过氧化物酶偶联物的稀释剂及其应用的制作方法

本申请涉及生物，特别是涉及一种过氧化物酶偶联物的稀释剂及其应用。

背景技术：

1、化学发光免疫分析技术(chemiluminescence immunoassay，clia)是将化学反应发光和抗原抗体间特异性反应相结合的定量免疫检测技术。因其具有线性范围宽、灵敏度高、特异性强等诸多优点，目前已成为免疫分析技术的主流方法。免疫分析法检测的高灵敏性和高准确性建立在良好的信噪比(特异性结合的目标检测物信号值与非特异吸附产生的本底信号值之比)的基础上。

2、在化学发光免疫分析技术中，将辣根过氧化物酶与抗体偶联形成过氧化物酶偶联物，然后进行酶促化学发光的方法应用最为广泛。其中，过氧化物酶偶联物通常制备为高浓度储存液，再通过稀释剂稀释成即用型工作浓度(1:10至1:100)。然而，传统的过氧化物酶偶联物的稀释剂易造成化学发光信号的本底值过高，信噪比偏低等问题。因此，在保持酶活性和蛋白稳定性的情况下，如何提高信噪比，进而提高检测灵敏度和准确性，是目前的难题。

技术实现思路

1、基于此，本申请提供了一种过氧化物酶偶联物的稀释剂，该稀释剂能够维持样本稳定性、提高信噪比。

2、此外，还提供了一种上述过氧化物酶偶联物的稀释剂的应用。

3、根据本申请的一个方面，提供了一种过氧化物酶偶联物的稀释剂，包括基础缓冲液、促凝剂、表面活性剂、碱金属氯化物和惰性蛋白；所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚-1、聚氧乙烯脂肪醇醚-4和聚氧乙烯脂肪醇醚-5中的一种或多种；所述促凝剂的浓度为0.02w/v％～0.1w/v％；所述表面活性剂的浓度为0.02w/v％～0.5w/v％；所述碱金属氯化物的浓度为0.5w/v％～1w/v％；所述惰性蛋白的浓度为0.1w/v％～0.5w/v％。

4、在其中一个实施例中，所述表面活性剂的浓度为0.03w/v％～0.08w/v％；和/或，

5、所述基础缓冲液的溶质的浓度为25mmol/l～50mmol/l。

6、在其中一个实施例中，所述稀释剂的ph值为6.0～7.0。

7、在其中一个实施例中，所述基础缓冲液选自如下缓冲液中的一种或多种：hepes缓冲液、mops缓冲液和pbs缓冲液。

8、在其中一个实施例中，所述促凝剂选自聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或多种。

9、在其中一个实施例中，所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚-1、聚氧乙烯脂肪醇醚-4和聚氧乙烯脂肪醇醚-5中的一种或多种。

10、在其中一个实施例中，所述碱金属氯化物选自氯化钠和氯化钙中的一种或多种。

11、在其中一个实施例中，所述惰性蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白和马血清白蛋白中的一种或多种。

12、在其中一个实施例中，所述稀释剂还包括防腐剂，所述防腐剂选自叠氮钠和proclin300中的一种或多种。

13、根据本申请的另一方面，提供了一种化学发光免疫分析方法，采用上述的过氧化物酶偶联物的稀释剂稀释过氧化物酶偶联物后进行化学发光免疫分析。

14、与现有技术相比，本申请具有如下有益效果：

15、本申请的过氧化物酶偶联物的稀释剂能够使稀释后的样品在保持酶活性和蛋白稳定性不变的情况下，降低化学发光免疫分析检测过程中的本底信号值、从而提高各检测指标的信噪比，并提高化学发光免疫分析技术的灵敏度和准确性。

技术特征：

1.一种过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，包括基础缓冲液、促凝剂、表面活性剂、碱金属氯化物和惰性蛋白；所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚-1、聚氧乙烯脂肪醇醚-4和聚氧乙烯脂肪醇醚-5中的一种或多种；所述促凝剂的浓度为0.02w/v％～0.1w/v％；所述表面活性剂的浓度为0.02w/v％～0.5w/v％；所述碱金属氯化物的浓度为0.5w/v％～1w/v％；所述惰性蛋白的浓度为0.1w/v％～0.5w/v％。

2.根据权利要求1所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述表面活性剂的浓度为0.03w/v％～0.08w/v％；和/或，

3.根据权利要求1所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述稀释剂的ph值为6.0～7.0。

4.根据权利要求1～3任一项所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述基础缓冲液选自如下缓冲液中的一种或多种：hepes缓冲液、mops缓冲液和pbs缓冲液。

5.根据权利要求1～3任一项所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述促凝剂选自聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或多种。

6.根据权利要求1～3任一项所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚-1、聚氧乙烯脂肪醇醚-4和聚氧乙烯脂肪醇醚-5中的一种或多种。

7.根据权利要求1～3任一项所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述碱金属氯化物选自氯化钠和氯化钙中的一种或多种。

8.根据权利要求1～3任一项所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述惰性蛋白选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白和马血清白蛋白中的一种或多种。

9.根据权利要求1～3任一项所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂，其特征在于，所述稀释剂还包括防腐剂，所述防腐剂选自叠氮钠和proclin 300中的一种或多种。

10.一种化学发光免疫分析方法，其特征在于，采用权利要求1～9任一项所述的过氧化物酶偶联物的稀释剂稀释过氧化物酶偶联物后进行化学发光免疫分析。

技术总结
本申请提供了一种过氧化物酶偶联物的稀释剂及其应用，稀释剂包括基础缓冲液、促凝剂、表面活性剂、碱金属氯化物和惰性蛋白；所述表面活性剂选自聚氧乙烯脂肪醇醚‑1、聚氧乙烯脂肪醇醚‑4和聚氧乙烯脂肪醇醚‑5中的一种或多种；所述促凝剂的浓度为0.02w/v％～0.1w/v％；所述表面活性剂的浓度为0.02w/v％～0.5w/v％；所述碱金属氯化物的浓度为0.5w/v％～1w/v％；所述惰性蛋白的浓度为0.1w/v％～0.5w/v％。本申请的稀释剂能够降低化学发光免疫分析的本底信号值、并提高各检测指标的信噪比，从而提高化学发光免疫分析技术的灵敏度和准确性。

技术研发人员：丁俊杰,孙正华,潘维华,吉琛,施启尧
受保护的技术使用者：江苏三联生物工程股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12