一种动物源食品中睾酮含量的检测方法与流程

本发明涉及食品检测，具体涉及一种动物源食品中睾酮含量的检测方法。

背景技术：

1、近年来，随着人们生活水平的提高，膳食中的肉类食品的占比也越来越高。然而动物源食品中激素残留超标时有发生。激素类或促进激素分泌药物的使用，能够提高畜禽的饲料转化率，达到快速增重的目的，但畜禽肉中大量激素的残留，将危害人体的健康及未成年人的发育。

2、睾酮c19h28o2又称17β-羟基雄甾-4-烯-3-酮丙酸酯、睾丸酮、睾甾，由睾丸或卵巢分泌，肾上腺亦分泌少量睾酮，是生物体中一种主要的类固醇性激素，调节机体的发育、性成熟及新陈代谢。为保障食品安全，有必要对肉类食品中睾酮的残留量进行定量监测。

3、常用睾酮检测方法有免疫法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法、毛细管电泳法、光谱分析法等。其中免疫学方法，在低浓度情况下，存在多种激素交叉反应，灵敏度和特异性相对较低，易造成结果的假阳性。液相色谱串联质谱(lc-ms/ms)，检测的灵敏度高、特异性强，在小分子的生物标志物分析中具有明显的优势。在串联质谱(ms/ms或ms2)中，通常采用二级质谱中的多反应监测(mrm)，但是，目前mrm监测仍然无法消除消除样品的基质干扰，包括电解质、盐类、糖类、脂类等物质产生干扰离子的干扰，从而无法实现鸡肉中睾酮含量的准确测定。

技术实现思路

1、鉴于此，本发明的目的在于提供一种动物源食品中睾酮含量的检测方法。本发明所述的检测方法能够实现动物源食品中睾酮含量的准确测定。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供了一种动物源食品中睾酮含量的检测方法，包括以下步骤：

3、将待测样品和睾酮内标物混合后，进行提取，所得提取液进行净化，得到待测液；所述提取的提取剂为乙腈水溶液；

4、将待测液进行液相色谱串联质谱检测，得到睾酮的峰面积；根据睾酮的峰面积和预定的标准曲线，得到睾酮的含量；所述预定的标准曲线为睾酮内标物与睾酮峰面的比值和睾酮内标物与睾酮质量浓度比值的线性曲线；

5、液相色谱的检测条件包括：流动相a为乙酸铵水溶液；流动相b为乙腈；色谱柱为c18柱；所述流动相体系的流速为0.4μl/min；洗脱方式为梯度洗脱；

6、所述梯度洗脱的程序为：

7、0～1min：所述流动相b的体积百分含量为20％；

8、1～8min：所述流动相b的体积百分含量由20％匀速增加到55％；

9、8～12min：所述流动相b的体积百分含量由55％匀速增加到99％；

10、12～13min：所述流动相b的体积百分含量为99％；

11、13～13.1min：所述流动相b的体积百分含量由99％匀速减到20％；

12、13.1～15min：所述流动相b的体积百分含量为20％；

13、质谱检测的条件包括：离子源为电喷雾离子源；扫描方式为正离子模式；监测模式为三级质谱多反应监测模式；离子源温度为550℃。

14、优选地，所述乙腈水溶液中乙腈的质量浓度为95％。

15、优选地，所述乙酸铵水溶液的浓度为6mmol/l。

16、所述提取为依次进行的超声提取和震荡提取。

17、优选地，所述液相色谱检测的柱温为40℃，进样量为2μl。

18、优选地，所述质谱检测的喷雾气压力为50psi；辅助加热气压力为60psi，气帘气压力为30psi。

19、优选地，所述净化为吸附剂吸附净化，所述吸附剂为尿素和c18填料。

20、优选地，所述尿素和c18填料的质量比为1:1。

21、本发明提供了一种动物源食品中睾酮含量的检测方法，包括以下步骤：将待测样品和睾酮内标物混合后，进行提取，所得提取液进行净化，得到待测液；所述提取的提取剂为乙腈水溶液；将待测液进行液相色谱串联质谱检测，得到睾酮的峰面积；根据睾酮的峰面积和预定的标准曲线，得到睾酮的含量；所述预定的标准曲线为睾酮内标物与睾酮峰面的比值和睾酮内标物与睾酮质量浓度比值的线性曲线；液相色谱检测的条件包括：流动相a为乙酸铵水溶液；流动相b为乙腈；色谱柱为c18柱；所述流动相体系的流速为0.4μl/min；洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序为：0～1min：所述流动相b的体积百分含量为20％；1～8min：所述流动相b的体积百分含量由20％匀速增加到55％；8～12min：所述流动相b的体积百分含量由55％匀速增加到99％；12～13min：所述流动相b的体积百分含量为99％；13～13.1min：所述流动相b的体积百分含量由99％匀速减到20％；13.1～15min：所述流动相b的体积百分含量为20％；质谱检测的条件包括：离子源为电喷雾离子源；扫描方式为正离子模式；监测模式为三级质谱多反应监测模式；离子源温度为550℃。本发明首先通过限定提取和净化的条件，从非仪器分析层面，尽量使得目标化合物，从样品基质中分离提取出来，然后以液相色谱串联质谱对动物源食品中的睾酮含量进行检测，采用三级质谱多反应监测模式，即，母离子-子离子-孙离子的模式对待测液进行检测，与二级质谱相比，具有更高的选择性，能排除大部分的杂质离子，减少干扰。而且，三级质谱可以检测更多的离子片段，这些离子片段可以用来确定目标分子的结构和化学性质，从而进一步提高检测准确度。

技术特征：

1.一种动物源食品中睾酮含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述乙腈水溶液中乙腈的质量浓度为95％。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述乙酸铵水溶液的浓度为6mmol/l。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述提取为依次进行的超声提取和震荡提取。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱检测的柱温为40℃，进样量为2μl。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述质谱检测的喷雾气压力为50psi；辅助加热气压力为60psi，气帘气压力为30psi。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述净化为吸附剂吸附净化，所述吸附剂为尿素和c18填料。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述尿素和c18填料的质量比为1:1。

技术总结
本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种动物源食品中睾酮含量的检测方法。本发明将待测样品和睾酮内标物混合后，进行提取，所得提取液进行净化，得到待测液；所述提取的提取剂为乙腈水溶液；将待测液进行液相色谱串联质谱检测，得到睾酮的峰面积；根据睾酮的峰面积和预定的标准曲线，得到睾酮的含量；所述预定的标准曲线为睾酮内标物与睾酮峰面的比值和睾酮内标物与睾酮质量浓度比值的线性曲线。同时限定了液相色谱串联质谱检测的条件，本发明所述的检测方法能够实现动物源食品中睾酮含量的准确测定。

技术研发人员：潘晓东
受保护的技术使用者：浙江省疾病预防控制中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13