一种丙戊酸免疫层析检测卡的包被方法与流程

本发明属于体外检测试剂盒领域，具体涉及一种丙戊酸免疫层析检测卡的包被方法。

背景技术：

1、丙戊酸属于最为常用的广谱抗癫痫药，但丙戊酸属于窄治疗窗药物，因此严密监测患者的丙戊酸血药浓度十分重要。目前丙戊酸血药浓度的检测方法主要为质谱法、高效液相色谱法、均相酶免法、化学发光法以及荧光偏振法等，这些方法有的需要昂贵的仪器设备，有的对专业人员操作要求较高，检测步骤繁琐、用时长、价格昂贵，有的方法还存在灵敏度不佳的问题。因此，这些方法都不利于临床推广。

2、公开号为cn110954707a的中国发明专利，公开了一种丙戊酸衍生物及其制备方法，以及与含有上述丙戊酸衍生物的试剂盒及其配制方法。专利所述的丙戊酸检测试剂测定线性范围为10-170μg/ml，采用的方法为elisa法(酶联免疫吸附法)。该检测试剂使用过程中操作步骤相对复杂，灵敏度相对较低，不适合临床推广。

3、免疫层析法是一种快速的免疫学检测方法，利用免疫标记物在固相载体上进行层析分离，实现检测物含量的定量检测。将特异的抗体先固定于固相载体(如硝酸纤维素膜)的某一区带，当该干燥的固相载体一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，从而实现特异性的免疫诊断。但目前采用免疫层析法开发的丙戊酸检测试剂盒存在变异系数(cv)较大，灵敏度较差，工艺体系复杂的问题，无法满足用户对检测结果精准性的要求，也存在成本高的问题。

4、因此，开发一种检测快速、操作简单、灵敏度高、线性范围宽、稳定性好、结果精确、成本可控的丙戊酸浓度检测方法，在现有免疫层析检测试纸条上进行工艺改进和突破具有重要意义。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种丙戊酸免疫层析检测卡的包被方法。

2、本发明提供了一种包被缓冲液，它由糖类物质和磷酸盐缓冲液为组分组成；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.1～0.25m，包被缓冲液ph为7.0～9.0。

3、进一步地，所述糖类物质为海藻糖或蔗糖中一种或两种；

4、优选地，所述糖类物质的质量体积浓度为3～8％；质量体积浓度为3～8％表示100ml包被缓冲液中糖类物质有3～8g。

5、更优选地，所述糖类物质的质量体积浓度为6％。

6、进一步地，前述的包被缓冲液由蔗糖和磷酸盐缓冲液为组分组成；

7、所述蔗糖的质量体积浓度为6％；余量为磷酸盐缓冲液；

8、所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.2m，包被缓冲液ph为8.0。

9、本发明还提供了前述的包被缓冲液在制备丙戊酸免疫层析检测卡的用途；

10、优选地，前述的包被缓冲液在制备丙戊酸免疫层析检测卡中使用的标记垫的用途；

11、更优选地，前述的包被缓冲液在包被丙戊酸抗原和/或抗体中的用途。

12、本发明还提供了一种丙戊酸抗原和/或抗体的包被方法，它是使用前述的包被缓冲液进行包被。

13、进一步地，所述包被方法包括如下步骤：

14、(1)配制包被液：使用前述的包被缓冲液稀释丙戊酸抗原和/或抗体，配制成丙戊酸抗原包被液和/或丙戊酸抗体包被液；

15、(2)将配制的包被液在固相载体上进行划线；

16、(3)将固相载体烘干，即可。

17、进一步地，

18、步骤(1)中，所述丙戊酸抗原包被液和/或丙戊酸抗体包被液浓度为0.5～2mg/ml；

19、和/或，步骤(2)中，所述划线长度为300mm，划线喷量为0.8～1.2μl/cm；

20、和/或，步骤(2)中，所述丙戊酸抗原包被液在固相载体上划线为t线，所述丙戊酸抗体包被液在固相载体上划线为c线；

21、和/或，步骤(3)中，所述烘干的干燥温度为37～42℃，干燥时间为2～18h。

22、进一步地，

23、步骤(1)中，所述丙戊酸抗原包被液和/或丙戊酸抗体包被液浓度为1mg/ml；

24、和/或，步骤(2)中，所述划线长度为300mm，划线喷量为1μl/cm；

25、和/或，步骤(3)中，所述烘干的干燥温度为37℃，干燥时间为18h；

26、优选地，所述固相载体为硝酸纤维素膜。

27、本发明还提供了一种丙戊酸免疫层析检测卡中使用的标记垫，它是采用前述的包被方法制备而得。

28、本发明还提供了一种丙戊酸免疫层析检测卡，它包括前述的标记垫。

29、本发明中，“包被”是指将抗原或抗体结合到固相载体表面的过程。

30、本发明中，常温是指25℃。

31、免疫检测方法因简便快速的优点有望成为临床丙戊酸血药浓度监测常用的方法，但目前其检测试剂盒依赖进口，价格昂贵和有效期短是其不可回避的缺点。国内采用荧光免疫层析法开发的丙戊酸检测试剂盒存在变异系数(cv)高，cv值可达15％，灵敏度差的问题，无法满足用户对检测结果精准性的要求。因此免疫检测方法在临床使用上难以普及。

32、本发明开发了一种丙戊酸免疫层析检测卡的包被方法，其整体包被过程操作简单，包被后的nc膜可作为时间分辨荧光免疫层析法试剂盒的主要组分之一，适用于开发丙戊酸荧光免疫层析法检测试剂盒，该试剂盒可匹配多种检测仪器(手动、半自动、全自动仪器均可)对丙戊酸进行定量检测，满足客户多方面需要。本发明基于丙戊酸包被方法的丙戊酸时间分辨荧光免疫层析法检测试剂盒变异系数不大于10％，检测灵敏度高，可检测浓度为1.37μg/ml的丙戊酸，甚至0.457μg/ml与0μg/ml也能做到一定的区分，灵敏度与进口酶放大免疫测定法丙戊酸检测试剂接近，检测线性范围宽，稳定性好，且制成的试剂样本检测时间短，操作简单，提高了荧光免疫层析法的丙戊酸检测试纸条的临床应用。

33、综上，本发明提供了一种丙戊酸免疫层析检测卡的包被方法，该包被方法的整体包被过程操作简单，得到的包被膜适用于开发荧光免疫层析法丙戊酸检测试剂盒，采用该检测试剂盒可以对丙戊酸进行定量检测，并且检测丙戊酸时使用简便、检测快速、灵敏度高、线性范围宽、稳定性好、结果精确、成本可控。可实现样本现场快检，受仪器及场地的限制小，提高了荧光免疫层析法的丙戊酸检测试剂的临床应用，具有良好的应用前景。

34、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

35、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种包被缓冲液，其特征在于：它由糖类物质和磷酸盐缓冲液为组分组成；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.1～0.25m，包被缓冲液ph为7.0～9.0。

2.根据权利要求1所述的包被缓冲液，其特征在于：所述糖类物质为海藻糖或蔗糖中一种或两种；

3.根据权利要求1或2所述的包被缓冲液，其特征在于：它由蔗糖和磷酸盐缓冲液为组分组成；

4.权利要求1～3任一项所述的包被缓冲液在制备丙戊酸免疫层析检测卡的用途；

5.一种丙戊酸抗原和/或抗体的包被方法，其特征在于：它是使用权利要求1～3任一项所述的包被缓冲液进行包被。

6.根据权利要求5所述的包被方法，其特征在于：所述包被方法包括如下步骤：

7.根据权利要求6所述的包被方法，其特征在于：

8.根据权利要求7所述的包被方法，其特征在于：

9.一种丙戊酸免疫层析检测卡中使用的标记垫，其特征在于：它是采用权利要求5～8任一项所述的包被方法制备而得。

10.一种丙戊酸免疫层析检测卡，其特征在于：它包括权利要求9所述的标记垫。

技术总结
本发明提供了一种丙戊酸免疫层析检测卡的包被方法，属于体外检测试剂盒领域。本发明包被方法中使用的包被缓冲液由糖类物质和磷酸盐缓冲液为组分组成；所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.1～0.25M，包被缓冲液pH为7.0～9.0。本发明包被方法的整体包被过程操作简单，得到的包被膜适用于开发荧光免疫层析法丙戊酸检测试剂盒，采用该检测试剂盒可以对丙戊酸进行定量检测，并且检测丙戊酸时使用简便、检测快速、灵敏度高、线性范围宽、稳定性好、结果精确、成本可控。可实现样本现场快检，受仪器及场地的限制小，提高了荧光免疫层析法的丙戊酸检测试剂的临床应用，具有良好的应用前景。

技术研发人员：诸晓琴,王峰,鲁美宏,王春梅,郭谊,童志会,张传庆,陈功政,陈刚
受保护的技术使用者：四川科瑞德制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11