一种检测普瑞巴林（R）-异构体的RP-HPLC-RID方法与流程

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种检测普瑞巴林(r)-异构体的反相高效液相色谱差示折光法(rp-hplc-rid)。

背景技术：

1、普瑞巴林(pregabalin)是一种γ-氨基丁酸(gaba)受体拮抗剂，该药由辉瑞公司研发并于2003年8月提出注册申请，2008年12月正式获fda批准。普瑞巴林作为一种抗带状疱疹后神经痛、纤维肌痛药物，在国内外临床试验中效果显著，能有效减轻疼痛和改善睡眠质量。

2、普瑞巴林化学名为(s)-3-(氨甲基)-5-甲基己酸，分子式为c8h17no2。其(r)-异构体化学名为(r)-3-(氨甲基)-5-甲基己酸，分子式为c8h17no2，结构式见表1。由于其异构体表现出不同的药理活性和毒性，故普瑞巴林及其制剂在生产过程中(r)-异构体为质量控制中的重要指标，对其安全用药有着重要意义。

3、表1普瑞巴林及其(r)-异构体结构式

4、

5、由于普瑞巴林紫外吸收不强，现有技术中多采用衍生化处理：1.cn1786703a公开了一种普瑞巴林手性异构体的分离测定方法，选用nα-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-l-氨基酸类化合物中的一种作为衍生化试剂，于20～60℃反应20～120分钟，反应物需在五氧化二磷与氢氧化钾的干燥系统中干燥完全，并加二甲亚砜或n，n-二甲基甲酰胺溶解干燥物后滤过，采用高效液相色谱法或高效液相色谱法与质谱法联合分离测定，操作繁琐，易产生误差，且时间过长；2.cn102375037a公开了一种应用电泳中介微分析技术分离测定普瑞巴林手性异构体的方法，选用nα-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-l-丙胺酰胺作为衍生化试剂，应用电泳中介微分析技术，通过电压处理衍生化试剂溶液和含普瑞巴林的衍生化试剂溶液，使普瑞巴林与衍生化试剂因电泳淌度不同混合并发生反应，再采用非手性毛细管胶束电动色谱分离衍生物。该方法虽节约了反应时间，但操作也很繁琐，且电泳普及性不高，不利于推广；3.cn104777263a公开了一种普瑞巴林手性异构体的分离检测方法，使用芴甲氧羰酰氯作为柱前衍生试剂，手性色谱柱，正己烷与无水乙醇混合物为流动相，通过高效液相色谱法对普瑞巴林手性异构体进行分离测定，该方法虽缩短了反应时间，但是采用正相色谱，对仪器要求较高；4.usp(美国药典)和ep(欧洲药典)中普瑞巴林质量标准均采用marfey试剂进行衍生化处理，其中usp于55℃反应一小时，ep于40℃反应一小时，步骤繁琐且耗时过长。以上专利及各国药典中所用方法虽有所不同，但都需要利用衍生化试剂进行衍生，分析成本较高、样品处理复杂，且对仪器要求较高。

6、尽管后来也有文献(李晶等，反相高效液相色谱法-蒸发光散射检测器测定普瑞巴林原料药中普瑞巴林r-对映异构体的含量，理化检验-化学分册，2017，53(6)：659-663.)直接利用手性色谱柱串联蒸发光散射检测器，流动相为甲醇-乙腈-水-甲酸-二乙胺(450：450：100：2.0：2.5)，漂移管温度为70℃，载气流量为2.0l/min进行检测，此方法虽然避免了衍生处理，但对仪器设备的要求较高，且流动相可调范围狭窄。因此，为方便企业对产品质量的把控，发明一种方便可行，适用性广，满足日常检测普瑞巴林异构体的方法，是很有必要的。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明通过反复试验摸索后提供了一种高效分析普瑞巴林(r)-异构体的方法，该方法采用rp-hplc-rid，操作简单易行，适合推广使用，并能达到较高灵敏度，能更好地控制普瑞巴林的产品质量。

2、为实现上述目的，本发明使用以下技术方案：

3、一种检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法：将待测样品稀释后注入高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有示差折光检测器，所述示差折光检测器的设定温度为25-40℃，所述高效液相色谱仪的色谱柱为多糖衍生物涂敷型手性反相色谱柱，流动相为六氟磷酸钾溶液与乙腈，所述六氟磷酸钾溶液的ph为4.5-5.5，占流动相体积的70-80％，等度洗脱，流速为0.1-1ml/min。

4、优选地，所述多糖衍生物涂敷型手性反相色谱柱的填料是硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)。

5、进一步优选地，所述多糖衍生物涂敷型手性反相色谱柱的型号为chiralcel oj-rh，或者与其性能相似的型号。

6、优选地，所述示差折光检测器的设定温度为30℃。

7、优选地，所述六氟磷酸钾溶液的ph为5。

8、优选地，所述六氟磷酸钾溶液中含有三乙胺，配制方法是向100mm六氟磷酸钾溶液中加入0.1％三乙胺并用磷酸调节ph至5。

9、优选地，所述六氟磷酸钾溶液占流动相体积的75％。

10、优选地，所述流速为0.6ml/min。

11、本发明中所涉及到的百分比均为体积百分比。

12、本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

13、1.与使用衍生化试剂相比，本发明具有操作过程简单快捷，减少误差产生，不引入过多杂质等优点。

14、2.与正相系统相比，反相色谱系统具有色谱介质性能稳定，经济环保等优点。

15、3.本发明实现了对普瑞巴林(r)-异构体的有效分离和检测，所使用的反相液相色谱法-示差折光检测器测定方法分离能力强，操作过程简单，适用性广等优点，能够更方便快捷地控制产品质量，提高产品品质，确保临床用药的安全性及有效性。

16、4.本发明的定量限0.084μg/ml，检测限0.033μg/ml，灵敏度高，能够满足日常把控普瑞巴林(r)-异构体限度的检测需求。

技术特征：

1.一种检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法，其特征在于：将待测样品稀释后注入高效液相色谱仪进行检测，所述高效液相色谱仪含有示差折光检测器，所述示差折光检测器的设定温度为25-40℃，所述高效液相色谱仪的色谱柱为多糖衍生物涂敷型手性反相色谱柱，流动相为六氟磷酸钾溶液与乙腈，所述六氟磷酸钾溶液的ph为4.5-5.5，占流动相体积的70-80％，等度洗脱，流速为0.1-1ml/min。

2.如权利要求1所述检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法，其特征在于：所述多糖衍生物涂敷型手性反相色谱柱的填料是硅胶表面涂敷有纤维素-三(4-甲基苯甲酸酯)。

3.如权利要求2所述检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法，其特征在于：所述多糖衍生物涂敷型手性反相色谱柱的型号为chiralcel oj-rh，或者与其性能相似的型号。

4.如权利要求1所述检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法，其特征在于：所述示差折光检测器的设定温度为30℃。

5.如权利要求1所述检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法，其特征在于：所述六氟磷酸钾溶液的ph为5。

6.如权利要求5所述检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法，其特征在于：所述六氟磷酸钾溶液中含有三乙胺，配制方法是向100mm六氟磷酸钾溶液中加入0.1％三乙胺并用磷酸调节ph至5。

7.如权利要求5所述检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法，其特征在于：所述六氟磷酸钾溶液占流动相体积的75％。

8.如权利要求5所述检测普瑞巴林(r)-异构体的rp-hplc-rid方法，其特征在于：所述流速为0.6ml/min。

技术总结
本发明公开了一种检测普瑞巴林(R)‑异构体的RP‑HPLC‑RID方法，属药物分析领域，该方法使用多糖衍生物涂敷型手性反相色谱柱和示差折光检测器，可直接有效的分离普瑞巴林与(R)‑异构体，检测结果准确性好、灵敏度高，与现有的蒸发光散射检测器法和柱前衍生反相色谱法相比操作更简便，成本更低，更环保，本发明为普瑞巴林及其制剂的质量控制提供了较好的保障。

技术研发人员：金莹,杨凯歌,吴雪英,汪俊,黄志军,赵刚,向阳,任霞
受保护的技术使用者：健民药业集团股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12