一种荧光素钠的含量测定方法与流程

本发明涉及化学药物检测领域，具体涉及一种荧光素钠的含量测定方法。

背景技术：

1、高纯度的荧光素钠被广泛应用于眼底造影的注射制剂中，作为一种诊断药物，对正常角膜等上皮不能染色，但能对损伤的角膜上皮染成绿色，从而可显示出角膜损伤、溃疡等病变。欧洲药典ep9.0版、美国药典usp 40-nf35版和《中国药典》2020年版标准中含量测定均采用hplc方法，但是色谱条件完全不一致。ep9.0版、usp 40-nf35版标准中荧光素钠的含量测定方法与有关物质测定方法一致，均为梯度洗脱，耗费时间较长，《中国药典》2020年版标准为等度洗脱，但检测波长并非荧光素钠的最大紫外吸收波长，且采集时间比较长。

2、因此，在现有技术存在上述问题的情况下，很有必要研发出一种能够快速、有效、准确测定荧光素钠含量的方法。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足,本发明在现有技术的基础上进行优化改进，改变流动相比例和检测波长，建立荧光素钠的含量测定方法。

2、一方面，本发明提供了一种荧光素钠的含量测定方法，采用高效液相色谱法进行等度洗脱，高效液相色谱测定条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以乙腈为流动相a，以磷酸水溶液为流动相b；检测波长225nm。

3、优选的，磷酸水溶液浓度为0.08％～0.12％，进一步优选的，浓度为0.1％。

4、优选的，流动相a的比例为35％～45％，流动相b的比例为65％～55％，进一步优选的，流动相a的比例为40％，流动相b的比例为60％。

5、优选的，色谱柱的柱温为25℃～35℃，进一步优选的，色谱柱的柱温为30℃。

6、优选的，流动相的流速为0.9～1.1ml/min，进一步优选的，流速为1.0ml/min。

7、一方面，本发明提供一种荧光素钠的含量测定方法，包括以下步骤：

8、(1)对照品溶液配制：取荧光素钠对照品适量，精密称定，用水制成每1ml中含荧光素钠对照品10μg的溶液，作为对照品溶液。

9、(2)供试品溶液配制：精密称取荧光素钠样品适量，用水制成每1ml中含荧光素钠10μg的溶液，作为供试品溶液。

10、(3)设置色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以乙腈为流动相a，以磷酸水溶液为流动相b，磷酸水溶液浓度0.08％～0.12％，流动相b的比例为65％～55％，流动相a的比例为35％～45％；流速0.9～1.1ml/min；检测波长225nm；柱温25～35℃。

11、(4)测定方法和结果计算：精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算供试品中荧光素钠的含量。

12、另一方面，本发明提供一种应用于荧光素钠原料药及荧光素钠相关制剂含量测定的方法。

13、本发明荧光素钠的含量测定方法相比现有技术具有以下优点：

14、本发明对荧光素钠含量测定色谱条件中的流动相及流动相比例，波长等进行摸索，经适当优化改进，确定了检测方法，并对方法做了详细的方法学考察，经系统适用性试验、精密度试验、线性范围试验、溶液稳定性试验、回收率试验和耐用性等方法学研究，采用本方法测定荧光素钠的含量可行，灵敏度高且快速。

技术特征：

1.一种荧光素钠的含量测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱法进行等度洗脱，所述高效液相色谱测定条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以乙腈为流动相a，以磷酸水溶液为流动相b；检测波长225nm。

2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述磷酸水溶液浓度为0.08％～0.12％。

3.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，流动相a的比例为35％～45％，流动相b的比例为65％～55％。

4.根据权利要求3所述的含量测定方法，其特征在于，流动相a的比例为40％，流动相b的比例为60％。

5.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为25℃～35℃。

6.根据权利要求5所述的含量测定方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为30℃。

7.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.9～1.1ml/min。

8.根据权利要求7所述的含量测定方法，其特征在于，所述流动相的流速为1.0ml/min。

9.一种荧光素钠的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

10.根据权利要求1-9中任一项所述的荧光素钠的含量测定方法，其特征在于，该方法用于荧光素钠原料药及荧光素钠相关制剂的含量测定。

技术总结
本发明公开了一种荧光素钠的含量测定方法，采用高效液相色谱法进行等度洗脱，色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；以乙腈为流动相A，以磷酸水溶液为流动相B，磷酸水溶液浓度0.08％～0.12％，流动相B的比例为65％～55％，流动相A的比例为35％～45％；流速0.9～1.1ml/min；检测波长225nm；柱温25～35℃。本发明的方法灵敏度高、重复性好、准确度高且快速，并且显著优于中国药典、美国药典及欧洲药典中的检测方法。

技术研发人员：韦思遥,陈永宁,王海燕,冯晓琳,吴水华,刘洋,何毅,李鑫,郑志远,黄源春
受保护的技术使用者：广西梧州制药（集团）股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11