一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒的制作方法

本发明涉及生物医学，尤其涉及一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒。

背景技术：

1、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，以下简称gfap)是一种分子大小为55kda、存在于中枢神经系统星形胶质细胞(as)胞质内的特异性酸性蛋白，是as细胞骨架体系中三类中间丝的结构蛋白，其在as几乎唯一存在且有丰富的表达；而星形胶质细胞(as)在支持、引导、供养和传导神经元信号、结构和活动中发挥至关重要的作用，使得gfap成为一种理想的脊椎动物中广泛存在的星形细胞标志物。20世纪90年代末，有研究表明gfap可以作为一种生物标志物应用于化学诱导癌症和恶性胶质瘤的早期检测，进入21世纪后，新的研究表明，gfap水平的升高可见于外伤性脑损伤(tbi)且gfap水平的升高与脑损伤严重程度显示直接相关。目前，脑部ct是可广泛获得的唯一客观、简单、可靠的选择用以协助临床医生评估tbi。但ct扫描可能会增加辐射致癌的风险；同时，tbi按照严重程度分型从轻微至严重，且轻微tbi例数可占所有tbi例数的90％及以上。超90％的病人因轻微tbi被送至急救科，但ct结果为阴性，而这些病人中最多只有1％需要神经外科干预。因此，需要一种简单且客观的生物标志物以排除脑ct扫描的必要性。

2、目前用于gfap检测的主要方法是酶联免疫吸附分析法(elisa)。酶联免疫吸附测定检测技术是利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量反应待测样本中靶分子的含量。

3、但该方法自动化程度低且灵敏度，重复性均不够，操作上也不够方便，因此，已经不能满足大型医院快速定量检测的要求。

技术实现思路

1、有鉴于此，本申请提供一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，用于检测胶质纤维酸性蛋白，操作快速简单、灵敏度及重复性高。

2、为达到上述技术目的，本申请采用以下技术方案：

3、第一方面，本申请提供一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括偶联有gfap捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液，链霉亲和素标记的gfap检测抗体溶液，生物素标记的碱性磷酸酶溶液，重组gfap抗原系列校准品，化学发光液及清洗液。

4、优选的，偶联有gfap捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液的制备方法如下：将纯化后的gfap捕获抗体与甲苯磺酰基磁珠混合后，加入硫酸铵溶液孵育，而后加入封闭剂封闭，封闭结束后清洗定容，即得偶联有gfap捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液。

5、优选的，甲苯磺酰基磁珠的粒径为1.0-4.0μm。

6、优选的，每1mg甲苯磺酰基磁珠上gfap捕获抗体的用量为10-40μg。

7、优选的，链霉亲和素标记的gfap检测抗体的制备方法如下：将n-琥珀酰亚胺-4-(n-马来酰亚胺甲基)-环乙烷-1-羧酸盐活化的gfap检测抗体与traunt’s试剂活化的链霉亲和素混合搅拌孵育，而后进行柱纯化。

8、优选的，n-琥珀酰亚胺-4-(n-马来酰亚胺甲基)-环乙烷-1-羧酸盐活化的gfap捕获抗体与traunt’s试剂活化的链霉亲和素的投料比为1:1.5-2。

9、优选的，化学发光液为2-氨基-2-甲基-1-丙醇的amppd底物液。

10、优选的，gfap检测抗体与gfap捕获抗体为不同的鼠源单克隆抗体。

11、优选的，偶联有gfap捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液的浓度为0.2-0.4mg/ml。

12、优选的，链霉亲和素标记的gfap检测抗体溶液的浓度为0.1-4.0ug/ml。

13、优选的，生物素标记的碱性磷酸酶的制备方法如下：将碱性磷酸酶进行柱纯化，将纯化后的碱性磷酸酶与生物素-nhs进行混合孵育，孵育结束后再次进行柱纯化。

14、优先的，碱性磷酸酶与生物素的投料比为1：10-20。

15、优选的，生物素标记的碱性磷酸酶溶液的浓度为0.5-2.0μg/ml。

16、本申请的有益效果如下：本方案将双抗夹心法与磁微粒化学发光技术相结合，制备试剂盒测定gfap的含量，具有灵敏度高、准确度好、稳定性佳且可实现自动化操作简单便捷；检测快速，试剂量程宽，线性范围广。

技术特征：

1.一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，包括偶联有gfap捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液，链霉亲和素标记的gfap检测抗体溶液，生物素标记的碱性磷酸酶溶液，重组gfap抗原系列校准品，化学发光液及清洗液。

2.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述偶联有gfap捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液的制备方法如下：将纯化后的gfap捕获抗体与甲苯磺酰基磁珠混合后，加入硫酸铵溶液孵育，而后加入封闭剂封闭，封闭结束后清洗定容，即得所述偶联有gfap捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液。

3.根据权利要求2所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述甲苯磺酰基磁珠的粒径为1.0-4.0μm。

4.根据权利要求2所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，每1mg甲苯磺酰基磁珠上gfap捕获抗体的用量为10-40μg。

5.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素标记的gfap检测抗体的制备方法如下：将n-琥珀酰亚胺-4-(n-马来酰亚胺甲基)-环乙烷-1-羧酸盐活化的gfap捕获抗体与traunt’s试剂活化的链霉亲和素混合搅拌，而后进行柱纯化。

6.根据权利要求5所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述n-琥珀酰亚胺-4-(n-马来酰亚胺甲基)-环乙烷-1-羧酸盐活化的gfap捕获抗体与traunt’s试剂活化的链霉亲和素的投料比为1:1.5-2。

7.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光液为2-氨基-2-甲基-1-丙醇的amppd底物液。

8.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述gfap检测抗体与gfap捕获抗体为不同的鼠源单克隆抗体。

9.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述偶联有gfap捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液的浓度为0.2-0.4mg/ml。

10.根据权利要求1所述的胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素标记的gfap检测抗体溶液的浓度为0.1-4.0μg/ml。

技术总结
本发明公开一种胶质纤维酸性蛋白磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括偶联有GFAP捕获抗体的甲苯磺酰基磁微粒悬浮液，链霉亲和素标记的GFAP检测抗体溶液，生物素标记的碱性磷酸酶溶液，重组GFAP抗原系列校准品，化学发光液及清洗液，用于检测胶质纤维酸性蛋白，操作快速简单、灵敏度及重复性高。

技术研发人员：晏盼盼,席再军,王颖,林苗,张维
受保护的技术使用者：武汉明德生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12