叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法的制作方法

本发明属于医药检测分析领域，具体涉及一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法。

背景技术：

1、根据国家食品药品监督管理总局药品审评中心发表的文章、欧洲发布的警示结构指南、lutzmüller等文献资料及商业软件，对叶酸api合成工艺中用到的试剂、物料、中间体等进行(潜在)dna反应性(致突变)杂质评估，触发dna反应性(致突变)警示基团的杂质中包含亚硝酸钠(警示结构为亚硝酸根)，依据基因毒杂质thresholdof toxicologicalconcern(ttc，毒理学关注阈值)：1.5微克/天，按叶酸片的用法用量可得，叶酸最大日服用剂量30mg，即该杂质的限度应为50ppm，为对叶酸原料药中该基因毒性杂质进行有效检测与评估，我公司开发了一种能够检测叶酸原料药中基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法。

技术实现思路

1、为对叶酸原料药中该基因毒性杂质进行有效检测与评估，本发明的目的是提供一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，该方法检出限低，准确度高。

2、本发明提供了如下的技术方案：

3、一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：

4、把叶酸原料药通过蒸馏水溶解获得供试品溶液；亚硝酸根离子标准溶液加入蒸馏水稀释获得对照品溶液；然后精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入离子色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算即获得目标值；

5、其中，离子色谱仪的色谱条件为采用阴离子交换色谱柱和匹配的保护柱，以13mm～17mm氢氧化钠溶液为淋洗液，磷酸溶液为再生液，流速0.6-0.8ml/min，柱温40-50℃，进样体积100μl。

6、优选的，取叶酸原料药20mg，精密称定，置20ml量瓶中，加15mm氢氧化钠溶液适量溶解后，再加溶剂定容至刻度，摇匀；经0.22μm×13mm水系膜过滤，作为供试品溶液；

7、优选的，精密量取浓度为1000μg/ml的亚硝酸根离子标准溶液适量，加溶剂定量稀释制成每1ml含亚硝酸根离子0.05μg的溶液。

8、优选的，供试品溶液中亚硝酸根离子小于0.005％。

9、优选的，采用阴离子交换色谱柱metrosepa supp 7-250/4.0柱或效能相当的色谱柱，保护柱metrosepa supp 5-guard/4.0，以15mm氢氧化钠溶液为淋洗液，200mm磷酸溶液为再生液，流速0.7ml/min，柱温45℃，进样体积100μl；

10、本发明的有益效果：

11、本发明检出限低，精密度良好，且准确度高，可以对叶酸原料药中该基因毒性杂质进行有效检测与评估。补充了企业对于基因毒杂质亚硝酸盐痕量测定的技术短板。

技术特征：

1.叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：取叶酸原料药20mg，精密称定，置20ml量瓶中，加15mm氢氧化钠溶液适量溶解后，再加溶剂定容至刻度，摇匀；经0.22μm×13mm水系膜过滤，作为供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：精密量取浓度为1000μg/ml的亚硝酸根离子标准溶液适量，加溶剂定量稀释制成每1ml含亚硝酸根离子0.05μg的溶液。

4.根据权利要求1所述的一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：供试品溶液中亚硝酸根离子小于0.005％。

5.根据权利要求1所述的一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，其特征在于：采用阴离子交换色谱柱metrosep a supp 7-250/4.0柱或效能相当的色谱柱，保护柱metrosep a supp 5-guard/4.0，以15mm氢氧化钠溶液为淋洗液，200mm磷酸溶液为再生液，流速0.7ml/min，柱温45℃。

技术总结
本发明提供一种叶酸原料药基因毒杂质亚硝酸盐痕量离子色谱测定法，具体涉及医药检测分析领域。把叶酸原料药通过蒸馏水溶解获得供试品溶液；亚硝酸根离子标准溶液加入蒸馏水稀释获得对照品溶液；然后精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入离子色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算即获得目标值；其中，离子色谱仪的色谱条件为采用阴离子交换色谱柱和匹配的保护柱，以13mM～17mM氢氧化钠溶液为淋洗液，磷酸溶液为再生液，流速0.6‑0.8ml/min，柱温40‑50℃，进样体积100μl。本发明检出限低，准确度高，可以对叶酸原料药中该基因毒性杂质进行有效检测与评估。

技术研发人员：杨方程,燕立波,徐慧,金永华
受保护的技术使用者：江苏开元药业有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15