一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法与流程

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法。

背景技术：

1、葡萄糖酸钙（calcium gluconate）可用于预防和治疗钙缺乏症，如骨质疏松、手足抽搐症、骨发育不全、佝偻病以及儿童、妊娠和哺乳期妇女、绝经期妇女、老年人钙的补充。本品在用于治疗缺钙症时，可供口服和注射用，中国药典有明确规定注射品的澄清度，而草酸盐是影响此项指标的重要因素。为充分保障本品的安全性，美国药典（usp43）和葡萄糖酸钙公示稿均对可能污染本品的草酸盐进行了严格的控制（限度0.01%）。

2、因草酸盐极性较大，在一般色谱柱上无保留；紫外响应低，且本品限度控制严格，较难开发出常规的液相方法对其进行控制。美国药典和葡萄糖酸钙公示稿均采用阴离子交换色谱分离模式、电导检测器进行检测来提高草酸盐的响应。

3、鉴于电导检测器的特殊性，一般很少有该类型的检测器，常规检测需委外检测，会增加检测成本，浪费大量的时间。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供了一种成本低、重复性好、专属性好、准确度高、灵敏度好、工艺步骤简单的葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法。

2、为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

3、本发明公开了一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，采用高效液相色谱法，检测方法包括以下步骤：

4、（1）供试品溶液配制

5、取葡萄糖酸钙溶液，加水微温使溶解，用水稀释制成每1ml含2mg葡萄糖酸钙的溶液；

6、（2）对照品溶液配制

7、取草酸钠，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml含草酸钠1.5μg（相当于每1ml中含草酸根（c2o42-）1μg）的溶液；

8、（3）样品测定

9、量取上述溶液注入液相色谱仪，色谱条件：采用反相液相色谱柱，以含酸的水溶液为流动相a，甲醇为流动相b，设置流动相比例、检测波长、柱温、流速以及进样体积，记录色谱峰，按外标法以峰面积计算即得。

10、根据本发明的实施方式，上述检测方法步骤（3）中，采用常规c18（如kromasil100-5-c18，4.6*250mm，5μm）色谱柱，葡萄糖酸钙与草酸盐保留弱，且葡萄糖酸钙峰干扰草酸盐。发明人经过研究发现，因本发明是检测葡萄糖酸钙溶液中的有机酸，分子中由于酸性基团的存在使得有机酸分子的极性较大，给反相色谱的保留造成困难；检测有机酸往往流动相的水相比例较高，因此常规的反相c18色谱柱易发生相塌陷的现象，选择通过独特键合工艺改进的ultimate oaa柱或其性能相当的反相色谱柱，葡萄糖酸钙中草酸盐与相邻峰之间的分离度符合要求。本发明中的反相液相色谱柱优选ultimate oaa柱，规格4.6×300mm，5μm。

11、根据本发明的实施方式，上述检测方法步骤（3）中，发明人研究发现，当选择水作流动相a时，葡萄糖酸钙峰峰形异常且干扰草酸盐峰；当使用酸性水溶液作为流动相时，能有效抑制有机酸解离，进而在色谱柱上达到有效分离效果，有机相a选自含酸的水溶液，优选磷酸溶液，更优选地，选自0.08%~0.1%磷酸溶液，进一步优选地，选自0.1%磷酸溶液。

12、根据本发明的实施方式，有机相的比例对有机酸的分离影响较大，当有机相比例低（低于20%），有未知峰干扰草酸盐，分离度不满足要求。发明人经研究发现，当水相流动相a相与有机相b相体积比选自65~75:25~35时，葡萄糖酸钙中草酸盐与相邻峰之间的分离度符合要求，体积比优选70:30。

13、根据本发明的实施方式，检测波长对于本发明所公开的检测方法灵敏度及峰干扰影响较大，当波长选择短（小于200nm），葡萄糖酸钙峰干扰草酸盐，波长选择长（大于230nm），方法灵敏度下降。本发明公开的检测方法中检测波长选自218~222nm，优选220nm。

14、根据本发明的实施方式，当进样体积选自10μl，流速选自0.8~1.2ml/min，柱温选自25~35℃时，草酸盐与相邻峰之间分离度均符合规定，不同色谱条件测定的加标供试品草酸盐含量与标准条件极差为0.006%。优选地，流速选自1.0ml/min，柱温选自30℃。

15、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

16、本发明所公开的葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法成本低、工艺步骤简单、准确度高，专属性好、灵敏度高、重复性好、中间精密度好；草酸盐与相邻峰之间的分离度大于1.5；定量限、检测限符合验证要求；6份加标供试品草酸盐含量rsd小于15.0%；12份加标供试品草酸盐含量rsd小于15.0%。

技术特征：

1.一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱法，检测方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的反相液相色谱柱选自ultimate oaa柱，规格4.6×300mm，5μm。

3.根据权利要求1所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的含酸的水溶液选自磷酸溶液。

4.根据权利要求3所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的含酸的水溶液选自0.08%~0.1%磷酸溶液，优选0.1%磷酸溶液。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中流动相a与流动相b体积比选自65~75:25~35，优选70:30。

6.根据权利要求1-4任一项所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的检测波长选自218~222nm，优选220nm。

7.根据权利要求1-4任一项所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的流速选自0.8~1.2ml/min，优选1.0ml/min。

8.根据权利要求1-4任一项所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的柱温选自25~35℃，优选30℃。

9.根据权利要求1-4任一项所述的一种葡萄糖酸钙中草酸盐的检测方法，其特征在于：步骤（3）中所述的进样体积选自10μl。

技术总结
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种葡萄糖酸钙溶液中草酸盐的检测方法。采用高效液相色谱法，使用反相液相色谱柱，以含酸的水溶液为流动相A，甲醇为流动相B，设置流动相比例、检测波长、柱温、流速以及进样体积，按外标法以峰面积计算即得。本发明所公开的检测方法成本低、工艺步骤简单、准确度高，专属性好、灵敏度高、重复性好、中间精密度好；草酸盐与相邻峰之间的分离度大于1.5；定量限、检测限符合验证要求；6份加标供试品草酸盐含量RSD小于15.0%；12份加标供试品草酸盐含量RSD小于15.0%。

技术研发人员：余世兵,姜春雪,李龙霞,姚书扬,汤怀松
受保护的技术使用者：南京安杰新生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13