用于光激化学发光检测的肌钙蛋白I检测试剂盒的制作方法

本发明涉及光激化学发光，特别涉及一种用于光激化学发光检测的肌钙蛋白i检测试剂盒。

背景技术：

1、心肌肌钙蛋白i(ctni)是心肌纤维上特有的收缩蛋白，它是肌钙蛋白三个亚单位之一(i，t，c)，它和原肌球蛋白一起通过肌原纤维的肌丝与肌动蛋白结合。心肌肌钙蛋白i有两种形式，一种为游离的肌钙蛋白i，一种为与肌钙蛋白c、t或同时与c、t结合而成的二联或三联复合物。心肌肌钙蛋白i已确定是预测急性冠脉综合征(acs)后果的最佳独立标志物之一。欧洲心脏病学会和美国心脏病学会于2000年联合提出重新定义ami，肌钙蛋白i变化成为诊断ami的一个重要条件，这一标准随即得到广大心脏病学学者的认同。全球心脏病学专家在2007年第2版和2012年第3版心肌梗死通用定义中推荐将hs-ctni作为首选心脏标志物，临床上主要用于心肌梗死的辅助诊断。

2、光激化学发光的基础原理是一种均相免疫反应。它是基于微球表面包被的抗原或抗体，在液相中形成免疫复合物而将感光微球和发光微球拉近。在光的激发下，两种微球发生之间的单线态氧的转移，进而发光微球产生高能级的红光，再通过单光子计数器和数学拟合将光子数换算为样本中的靶分子浓度。而当样本不含靶分子时，两种微球间无法形成免疫复合物，两种微球的间距超出单线态氧传播范围,单线态氧在液相中迅速淬灭，检测时则无高能级红光产生。

3、其中，感光试剂是商品试剂盒中不可或缺的重要组成成分之一，它的作用在于其试剂中的感光微球受外在激发光的激发后能够产生单线态氧，单线态氧把能量传递至距离感光微球200nm范围内的发光微球，最终才能产生化学发光信号，从而实现对样本中的未知物的检测。感光微球中填充的光敏剂浓度的选择、感光微球在液相中产生单线态氧的效率及时间、感光试剂的生产成本等，均影响光激化学发光检测试剂盒产品最终的临床应用及化学发光检测结果。目前，现有技术中缺乏高性能、符合临床检验需求的感光试剂。

4、因此，提供肌钙蛋白i检测试剂盒及其使用方法具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，为解决或部分解决相关技术中存在的问题，本申请提供一种用于光激化学发光检测的肌钙蛋白i检测试剂盒，能够使临床应用中的测试结果具有一致性和可重复性，且确保测试结果具有较高准确度和精密性。

2、本发明提供了一种用于光激化学发光检测的肌钙蛋白i检测试剂盒，其包括发光微球和感光微球，所述发光微球包括第一载体和通过所述第一载体承载的发光物质，且发光微球的表面连接有肌钙蛋白抗体，所述肌钙蛋白抗体能够与肌钙蛋白i特异性结合；

3、感光微球包括第二载体和通过所述第二载体承载的感光物质，所述感光微球的感光量ps在1.34到16.28之间；所述感光量ps＝odλ1/c2*103，其中：所述odλ1是在300nm～800nm范围的可见光区对浓度为c2的所述感光微球进行全波长扫描后所得的波长-吸光度曲线的最大吸收峰所对应的吸光度值，所述λ1是所述最大吸收峰对应的波长；所述c2是感光微球在进行光激化学发光检测时的浓度，c2的单位为ug/ml。

4、在一实施方式中，所述感光微球的浓度

5、其中，k是载体浓度-吸光度曲线的线性关系中对应的斜率，b是所述载体浓度-吸光度曲线的线性关系中对应的截距；odλ2是感光微球在波长λ2下对应的吸光度值；所述载体浓度-吸光度曲线为采用不同浓度的多个载体在波长λ2下获得的曲线；所述波长λ2为具有相同浓度的所述感光微球与所述载体在所述波长-吸光度曲线中具有相同或相近的吸光度值对应的波长。

6、在一实施方式中，所述c2选自10ug/ml～200ug/ml。

7、在一实施方式中，所述载体浓度-吸光度曲线的线性关系为y＝kx+b，其中：

8、x为预设粒径的载体的不同浓度，y为载体在对应的所述浓度下的吸光度值，k为斜率，b为截距；其中，所述第二载体的浓度选自10ug/ml～100ug/ml。

9、在一实施方式中，所述波长λ2选自od感光微球/od第二载体的比值在0.85至1.15以内的任一波长值，且波长λ2不等于波长λ1；

10、其中，od感光微球和od第二载体分别是利用相同浓度的所述感光微球和所述载体各自在300nm～800nm范围内同一波长值所对应的吸光度值。

11、在一实施方式中，所述波长λ1为600nm～700nm，所述波长λ2为440nm～580nm。

12、在一实施方式中，所述感光微球按照所述第二载体与所述感光物质的质量比为10:(0.04～4)制得。

13、在一实施方式中，所述第二载体的粒径选自190nm～280nm。

14、在一实施方式中，所述感光微球保存于缓冲溶液中，每升体积的所述缓冲溶液中的糖含量为1g±0.2g。

15、在一实施方式中，所述缓冲溶液的ph值为6～10。

16、本发明的有益效果包括但不限于：

17、本申请的技术方案，在确定吸光度值odλ1和浓度c2的数值后，根据吸光度值odλ1和浓度c2的比值，即可确定而限定感光试剂的感光量ps。当感光微球的感光量ps的数值在1.34到16.28之间时，将发光试剂加入感光试剂中与感光微球进行反应，则可以确保单线态氧的传播效率和时间较为稳定，继而确保发光微球的化学发光信号的强度满足在光激化学发光检测中的需求，减少化学发光信号受到其他干扰因素的影响所导致的检测结果的波动，使得检测结果在临床应用中具有一致性和可重复性，且使检测结果具有更明确的区分度和较高的精密性。另外，通过将感光试剂的感光量进行明确数值范围的限定，可以在最大化节约材料成本的同时，还可以保证光激化学发光检测结果的可靠性。

18、基于感光量ps为1.34<ps<16.28的肌钙蛋白i检测试剂盒以检测肌钙蛋白i抗体，该方法的优点灵敏度高，精密性好。

技术特征：

1.一种用于光激化学发光检测的肌钙蛋白i检测试剂盒，其特征在于，包括发光微球和感光微球，所述发光微球包括第一载体和通过所述第一载体承载的发光物质，且发光微球的表面连接有肌钙蛋白抗体，所述肌钙蛋白抗体能够与肌钙蛋白i特异性结合；

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述感光微球的浓度

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述c2选自10ug/ml～200ug/ml。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述感光微球按照所述第二载体与所述感光物质的质量比为10:(0.04～4)制得。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：

9.根据权利要求1至8中任一所述的试剂盒，其特征在于：

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：

技术总结
本申请涉及一种用于光激化学发光检测的肌钙蛋白I检测试剂盒，包括发光微球和感光微球，发光微球包括第一载体和通过第一载体承载的发光物质，且发光微球的表面连接有肌钙蛋白抗体，肌钙蛋白抗体能够与肌钙蛋白I特异性结合；感光微球包括第二载体和通过第二载体承载的感光物质，感光微球的感光量Ps在1.34到16.28之间；感光量Ps＝OD<subgt;λ1</subgt;/C<subgt;2</subgt;*103，其中：OD<subgt;λ1</subgt;是在300nm～800nm范围的可见光区对浓度为C<subgt;2</subgt;的感光微球进行全波长扫描后所得的波长‑吸光度曲线的最大吸收峰所对应的吸光度值。本申请的方案，基于感光量Ps为1.34<PS<16.28的肌钙蛋白I检测试剂盒以检测肌钙蛋白I抗体，能够使临床应用中的测试结果具有一致性和可重复性，且测试结果具有较高准确度和精密性。

技术研发人员：杨阳,李建武,康蔡俊,洪琳,黄正铭,李临
受保护的技术使用者：科美博阳诊断技术（上海）有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15