萃取，收集萃取后的洗脱物；测定：把洗脱物进行定性定量检测；其中，所述固相萃取包括第一固相萃取和第二固相萃取，所述第一固相萃取用于吸附植物激素，所述第二固相萃取用于吸附植物激素中的杂质。

3、根据本发明的一些具体实施方案，所述第一固相萃取选用炭黑固相萃取柱或聚苯乙烯-二乙烯基苯(hlb)固相萃取柱，所述第二固相萃取柱选用氨基固相萃取柱；优选地，所述炭黑固相萃取柱和所述氨基固相萃取柱均预先经过有机溶液活化。

4、根据本发明的一些具体实施方案，使用有机溶液提取待检测物中的植物激素。

5、根据本发明的一些具体实施方案，当所述待检测物属于生物体内代谢产物，通过酶制剂和有机溶液提取待检测物中的植物激素；当所述待检测物未经生物体内代谢，通过有机溶液提取待检测物中的植物激素。

6、根据本发明的一些具体实施方案，所述酶制剂选自β-葡萄糖醛酸酶和芳香基硫酸酯酶。

7、根据本发明的一些具体实施方案，待洗脱物进行定性定量检测之前，需把洗脱物过滤。

8、根据本发明的一些具体实施方案，使用滤膜过滤所述洗脱物，优选地，所述滤膜选自亲水性聚四氟乙烯(ptfe)滤膜，进一步优选地，所述滤膜的直径为0.1-0.3μm。

9、根据本发明的一些具体实施方案，所述植物激素选自α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮中的至少一种。

10、根据本发明的一些具体实施方案，使用液相色谱串联质谱仪对洗脱物进行定性定量检测；优选地，所述液相色谱所选用的色谱柱为beh c18柱，规格为50mm×2.1mm(i.d.)，1.7μm；柱温：40℃；进样量：10μl，过柱速度为280-320μl/min，洗脱液为乙腈。

11、根据本发明的一些具体实施方案，所述质谱条件为：电离模式：电喷雾负离子模式(esi–)；离子化电压：-4500v；离子源温度：500℃；辅助加热器：50psi；喷雾气：50psi。

12、根据本发明的一些具体实施方案，采用混合内标中间液来对待检测物中的植物激素进行定量检测，优选地，所述混合内标中间液包括玉米赤霉烯酮-13c18和玉米赤霉酮-d6。

13、根据本发明的一些具体实施方案，所述待检测物包括奶制品、冷冻饮品和巧克力制品。

14、本发明所提供的植物激素的检测方法具有如下优势：

15、(1)该检测方法对α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮等6种植物激素进行研究，通过内标法进行定量，采用超高效液相色谱-串联质谱法进行检测，具有灵敏度高、准确性高等特点；使用的商品化炭黑固相萃取柱和氨基固相萃取柱，经济实惠；

16、(2)采用两次固相萃取柱净化，能很好地将目标物与基质干扰物分离；

17、(3)采用β-葡萄糖醛酸酶和芳香基硫酸酯酶酶解乳制品基质使结合状态的植物激素分解成游离状态，易于提取；

18、(4)该方法适用于液态奶、发酵乳、奶粉、冷冻饮品、奶酪、巧克力等基质的检测，且检测结果准确，具有较强的应用价值；

19、(5)选择亲水性ptfe滤膜过滤上机，避免了假阴性结果，提高检测结果的准确性。

技术特征：

1.一种植物激素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述第一固相萃取选用炭黑固相萃取柱或聚苯乙烯-二乙烯基苯固相萃取柱，所述第二固相萃取柱选用氨基固相萃取柱；优选地，所述炭黑固相萃取柱和所述氨基固相萃取柱均预先经过有机溶液活化。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，使用有机溶液提取待检测物中的植物激素。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，当所述待检测物属于生物体内代谢产物，通过酶制剂和有机溶液提取待检测物中的植物激素；当所述待检测物未经生物体内代谢，通过有机溶液提取待检测物中的植物激素。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述酶制剂选自β-葡萄糖醛酸酶和芳香基硫酸酯酶。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，待洗脱物进行定性定量检测之前，需把洗脱物过滤。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，使用滤膜过滤所述洗脱物，优选地，所述滤膜选自亲水性聚四氟乙烯滤膜，进一步优选地，所述滤膜的直径为0.1-0.3μm。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述植物激素选自α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮中的至少一种。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，使用液相色谱串联质谱仪对洗脱物进行定性定量检测；优选地，所述液相色谱所选用的色谱柱为beh c18柱，过柱速度为280-320μl/min，洗脱液为乙腈。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，采用混合内标中间液来对待检测物中的植物激素进行定量检测，优选地，所述混合内标中间液包括玉米赤霉烯酮-13c18和玉米赤霉酮-d6。

技术总结
本发明提供了一种植物激素的检测方法和应用。包括以下步骤：提取：提取待检测物中的植物激素，得粗提物；净化：使粗提物经固相萃取，收集萃取后的洗脱物；测定：把洗脱物进行定性定量检测；其中，所述固相萃取包括第一固相萃取和第二固相萃取，所述第一固相萃取用于吸附植物激素，所述第二固相萃取用于吸附植物激素中的杂质。该检测方法具有灵敏度高、准确性高等特点。

技术研发人员：白艳梅,张立佳,谢瑞龙,汪洋,刘丽君,李翠枝
受保护的技术使用者：内蒙古伊利实业集团股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15