一种肾上腺素中间体有关物质的HPLC检测方法与流程

本发明属于药物分析，具体涉及一种肾上腺素中间体有关物质的hplc检测方法。

背景技术：

1、肾上腺素作为α和β受体激动剂，主要收缩小动脉和毛细血管前括约肌，其次收缩静脉和大动脉。肾上腺素(epinephrine)是由人体分泌的一种激素，也是一种在中枢神经系统的一些神经元和肾上腺髓质的嗜铬细胞中产生的儿茶酚胺类神经递质。肾上腺素在体内具有许多功能，包括调节心率，呼吸频率和代谢转换。肾上腺素会使心脏收缩力上升，使心脏、肝、和筋骨的血管扩张和皮肤、粘膜的血管收缩，是拯救濒死的人或动物的必备品。肾上腺素于1895年被波兰生理学家napoleon cybulski分离出来并鉴定，1904年由friedrichstolz首次人工合成。肾上腺素注射液于1951年12月首次在加拿大获批上市。适应症为缓解因支气管痉挛引起的呼吸窘迫；迅速缓解药物和其他过敏原的过敏反应，并延长浸润麻醉药的作用；各种原因引起的心脏骤停，但不用于心力衰竭或出血性创伤或心源性休克。

2、药用肾上腺素人工合成方法则包括氯乙酰化法、环氧乙烷法、氢氰酸法等。拟以邻苯二酚为原料合成肾上腺素原料，首先经过氯乙酰化生成2-氯-3，4-二羟基苯乙酮，接下来经过胺亲核取代反应生成3,4-二羟苯基n-苄基-n-甲基胺甲酮、再经过钯碳催化氢化脱苄和还原羰基，酒石酸拆分及氨水游离酒石酸盐得到肾上腺素。其中2-氯-3，4-二羟基苯乙酮(中间体adr-3)和3,4-二羟苯基n-苄基-n-甲基胺甲酮(中间体adr-4)为关键中间体，且由于反应体系复杂、副产物较多，目前各国药典均未有收载对其中间体质量进行控制的检测方法，开发具有专属性强、分析时间短的检测方法，对关键中间体进行质量控制，以保证肾上腺素及其制剂产品的质量。

3、结合合成工艺，起始原料邻苯二酚(adr-1)、氯乙酰氯(adr-2)、n-甲基苄胺及成品的杂质，分析了潜在杂质，以下表-1是各个杂质名称和结构式。

4、表-1肾上腺素合成方法中可能潜在杂质

5、

6、申请人通过查阅大量中外专利与非专利文献，目前并无较好的高效液相色谱法来检测肾上腺素中间体有关物质的文献报道，不利于企业对产品质量的把控。

7、为了解决现有技术中存在问题，本申请发明人通过大量理论调研和试验探索，提供了一种分析肾上腺素中间体多种杂质的方法，从而更好地控制肾上腺素的产品质量。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本申请发明人通过大量理论调研和实验探索，提供了一种分离分析肾上腺素中间体有关物质(20种杂质)的液相方法，从而更好地控制肾上腺素产品质量。

2、为了实现本发明的目的，本发明提供的技术方案是：

3、一种肾上腺素中间体有关物质的hplc检测方法：采用十八烷基键合硅胶(反相)为填充剂的色谱柱，以50mmol/l高氯酸钠和5mmol/l磷酸二氢钾的混合液(50mmol/l和5mmol/l指高氯酸钠和磷酸二氢钾在混合液中的浓度)，ph＝3.0(用磷酸调节)为弱洗脱流动相，乙腈-甲醇(3:7，v/v)混合物为强洗脱流动相，以弱洗脱流动相:强洗脱流动相＝(95～20):(5～80)(v/v)进行梯度洗脱，对肾上腺素中间体20种杂质进行分离测定，所述hplc检测采用如下色谱条件：

4、流动相流速为0.8～1.2ml/min；

5、色谱柱柱温为30℃～50℃；

6、检测器采用紫外检测器，检测波长为205nm～240nm；

7、优选的，所述色谱柱为waters atlantis t3(4.6mm×150mm)，填充剂粒径为3μm；

8、优选的，所述色谱柱的柱温为35℃；

9、优选的，所述检测波长为230nm；

10、优选的，所述流动相流速为1.0ml/min；

11、优选的，进样量为10μl。

12、进一步的，所述检测方法包括如下步骤：

13、1.1用稀释剂配制待测品溶液，所述稀释剂为：乙腈:水＝20:80，v/v；

14、1.2将步骤1.1所得的待测品溶液注入到高效液相色谱仪的色谱柱中进行检测。

15、与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：

16、1、实现了对肾上腺素中间体20种杂质的有效分离和检测，因此本发明的检测方法能够更好地实现对肾上腺素中间体的质量控制，提高最终产品的品质，保证了其临床用药的安全有效。

17、2、本发明的检测方法将多个中间体检测融合进一个检测方法，操作简便，成本低，能够有效分离肾上腺素中间体20种杂质，所有杂质之间分离度均大于1.5，为产品研发和生产提供了简便、稳定、可靠的分析检测方法。

18、需要说明的是：本发明中“％”未作特别说明的话，均是指体积百分比。

技术特征：

1.一种肾上腺素中间体有关物质的hplc检测方法，其特征在于：采用十八烷基键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，以50mmol/l高氯酸钠和5mmol/l磷酸二氢钾的混合液、ph＝3.0为弱洗脱流动相，乙腈-甲醇体积比为3:7的混合物为强洗脱流动相，以弱洗脱流动相:强洗脱流动相＝(95～20):(5～80)，v/v，进行梯度洗脱，对肾上腺素中间体有关物质进行分离测定，所述hplc检测采用如下色谱条件：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为watersatlantis t3。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为：4.6mm×150mm，填充剂粒径为3μm。

4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为35℃。

5.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述检测波长为230nm。

6.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相流速为1.0ml/min。

7.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述进样量为10μl。

8.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：

技术总结
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种肾上腺素中间体有关物质的HPLC检测方法。该检测方法为：采用十八烷基键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，以50mmol/L高氯酸钠和5mmol/L磷酸二氢钾的混合液、pH＝3.0为弱洗脱流动相，乙腈‑甲醇＝3:7，V/V，混合物为强洗脱流动相，以弱洗脱流动相:强洗脱流动相＝(95～20):(5～80)(v/v)进行梯度洗脱，对肾上腺素中间体相关杂质进行分离测定，采用色谱条件为：流动相流速为0.8～1.2mL/min；色谱柱柱温为30℃～50℃；检测波长为205nm～240nm。该检测方法将多个中间体检测融合进一个检测方法，操作简便，成本低，能够有效分离肾上腺素中间体20种杂质，所有杂质之间分离度均大于1.5，为产品研发和生产提供了简便、稳定、可靠的分析检测方法。

技术研发人员：谭慧玲,何全斌
受保护的技术使用者：武汉嘉诺康医药技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/11