一种赛乐西帕中甲磺酸酯类杂质的检测方法与流程

本发明属于化学药物分析方法，具体涉及一种赛乐西帕中甲磺酸酯类杂质的 检测方法。

背景技术：

1、赛乐西帕，英文通用名selexipag，化学名为2-[4-[n’-(5，6-二苯基哌嗪-2-基)-n’-异丙基氨 基]丁氧基}-n’-(甲磺酰基)乙酰胺，具有式i所示的结构式。

2、

3、赛乐西帕由日本新药株式会社发现，并由日本新药株式会社和瑞士爱可泰隆生物科技 公司共同开发用于pah的治疗。赛乐西帕已获得fda批准，用于成人肺动脉高压的治疗。

4、根据文献报道，赛乐西帕常见合成策略如下所示：

5、

6、合成策略1中使用到甲磺酰氯，采用本策略合成赛乐西帕是极有可能有甲磺酸或者甲 磺酰氯残留。合成策略2中使用到的甲磺酰胺，由甲磺酰氯和氨反应产生；合成策略3中 的中间体4，主要由卤代乙酰卤和甲磺酰胺反应来制备，因此采用策略2和3合成赛乐西帕也有甲磺酸或者甲磺酰氯存在可能。另一方面，甲醇、乙醇、异丙醇等低级醇在原料药 合成过程中使用极其普遍，而且其潜在来源如酯类溶剂的水解、醚的水解等也很常见。当 甲磺酸或者甲磺酰氯在有甲醇、乙醇、异丙醇等低级醇存在时都容易发生反应生成具有遗 传毒性杂质甲磺酸甲酯(mms)和甲磺酸乙酯(ems)和甲磺酸异丙酯(ims)。而且在 这些合成策略中，甲磺酸和甲磺酰氯残留集中在合成工艺的末端，进一步增加了原料药中 磺酸酯残留的风险。因此，需要基于赛乐西帕合成工艺中甲醇、乙醇和异丙醇等低级醇的 实际使用情况以及工艺中低级醇潜在来源对赛乐西帕合成工艺中产生mms、ems和ims 的可能性进行评估。一旦确认存在甲磺酸酯的可能，应基于国际人用药品注册技术协调会 (ich)相关指导原则，结合赛乐西帕产品特性制定合理甲磺酸酯控制策略，并使用经过 验证的分析方法对产品进行检测，以证明产品中甲磺酸酯含量水平是安全可控的。

7、目前并无检测赛乐西帕中甲磺酸酯类杂质的分析。虽然《欧洲药典》及cde《磺酸盐类药物中磺酸烷基酯类杂质检测方法(征求意见稿)》收载了甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、 甲磺酸异丙酯的检测方法，但该方法的适用范围仅限于磺酸盐类原料药。参考《欧洲药典》 及cde方法的色谱条件，进行甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯的检测方法的初步 考察，发现样品溶解度差，基质干扰大，相邻峰分离度差，衍生效果差，导致回收率低等 缺点。因此，需要建立合适的分析方法，以达到对赛乐西帕中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、 甲磺酸异丙酯准确、有效的检测和监控。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种赛乐西帕中甲磺酸酯类杂质的检测方法。

2、为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：

3、一种赛乐西帕中甲磺酸酯类杂质的检测方法，包括如下步骤：

4、(1)配制衍生化溶液，配制内标溶液，配制灵敏度溶液，配制对照溶液，配制供试品溶液；

5、(2)采用的电子源为电子轰击离子源，采用安捷伦j&w db-wax(30m×0.32mm×0.25μm) 色谱柱，以氦气为载气，采用恒流模式，柱温采用梯度升温模式，从40℃升至240℃，顶 空进样；

6、(3)取步骤(1)的灵敏度溶液、对照溶液和供试品溶液分别进样，记录质谱总离子流图；

7、(4)采用外标法来计算出样品溶液中甲磺酸酯的浓度。可根据对照溶液的甲磺酸酯浓 度、对照溶液和样品溶液中甲磺酸酯的积分峰面积来计算出样品溶液中甲磺酸酯的浓度。

8、具体的，所述灵敏度溶液的浓度为0.0025μg/ml，所述对照溶液的浓度为0.0625μg/ml， 所述供试品溶液的浓度为12.5mg/ml。

9、具体的，所述对照溶液的配制方法为：精密称取mms、ems和ims各约25mg，用 dmf溶解并稀释至5.0ml。精密移取50μl，置25ml容量瓶中，加内标溶液稀释至刻度， 混匀得对照品储备液；精密量取对照品贮备液0.5ml，置20ml容量瓶中，用内标溶液稀 释至刻度；移取上述溶液0.5ml至顶空瓶中，加入1.5ml内标溶液，密封；

10、具体的，所述灵敏度溶液的配制方法为：精密量取对照品贮备液20μl，置20ml容量瓶中，用内标溶液稀释至刻度；移取上述溶液0.5ml至顶空瓶中，加入1.5ml内标溶液， 密封；

11、具体的，所述供试品溶液的配制方法为：精密称取约25mg赛乐西帕样品，加0.5ml衍 生化溶液，加入1.5ml内标溶液，密封至顶空瓶中，振摇溶解，密封；

12、具体的，所述内标溶液的配制方法为：精密移取甲磺酸正丁酯10μl，置25ml量瓶中， 加甲苯稀释至刻度，再精密量取20μl，置100ml量瓶中，用dmf稀释至刻度得内标溶液：

13、具体的，所述衍生化溶液的配制方法为：称取碳酸氢钠5g、30mg无水硫代硫酸钠和60.0g碘化钠至50ml容量瓶中，加水超声溶解，并稀释到刻度得到衍生化溶液；或取维生 素c 10mg，置10ml容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度；精密量取上述溶液1ml，置 50ml容量瓶中；取碳酸氢钠5g和碘化钠60.0g，置同一容量瓶中，加水适量，超声使溶解 并稀释至刻度。

14、具体的，所述梯度升温的具体过程为：40℃保持1min，以10℃/min的速度升至130℃， 保持0min，最后以20℃/min的速度升至240℃，并保持7min。

15、具体的，所述恒流模式下的流速为0.8ml/min，分流比为10∶1。

16、具体的，所述顶空进样器参数为：顶空温度60℃，传输线温度：120℃，平衡时间：30min，进样量为1.0ml。

17、具体的，质谱仪参数为：离子源：电子轰击离子源，离子源温度：150℃，传输管线温度：230℃，电子能量：70ev，检测模式：选择离子模式；监测离子对包括142/127和/或156/127和/或170/127和184/127。

18、有益效果：本发明采用溶解样品中的甲磺酸酯，使用碱催化衍生后进顶空气相-质谱分 析的技术。通过电子轰击离子源轰击衍生化后化合物，从而产生电子和分子离子，分子离 子继续受到电子轰击而引起化学键的断裂瞬间产生多种离子，通过特征离子碎片来鉴定甲 磺酸酯的存在并对其进行定量，方法快速、准确且灵敏度高。

技术特征：

1.一种赛乐西帕中甲磺酸酯类杂质的检测方法，其特征在于，方法步骤如下：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述带有顶空进样器的气相色谱-质谱仪的品牌选自安捷伦；所述惰性聚乙二醇毛细管色谱柱选自安捷伦j&w db-wax色谱柱；所述色谱柱的规格为30m×0.32mm×0.25μm；所述的甲磺酸酯类杂质选自甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯或甲磺酸异丙中的两种或几种；内标化合物选自甲磺酸丁酯；所述平行进样的针数为6针。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述升温程序的参数为40-60℃保持0-5min，以5-20℃/min的速度升至100-150℃，并保持0-5min，最后以10-50℃/min的速度升至220-260℃，并保持1-10min；所述供试品溶液的制备方法为：精密称取约25mg赛乐西帕样品，加入0.5ml衍生化溶液，加入1.5ml内标溶液，密封至顶空瓶中，振摇溶解，密封；

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述升温程序的参数为40℃保持1min，以10℃/min的速度升至130℃，保持0min，最后以20℃/min的速度升至240℃，并保持7min。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件还包括：

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述载气流速为0.5-2ml/min；所述进样模式的分流比为1-50∶1。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，顶空条件为顶空温度：45-80℃，传输线温度：80-140℃，平衡时间：20-70min；进样量为0.5-2ml。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，质谱条件为：离子源：电子轰击离子源，离子源温度：120-200℃，传输管线温度：200-250℃，电子能量：70ev，检测模式：选择离子模式；监测离子对包括142/127和/或156/127和/或170/127和184/127。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述质谱条件为离子源：电子轰击离子源，离子源温度：150℃，传输管线温度：230℃，电子能量：70ev，检测模式：选择离子模式；监测离子对包括142/127和/或156/127和/或170/127和184/127。

10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述甲磺酸酯类杂质包括甲磺酸甲酯和/或甲磺酸乙酯和/或甲磺酸异丙酯。

技术总结
本发明属于化学药物分析方法技术领域，具体涉及一种赛乐西帕中甲磺酸酯类杂质的检测方法。本发明采用顶空气相色谱‑质谱法，其色谱条件包括：色谱柱采用惰性聚乙二醇为固定液的毛细管柱；采用氦气作为载气进行程序升温洗脱；采用碳酸盐或碳酸氢盐‑硫代硫酸钠‑碘化钠或碳酸盐或碳酸氢盐‑维生素C‑碘化钠作为衍生试剂；以甲磺酸丁酯作为内标物；以溶剂溶解样品后，加衍生试剂反应。本发明的方法能够专属性强、灵敏度高、耐受性好、重现性好、精密度高、峰形好，可以用于实际生产中对赛乐西帕中甲磺酸酯类杂质的有效控制。

技术研发人员：贾强,王云中,刘恩萍,华莹,黄雅婷,程丽丽,叶爱玲,赖广健,陈灵晓
受保护的技术使用者：普济生物科技（台州）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/24