一种尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法与流程

本发明属于医药，具体涉及一种尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法。

背景技术：

1、据统计，目前全球约有11亿吸烟者，吸烟是多种疾病的高危因素，烟草中的有害成分主要是烟焦油、一氧化碳以及一些多环芳烃。尼古丁是一种存在于茄科植物(茄属)中的生物碱，也是烟草的重要成分，临床常被制成贴片剂、舌下片、口嚼片等以替代疗法进行戒烟。

2、尼古丁，俗名烟碱，化学名为(s)-3-(1-甲基吡咯烷-2-基)吡啶，分子式为c10h14n2，分子量为162.23，结构式如下：

3、

4、尼古丁有一个手性中心，存在一个对映异构体，目前临床上使用的尼古丁是s构型，r构型无明显活性。根据目前两种不同的工艺路线，从天然烟草提取的尼古丁中也存在一定量的异构体，通过消旋体拆分得到的尼古丁约含50％的异构体，两种工艺均涉及到尼古丁及其异构体的分离检测的难题。通过文献查询和资料调研，目前尚未得到较好的分离方法。为确保尼古丁的质量控制，有必要提供一种分析方法用于尼古丁及其异构体的分离检测。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中的不足，提供一种尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，能够很好的分离尼古丁及其异构体，分离度好，操作简单，出峰时间快，检测时间短，方法重现性和稳定性佳。

2、为解决以上技术问题，本发明采取的技术方案是：

3、一种尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，包括以下步骤：

4、(1)制备包含异构体杂质的尼古丁供试液；

5、(2)采用以纤维素-3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯为填料的硅胶柱，以正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺或三乙胺为流动相，对尼古丁供试液进行等度洗脱；

6、(3)洗脱结束后使用紫外检测器检测，得到待测样品的信号强度，按照峰面积归一化法计算供试液中异构体杂质的含量。

7、优选地，步骤(1)具体操作为：称取尼古丁和异构体杂质，用正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺溶解并稀释，得到浓度为1～3mg/ml的供试液；

8、优选地，正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺的体积比为99∶0.5∶0.5∶0.1。

9、优选地，步骤(1)具体操作为：称取尼古丁和异构体杂质，用正己烷-甲醇-乙醇-三乙胺溶解并稀释，得到浓度为1～3mg/ml的供试液；

10、优选地，正己烷-甲醇-乙醇-三乙胺的体积比为99∶0.5∶0.5∶0.1。

11、优选地，步骤(2)中流动相采用体积比为99∶0.5∶0.5∶0.1的正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺或体积比为99∶0.5∶0.5∶0.1的正己烷-甲醇-乙醇-三乙胺。

12、优选地，步骤(2)中色谱柱的规格为：内径3.0～4.6mm，长度150～250mm，填料粒径3～5μm；

13、优选地，色谱柱的规格为：内径4.6mm，长度250mm，填料粒径3μm。

14、优选地，步骤(2)中的柱温为20℃～40℃；优选为25℃。

15、优选地，步骤(2)中流动相流速为0.5～1.3ml/min；优选为0.8ml/min。

16、优选地，步骤(2)中的进样量为5～20μl；优选为5μl。

17、优选地，步骤(2)中等度洗脱时间为15～30min；优选为25min。

18、优选地，步骤(3)中的检测波长为240～270nm；优选为254nm。

19、由于以上技术方案的采用，本发明与现有技术相比具有如下优点：

20、本发明的技术方案能有效分离尼古丁及其异构体杂质，分离度好，操作简单，出峰时间快，检测时间短，方法重现性和稳定性佳。

技术特征：

1.一种尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(1)具体操作为：称取尼古丁和异构体杂质，用正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺溶解并稀释，得到浓度为1～3mg/ml的供试液；

3.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(1)具体操作为：称取尼古丁和异构体杂质，用正己烷-甲醇-乙醇-三乙胺溶解并稀释，得到浓度为1～3mg/ml的供试液；

4.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中流动相采用体积比为99∶0.5∶0.5∶0.1的正己烷-甲醇-乙醇-二乙胺或体积比为99∶0.5∶0.5∶0.1的正己烷-甲醇-乙醇-三乙胺。

5.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中色谱柱的规格为：内径3.0～4.6mm，长度150～250mm，填料粒径3～5μm；

6.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中的柱温为20℃～40℃；优选为25℃。

7.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中流动相流速为0.5～1.3ml/min；优选为0.8ml/min。

8.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中的进样量为5～20μl；优选为5μl。

9.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中等度洗脱时间为15～30min；优选为25min。

10.根据权利要求1所述的尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中的检测波长为240～270nm；优选为254nm。

技术总结
本发明涉及一种尼古丁及其对映异构体的液相色谱分离检测方法，包括以下步骤：(1)制备包含异构体杂质的尼古丁供试液；(2)采用以纤维素‑3,5‑二甲基苯基氨基甲酸酯为填料的硅胶柱，以正己烷‑甲醇‑乙醇‑二乙胺或三乙胺为流动相，对尼古丁供试液进行等度洗脱；(3)洗脱结束后使用紫外检测器检测，得到待测样品的信号强度，按照峰面积归一化法计算供试液中异构体杂质的含量。本发明检测方法能够很好的分离尼古丁及其异构体，分离度好，操作简单，出峰时间快，检测时间短，方法重现性和稳定性佳。

技术研发人员：柳臻,刘平,程皓
受保护的技术使用者：苏州博研医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/8