基于HSA辅助识别的D-青霉胺分子印迹传感器的制备方法

基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的制备方法
技术领域
1.本发明涉及分子印记传感器技术领域，具体涉及一种基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的制备方法。


背景技术：

2.手性分子在众多领域都有着应用，尤其是在医药领域，含有手性中心的药物，其对映体的自身性质都有很大差异，大部分手性药物中的一种对映体是具有药性的，而另一种对映体是没有药性的，甚至是有毒副作用的，因此对手性药物对映体的测定分离至关重要。
3.常规的手性分离识别方法有高效液相色谱手性固定相(csps)法、色谱分离法、高速逆流色谱、毛细管电泳分离法、结晶法、化学拆分法、生物膜拆分法，这些方法的手性分离效果差，分离效率低，环境污染，由此需要引进新技术来研究一种高效的手性分离方法。
4.分子印迹技术(mit)制备的分子印迹传感器(mips)具有结构的可预测性、识别的特异性和应用的广泛性等独特特点，有着能够选择性识别并检测特定目标化合物，设计简单、灵敏度高、价格低廉、携带方便、易于微型化和自动化等优点。因为自身特有的“特定”的高手性选择性，广泛应用于手性拆分以及药物等领域。但是常规分子印迹传感器在对目标分子进行识别时，抗干扰能力弱，会识别与目标分子结构相似的物质以及对映体，洗脱后得到的mips结构不稳定等问题。
5.人血清白蛋白(human serum albumin,hsa)作为循环系统中主要的可溶性蛋白和其它蛋白质相比，hsa具有分子量小、溶解性大、稳定性较好、很好的亲和性及能同多种物质结合(如金属离子、脂肪酸、氨基酸、激素及药物等)的特点。蛋白质是天然的手性选择剂，具有丰富的手性中心，大多数蛋白质都能手性特异性的反向键合分子。hsa手性识别主要通过位点ⅰ和位点ⅱ对分子进行手性识别，通过一些非共价键的结合，指受体的活性位点周围的氨基酸残基中的原子与对应此活性位点的配基中的原子之间的相互作用力。
6.青霉胺(3，3-二甲基半胱氨酸，pen)是青霉素加水分解而生成的低分子氨基酸，有右和左旋的光学异构体，在化学性质上截然不同，如青霉胺的手性对映体d-青霉胺(d-pen)：d-青霉胺对铜、汞、铅等重金属离子有较强的络合作用，能与汞形成不易离解的低毒性络合物由尿或粪排出，性质稳定、溶解度高。在临床上d-青霉胺被广泛地用于许多疾病的治疗，如风湿性关节炎和威尔逊疾病，被作为螯合剂用于铅中毒的治疗。而l-青霉胺是一种特效药物的中间体，用于合成一种蛋白酶抑制剂，具有很强的抗病毒能力，对艾滋病有很明显的预防和治疗作用。且l-青霉胺有毒性，人在服用后会引发神经类疾病，对人体健康和环境都有害。目前在药物分析中所发表的手性分离d、l-青霉胺的方法很少，如高效液相色谱法、毛细管电泳等方法。但是这些分离方法都较为繁琐。
7.目前，还没有一种分离效果好、选择性强而且灵敏度高的快速手性分离的方法。


技术实现要素：

8.针对现有技术中的缺陷，本发明提供了一种基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印
迹传感器的制备方法，本发明提供的方法将人血清白蛋白引入分子印迹材料的制备，以hsa和目标分子形成的复合物来固定目标分子的空间构象，增强对d-青霉胺的特异性识别，同时改善印迹孔穴空间结构精细程度并增加识别位点。用半胱氨酸与戊二醛结合将其修饰在金电极表面，再结合人血清白蛋白，最后结合目标分子d-青霉胺，以邻苯二胺作为功能单体，用电聚合法构建hsa-d-pen复合物印迹聚合物。单独洗脱d-青霉胺后，得到与d-青霉胺的空间构象、大小、结构、及识别位点均相互匹配互补的印迹空腔，从而制得高特异性构象识别d-青霉胺的手性分子印迹传感器。
9.本发明的目的在于保护一种基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的制备方法，步骤如下：
10.s1.将裸金电极用氧化铝抛光粉在麂皮表面进行抛光，将抛光后的金电极依次置于硝酸溶液、无水乙醇、二次水中进行超声，以铁氰化钾溶液作为探针分子，使用循环伏安法测定至金电极电压响应值小于120mv，得到洗净后的金电极；
11.s2.将洗净后的金电极通过半胱氨酸溶液进行修饰，再通过戊二醛溶液进行修饰，浸入人血清白蛋白溶液中进行羰基和氨基结合，浸入d-青霉胺溶液中结合识别，得到hsa-d-pen复合物修饰的金电极；
12.s3.将hsa-d-pen复合物修饰的金电极浸入邻苯二胺溶液中预组装，进行电聚合，得到印迹聚合物修饰的金电极；
13.s4.将印迹聚合物修饰的金电极置于pbs缓冲溶液中进行洗脱，得到所述的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器。
14.优选地，步骤s1中，所述的用氧化铝抛光粉在麂皮表面进行抛光为依次用1.0、0.3、0.05μm的氧化铝抛光粉在麂皮表面进行抛光。
15.优选地，步骤s1中，所述的硝酸溶液为1：1硝酸溶液；所述的超声的时间均为1min；所述的铁氰化钾溶液的浓度分别为5.0
×
10-3
mol/l。
16.优选地，步骤s2中，所述的半胱氨酸溶液的浓度为0.1mol/l，所述的通过半胱氨酸溶液进行修饰的时间为2h；
17.所述的戊二醛溶液为5％的戊二醛溶液。
18.优选地，步骤s2中，所述的人血清白蛋白溶液的浓度为4.0
×
10-5
mol/l，进行羰基和氨基结合结合的时间为55min。
19.优选地，步骤s2中，所述的d-青霉胺溶液的浓度为4.0
×
10-5
mol/l；所述的浸入d-青霉胺中结合识别的时间为30min。
20.优选地，步骤s3中，所述的邻苯二胺溶液的浓度为1.0
×
10-4
mol/l。
21.优选地，步骤s3中，所述的进行电聚合的条件：聚合圈数为15圈，扫描范围为﹣0.2v～+0.6v，扫描速率为50mv/s。
22.优选地，步骤s4中，所述的pbs缓冲溶液的浓度为0.20mol/l，ph＝7.4。
23.优选地，步骤s4中，所述的进行洗脱为采用时间电流电位为1.05v洗脱50min。
24.本发明的有益效果体现在：
25.(1)本发明提供的方法将人血清白蛋白引入分子印迹材料的制备，以hsa和目标分子形成的复合物来固定目标分子的空间构象，增强对d-青霉胺的特异性识别，同时改善印迹孔穴空间结构精细程度并增加识别位点。用半胱氨酸与戊二醛结合将其修饰在金电极表
面，再结合人血清白蛋白，最后结合目标分子d-青霉胺，以邻苯二胺作为功能单体，用电聚合法构建hsa-d-pen复合物印迹聚合物。单独洗脱d-青霉胺后，得到与d-青霉胺的空间构象、大小、结构、及识别位点均相互匹配互补的印迹空腔，从而制得高特异性构象识别d-青霉胺的手性分子印迹传感器。
26.(2)本发明提供的方法制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器对d-青霉胺的手性结构可以特异性识别，特异性强，能有效识别分离手性分子，抗干扰能力强。
附图说明
27.为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
28.图1为实施例提供的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的伏安响应图；
29.图2为对比例制得的非分子印迹传感器的伏安响应图；
30.图3为实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的阻抗响应图；
31.图4为实施例提供的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器在不同浓度d-青霉胺时的电流响应信号；
32.图5为常规分子印迹传感器手性识别效果；
33.图6为实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器手性识别效果；
34.图7为实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的抗干扰能力；
35.附图1中，a-修饰半胱氨酸的金电极，b-修饰戊二醛的金电极，c-结合人血清白蛋白的金电极，d-hsa-d-pen复合物修饰的金电极，e-印迹聚合物修饰的金电极，f-基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器，i-基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器对d-青霉胺进行重吸附；
36.附图2中，a-裸金电极，b-修饰戊二醛的金电极，c-结合人血清白蛋白的金电极，d-非分子印迹传感器，e-非分子印迹传感器对d-青霉胺进行重吸附；
37.附图3中，a-修饰半胱氨酸的金电极，b-修饰戊二醛的金电极，c-结合人血清白蛋白的金电极，d-hsa-d-pen复合物修饰的金电极，e-印迹聚合物修饰的金电极，f-基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器，i-基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器对d-青霉胺进行重吸附；
38.附图4中，1-d-青霉胺浓度为2.0
×
10-14
mol/l，2-d-青霉胺浓度为4.0
×
10-14
mol/l，3-d-青霉胺浓度为6.0
×
10-14
mol/l，4-d-青霉胺浓度为2.0
×
10-13
mol/l，5-d-青霉胺浓度为4.0
×
10-13
mol/l，6-d-青霉胺浓度为6.0
×
10-13
mol/l，7-d-青霉胺浓度为2.0
×
10-12
mol/l，8-d-青霉胺浓度为4.0
×
10-12
mol/l，9-d-青霉胺浓度为6.0
×
10-12
mol/l，10-d-青霉胺浓度为2.0
×
10-11
mol/l，11-d-青霉胺浓度为4.0
×
10-11
mol/l，12-d-青霉胺浓度为6.0
×
10-11
mol/l。
39.附图5中，a-空白，b-识别l-青霉胺，c-识别消旋体，d-识别d-青霉胺；
40.附图6中，a-空白，b-识别l-青霉胺，c-识别消旋体，d-识别d-青霉胺。
具体实施方式
41.下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
42.需要注意的是，除非另有说明，本技术使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
43.实施例
44.本实施例提供了一种基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的制备方法，步骤如下：
45.s1.将裸金电极用氧化铝抛光粉在麂皮表面进行抛光，将抛光后的金电极依次置于硝酸溶液、无水乙醇、二次水中进行超声，以铁氰化钾溶液作为探针分子，使用循环伏安法测定至金电极电压响应值小于120mv，得到洗净后的金电极；
46.s2.将洗净后的金电极通过半胱氨酸溶液进行修饰，再通过戊二醛溶液进行修饰，浸入人血清白蛋白溶液中进行羰基和氨基结合，浸入d-青霉胺溶液中结合识别，得到hsa-d-pen复合物修饰的金电极；
47.s3.将hsa-d-pen复合物修饰的金电极浸入邻苯二胺溶液中预组装，进行电聚合，得到印迹聚合物修饰的金电极；
48.s4.将印迹聚合物修饰的金电极置于pbs缓冲溶液中进行洗脱，得到所述的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器。
49.步骤s1中，用氧化铝抛光粉在麂皮表面进行抛光为依次用1.0、0.3、0.05μm的氧化铝抛光粉在麂皮表面进行抛光。
50.步骤s1中，硝酸溶液为1：1硝酸溶液；所述的超声的时间均为1min；铁氰化钾溶液的浓度分别为5.0
×
10-3
mol/l。
51.步骤s2中，半胱氨酸溶液的浓度为0.1mol/l，所述的通过半胱氨酸溶液进行修饰的时间为2h；戊二醛溶液为5％的戊二醛溶液。
52.步骤s2中，人血清白蛋白溶液的浓度为4.0
×
10-5
mol/l，进行羰基和氨基结合结合的时间为55min。
53.步骤s2中，d-青霉胺溶液的浓度为4.0
×
10-5
mol/l；浸入d-青霉胺中结合识别的时间为30min。
54.步骤s3中，邻苯二胺溶液的浓度为1.0
×
10-4
mol/l。
55.步骤s3中，进行电聚合的条件：聚合圈数为15圈，扫描范围为﹣0.2v～+0.6v，扫描速率为50mv/s。
56.步骤s4中，pbs缓冲溶液的浓度为0.20mol/l，ph＝7.4。
57.步骤s4中，进行洗脱为采用时间电流电位为1.05v洗脱50min。
58.对比例
59.本对比例提供了一种非分子印迹传感器的制备方法，与实施例的不同之处在于：不包括s2中的步骤：浸入d-青霉胺溶液中结合识别。
60.试验例1
61.测试实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的伏安响应
62.试剂配制：取三粒青霉胺药片(质量为1.0698g)放入研钵中研细，称取0.0428g药粉于50ml烧杯中，加入20ml去离子水使其溶解后装入50ml离心管进行离心，取上清液(多次用去离子水洗涤滤渣-离心-取上清液)定容至1000ml容量瓶中，用移液枪移取出100μl上清液定容至100ml容量瓶中作待测液。
63.测试方法：将实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器对样品液体进行重吸附识别d-青霉胺，记录dpv响应值。
64.测试结果：见图1。
65.从图1可知，在洗净后的金电极修饰半胱氨酸，得到修饰半胱氨酸的金电极(曲线“a”)后修饰5％戊二醛40min，得到修饰戊二醛的金电极(曲线“b”)，再浸入1.0
×
10-5
mol/l人血清白蛋白进行羰基和氨基结合55min，得到结合人血清白蛋白的金电极(曲线“c”)，在结合人血清白蛋的电极上结合识别1.0
×
10-12
mol/l目标分子d-青霉胺30min，得到hsa-d-pen复合物修饰的金电极(曲线“d”)，以上步骤在一定程度上阻碍了电子的传递，相比裸金电极而言，探针分子还原峰电流强度明显下降。
66.用10.00ml1.0
×
10-4mol/l邻苯二胺为底液电聚合制备hsa-d-pen印迹聚合物，得到得到印迹聚合物修饰的金电极，在聚合后的电极表面形成一层致密且导电效果差的印迹膜，严重阻碍了电信号的传递效率，探针分子信号强度急剧下降(曲线“e”)。将d-青霉胺单独洗脱后，得到可传递电子的印迹孔穴，得到基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器，因而探针分子的响应信号电流强度明显增大(曲线“f”)；重吸附d-青霉胺目标分子20min后，由于分子进入印迹孔穴，再次阻碍了电子的传递，探针分子的响应信号急剧上升(曲线“i”)。
67.试验例2
68.测试对比例制得的非分子印迹传感器的伏安响应
69.试剂配制：取三粒青霉胺药片(质量为1.0698g)放入研钵中研细，称取0.0428g药粉于50ml烧杯中，加入20ml去离子水使其溶解后装入50ml离心管进行离心，取上清液(多次用去离子水洗涤滤渣-离心-取上清液)定容至1000ml容量瓶中，用移液枪移取出100μl上清液定容至100ml容量瓶中作待测液。
70.测试方法：将对比例制得的非分子印迹传感器对样品液体进行重吸附识别d-青霉胺，记录dpv响应值。
71.测试结果：见图2。
72.从图2可知，在裸金电极(曲线“a”)上用半胱氨酸修饰戊二醛到电极表面，得到修饰戊二醛的金电极(曲线“b”)，然后在半胱氨酸修饰戊二醛后结合4.0
×
10-5
mol/l人血清白蛋白，得到结合人血清白蛋白的金电极(曲线“c”)，此时探针分子响应信号急剧下降，经过洗脱后，得到非分子印迹传感器(曲线“d”)的响应信号强度与电聚合的响应信号强度基本一致。重吸附1.0
×
10-12
mol/l d-青霉胺(曲线“e”)后的dpv响应值和洗脱后(曲线“d”)基本相同。因为在制备nmips传感器的过程中，不结合目标分子，所以洗脱后不能形成分子印迹孔穴，导致电子不能传递。因此，用人血清白蛋白辅助识别目标分子为d-青霉胺制备的分子印迹传感器对d-青霉胺为特异性吸附。也证明了1.05v洗脱电位对电极上修饰的其他材料在洗脱过程中无影响。
73.试验例3
74.测试实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的阻抗响应
75.测试结果：见图3所示。
76.从图3可知，裸金电极在无修饰物质的情况下导电能力是最好的，其电阻值最小(曲线“a”)。
77.修饰戊二醛的金电极：利用半胱氨酸将戊二醛修饰到电极表面后电阻变大，通过的电流发生微弱减小(曲线“b”)，修饰后阻碍了一些电极上的电子转移。
78.结合人血清白蛋白的金电极：当结合人血清白蛋白后，阻值迅速变大(曲线“c”)；hsa-d-pen复合物修饰的金电极：结合目标分子后，阻值继续增大(曲线“d”)；
79.印迹聚合物修饰的金电极：利用邻苯二胺电聚合15圈后，电极表面形成导电性差的致密聚合膜，严重阻碍了电子转移，电阻急剧增大(曲线“e”)；
80.基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器：将目标分子洗脱后，留下了可通过电子的印迹孔穴，阻值减小(曲线“f”)；
81.基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器对d-青霉胺进行重吸附：重吸附目标分子后，d-青霉胺进入识别孔穴，堵塞电子转移路径，阻值再次增大(曲线“g”)。表明基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器各制备条件下具有相同的电化学特性，得到的结论与差分脉冲伏安法的响应结果相同。
82.试验例4
83.测试实施例提供的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器在不同浓度d-青霉胺时的电流响应信号。
84.测试方法：d-青霉胺浓度1
→
12分别为：2.0
×
10-14
、4.0
×
10-14
、6.0
×
10-14
、2.0
×
10-13
、4.0
×
10-13
、6.0
×
10-13
、2.0
×
10-12
、4.0
×
10-12
、6.0
×
10-12
、2.0
×
10-11
、4.0
×
10-11
、6.0
×
10-11
mol/l。
85.测试结果:见图4所示。
86.从图4可知，基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器相应强度变化随着d-青霉胺浓度的对数(lgc)增大而减小，能够在2.0
×
10-14
mol/l～6.0
×
10-11
mol/l的梯度浓度内呈现良好正相关线性，检出限为5.39
×
10-15
mol/l。线性方程为δi(μa)＝1.0737
×
10-6
lgc(mol/l)+3.1065
×
10-6
(r＝0.9937)。
87.试验例5
88.检测实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的手性识别效果
89.常规分子印迹传感器的制备方法如下：将裸金电极置于1.0
×
10-4
mol/l邻苯二胺与4.0
×
10-5
mol/ld-青霉胺体积比为3:1混合的溶液中，通过循环伏安法进行电聚合15圈，扫描范围为﹣0.2v～+0.6v，扫描速率为50mv/s。将聚合后的电极材料用it电位为1.05v洗脱50min，得到常规分子印迹传感器。
90.采用常规分子印迹传感器依次对浓度为1.0
×
10-12
mol/l的d-青霉胺、1.0
×
10-12
mol/l的l-青霉胺以及同浓度的消旋体进行重吸附识别，结果如图所示，空白的伏安响应值(曲线“a”)；识别l-青霉胺分子(曲线“b”)；识别消旋体(曲线“c”)；识别d-青霉胺分子(曲线“d”)；由图5可知，常规分子印迹传感器在分别识别1.0
×
10-12
mol/l的l-青霉胺、d-青霉胺及消旋体时都有伏安响应，虽然识别d-青霉胺的响应信号很大，但是识别消旋体的响应信号已经超过了识别d-青霉胺的响应信号的一半，这会对检测结果的准确性产生严重误差
和干扰。造成这样结果的原因是常规分子印迹传感器时无法形成固定的手性构象孔穴，使得在识别过程中无法形成手性选择。
91.采用实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器对浓度为均为1.0
×
10-12
mol/l的d-青霉胺、l-青霉胺以及消旋体进行识别，如图6，从图6可知，识别l-青霉胺的响应信号强度只有识别d-青霉胺的2.87％，识别消旋体的信号强度是d-青霉胺的5.74％，即本发明提供的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器能特异性识d-青霉胺，这是由于人血清白蛋白在结合了d-青霉胺复合物后固定了d-青霉胺的手性结构，在洗脱后形成了同样手性构象的孔穴，再识别d-青霉胺时能够快速准确的识别，也大大降低了消旋体以及l-青霉胺的干扰。
92.试验例6
93.检测实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的稳定性、重现性
94.采用实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器，对d-青霉胺平行测定5次，得到的实验结果的相对标准偏差rsd＝3.89％，由此可知本发明提供的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器具有良好的稳定性。
95.同时制备5根实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器，依次测定1.0
×
10-12mol/l的d-青霉胺，得到的结果的相对标准偏差rsd＝4.1％，由此可知本发明提供的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器具有具有很好的重现性。
96.试验例7
97.检测实施例制得的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器的抗干扰能力
98.在1.0
×
10-12mol/l的d-青霉胺中加入浓度为1.0
×
10-9mol/l的与目标分子结构相似的物质：丙氨酸(ala)、缬氨酸(vla)、半胱氨酸(cys)、苯丙氨酸(phe)进行重吸附识别，将传测定结果与识别d-青霉胺的识别结果进行比较，结果见图7。从图7中可知，干扰物中对d-青霉胺干扰最大的半胱氨酸(cys)响应信号仅为4.93％。所以，本发明提供的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器对结构相似物质的识别能力弱，能对d-青霉胺特异性识别。
99.试验例8
100.样品检测
101.准确移取100μl样品溶液于10ml烧杯中用10.00ml去离子水稀释，分别用实施例的制备方法制备好的4根基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器识别样品溶液20min后，分别测定伏安响应信号。使用加标回收法检验传感器的精确度。
102.其中，样品溶液的制备方法：取三粒青霉胺药片(质量为1.0698g)放入研钵中研细，称取0.0428g药粉于50ml烧杯中，加入20ml去离子水使其溶解后装入50ml离心管进行离心，取上清液(多次用去离子水洗涤滤渣-离心-取上清液)定容至1000ml容量瓶中，用移液枪移取出100μl上清液定容至100ml容量瓶中作待测液。
103.从表1中可知，本发明提供的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器对样品中d-青霉胺的回收率为97.20％～101.80％，即本发明的基于hsa辅助识别的d-青霉胺分子印迹传感器能应用于青霉胺片中d-青霉胺的检测，且检测性好，可实际应用于检测。
104.表1
[0105][0106][0107]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。