一种抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法与流程

本发明涉及领域，尤其涉及一种抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法。

背景技术：

1、慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,copd)是一类常见和多发的进行性呼吸系统疾病，包括慢性支气管炎、哮喘、支气管扩张、囊性纤维化等，其患病率和致死率均居高不下，是全球第三大死因(《全球卫生评估》，who，2020)。

2、copd的药物治疗包括使用糖皮质激素和抗白三烯类等抗炎类药物以及使用抗胆碱能药物和肾上腺β2受体激动剂等扩张支气管药物为主，必要时需采用药物双联或三联疗法治疗(global initiative for chronic obstructive lung disease,gold2022report)。

3、目前，用于copd治疗的抗胆碱能药物包括异丙托溴铵(boehringer ingelheim，1986by fda)、噻托溴铵(boehringer ingelheim，2004by fda)、氧托溴铵(boehringeringelheim)、格隆溴铵(novartis，2012by ema)、阿地溴铵(almirall prodesfarma&forestlaboratories inc，2012by fda)等，其中异丙托溴铵和氧托溴铵属于短效胆碱能受体抑制剂(short-acting muscarinic antagonists，samas)，噻托溴铵、格隆溴铵、阿地溴铵属于长效胆碱能受体抑制剂(long-acting muscarinic antagonists,lamas)。

4、而噻格溴铵是一种近年来新发现的高选择性的m3型胆碱能受体抑制剂。噻格溴铵，白色晶体或粉末，化学名：3r-1,1-二甲基-3-(2-羟基-2,2-二噻吩-2-基乙酰氧基)吡咯烷溴化物，分子式：c16h20brno3s2，结构式如式ⅰ所示。

5、

6、因噻格溴铵是新近被发现的药物，按化学药品新注册分类属于1类创新药，目前尚无公开的有关物质检测方法，而与其结构相似的噻托溴铵、格隆溴铵的公开的有关物质检测方法也不适用于噻格溴铵的有关物质检测，故有必要提供一种用高效液相色谱法测定噻格溴铵有关物质的方法解决上述技术问题。

7、噻格溴铵是一种新近被发现的高选择性的m3型胆碱能受体抑制剂，目前尚无公开的有关物质检测方法。各国药典收载了与其结构相似的噻托溴铵、格隆溴铵的有关物质检测方法，其中中国药典收载的格隆溴铵有关物质检测方法采用了薄层色谱法，相对于高效液相色谱法，薄层色谱法专属性较差，杂质检测灵敏度低，单个杂质无法准确定量；

8、欧洲、美国药典收载的噻托溴铵、格隆溴铵的有关物质检测方法采用了高效液相色谱法，检测方法具体如下：

9、

10、欧洲、美国药典收载的噻托溴铵、格隆溴铵的有关物质检测方法用于检测噻格溴铵有关物质的典型色谱图如下图1-3所示。

11、由上述色谱图可知，欧洲、美国药典收载的噻托溴铵、格隆溴铵的有关物质检测方法用于检测噻格溴铵时，杂质x与噻格溴铵的分离度差，而杂质x是噻格溴铵的主要工艺杂质，需要准确被定量，且这几个方法的流动相组成、梯度洗脱程序复杂，操作繁琐，故本发明通过探索噻格溴铵有关物质液相色谱分析的各种条件，提供一种快速、简便、可靠、有效的噻格溴铵有关物质液相色谱分析方法，本发明中的方法充分兼顾噻格溴铵中工艺杂质、降解杂质分离的需要，最终建立了液相色谱法的等度洗脱方法，能将多个工艺杂质、降解杂质与主峰分离，准确定量杂质大小，操作简单，时间较短。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，本发明提出了一种抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，针对现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种用高效液相色谱法测定噻格溴铵有关物质的方法。

2、为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，包括如下步骤：

3、s1、配制样品溶液、系统适用性溶液以及对照溶液；

4、s2、采用等度洗脱以高效液相色谱法进行分析；

5、所述样品溶液以噻格溴铵样品与溶剂配制而成，于所述样品溶液之中包含0.1-5mg/ml噻格溴铵；

6、所述系统适用性溶液为将噻格溴铵、杂质a、杂质e、杂质j以及杂质x与溶剂配制而成，于每1ml所述系统适用性溶液之中，含杂质a、杂质e、杂质j、杂质x各0.1-5μg和噻格溴铵0.1-5mg；

7、其中杂质a为2，2-二噻吩基乙醇酸甲酯，其结构式如下所示：

8、

9、其中杂质e为(r)-1-甲基吡咯烷-3-基-2-羟基-2,2-二(噻吩-2-基)乙酸酯，其结构式如下所示：

10、

11、其中杂质j为2-羟基-2，2-二(噻吩-2-基)乙酸，其结构式如下所示：

12、

13、其中杂质x为(3r)-3-[2-羟基-2-(噻吩-2-基)-2-(噻吩-3-基)乙酰氧基]-1，1-二甲基吡咯烷-1-溴化物，其结构式如下所示：

14、

15、所述对照溶液为以溶剂稀释的供试品溶液，于每1ml所述对照溶液之中含0.1-20μg供试品。

16、进一步地，于所述等度洗脱过程之中，流动相a与流动相b的比例为45:55-55:45。

17、进一步地，所述流动相a为以0.01-0.2mol/l庚烷磺酸钠或乙烷磺酸钠溶液；流动相b为甲醇或乙腈。

18、进一步地，于所述庚烷磺酸钠或乙烷磺酸钠溶液之中，含0.01-1％三乙胺或二乙胺或氨水，所述乙烷磺酸钠溶液以磷酸或甲酸或乙酸调节ph值至3.0-4.0。

19、进一步地，所述流动相a为0.02mol/l庚烷磺酸钠溶液，流动相b为甲醇，流动相a与流动相b的比例为51:49；于所述流动相a之中含0.5％三乙胺，流动相a以磷酸调节ph值至3.5。

20、进一步地，于s2中，色谱柱选用以十八烷基键合硅胶或苯基-己基键合硅胶为填料的色谱柱。

21、进一步地，于s2的高效液相色谱法过程中，色谱柱柱温为20-50℃，检测波长为210-280nm，进样体积为5-50μl，流速为0.6-1.5ml/min。

22、进一步地，于s2中，所用溶剂为流动相a与流动相b的组合物。

23、与现有技术相比，本发明的有益效果包括：相对于欧洲、美国药典收载的噻托溴铵、格隆溴铵的有关物质检测方法，更快速、简便，能将多个工艺杂质、降解杂质与主峰分离，杂质峰型较好，能准确定量杂质大小。

技术特征：

1.一种抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，其特征在于，于所述等度洗脱过程之中，流动相a与流动相b的比例为45:55-55:45。

3.根据权利要求2所述的抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相a为以0.01-0.2mol/l庚烷磺酸钠或乙烷磺酸钠溶液；流动相b为甲醇或乙腈。

4.根据权利要求3所述的抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，其特征在于，于所述庚烷磺酸钠或乙烷磺酸钠溶液之中，含0.01-1％三乙胺或二乙胺或氨水，所述乙烷磺酸钠溶液以磷酸或甲酸或乙酸调节ph值至3.0-4.0。

5.根据权利要求1所述的抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，其特征在于，所述流动相a为0.02mol/l庚烷磺酸钠溶液，流动相b为甲醇，流动相a与流动相b的比例为51:49；于所述流动相a之中含0.5％三乙胺，流动相a以磷酸调节ph值至3.5。

6.根据权利要求1所述的抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，其特征在于，于s2中，色谱柱选用以十八烷基键合硅胶或苯基-己基键合硅胶为填料的色谱柱。

7.根据权利要求1所述的抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，其特征在于，于s2的高效液相色谱法过程中，色谱柱柱温为20-50℃，检测波长为210-280nm，进样体积为5-50μl，流速为0.6-1.5ml/min。

8.根据权利要求3所述的抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，其特征在于，于s2中，所用溶剂为流动相a与流动相b的组合物。

技术总结
本发明提出了一种抗胆碱能药物噻格溴铵中有关物质的检测方法，包括如下步骤：S1、配制样品溶液、系统适用性溶液以及对照溶液；S2、采用等度洗脱以高效液相色谱法进行分析；所述样品溶液以噻格溴铵样品与溶剂配制而成；所述系统适用性溶液为将噻格溴铵、杂质A、杂质E、杂质J以及杂质X与溶剂配制而成；所述对照溶液为以溶剂稀释的供试品溶液。本发明相对于欧洲、美国药典收载的噻托溴铵、格隆溴铵的有关物质检测方法，更快速、简便，能将多个工艺杂质、降解杂质与主峰分离，杂质峰型较好，能准确定量杂质大小。

技术研发人员：张星海,牛犇,杭夏清,郭励梁
受保护的技术使用者：南京联智医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15