一种同时测定18种非法添加抗病毒药物的方法与流程

本发明属于分析检测。更具体地，涉及一种同时测定18种非法添加抗病毒药物的方法。

背景技术：

1、凉茶作为深受岭南人民欢迎的传统饮料，于2006年入选国务院认定的首批国家级非物质文化遗产，是广东中医药文化的代表之一。然而，凉茶、中药制剂中非法添加化学药物的报道不绝于耳，且非法添加的成分、种类不断增加，如在不知情的情况下与其他药物一起服用，容易加重药物不良反应或造成药物相互作用，存在较大的安全隐患。近年来，受病毒感染的影响，凉茶及中药制剂中非法添加抗病毒药物的行为迅速蔓延。然而，目前主要研究的是凉茶及中药制剂中非法添加解热镇痛类、抗组胺类药、镇咳祛痰类、抗菌类、糖皮质激素类药物的检测，如王静公开了一种凉茶中非法添加18种解热镇痛类药物、肾上腺皮质激素类药物的lc-ms/ms检测方法(王静.凉茶中非法添加18种化学药物的lc-ms/ms检测方法研究[d].广西中医药大学,2013.)。因此，仍缺乏针对凉茶及中药制剂中非法添加抗病毒类药物的检测方法。

2、按化学结构分类，抗病毒药物主要可分为开环核苷类(如阿昔洛韦、泛昔洛韦、更昔洛韦等)、非开环核苷类(如利巴韦林等)、三环胺类(如金刚烷胺、金刚乙烷等)、多肽类类似物(如利托那韦)、神经氨酸类似物(如奥司他韦、扎那米韦、帕拉米韦等)。可见，抗病毒类药物种类多，结构差异大，化合物亲水性和极性分布广，很难在一个普通的反相色谱系统中实现多类药物同时保留和分离进行检测。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术缺乏针对凉茶及中药制剂中非法添加抗病毒类药物检测方法，且抗病毒化合物种类多、结构差异大，很难在一个色谱系统中实现多类药物同时保留和分离的缺陷和不足，提供一种同时测定凉茶及中药制剂中18种非法添加抗病毒药物的方法。

2、本发明上述目的通过以下技术方案实现：

3、一种同时测定18种非法添加抗病毒药物的方法，采用高效液相色谱-串联质谱法进行测定，具体包括以下步骤：

4、s1、标准溶液制备：将各标准品用溶剂溶解、定容，混合稀释为混合标准溶液，根据需求调整浓度，储存、待测；

5、s2、供试品溶液制备：取待测样品用甲醇-乙腈溶液超声提取，过膜，待测；

6、s3、所述高效液相色谱：非键合硅胶型hilic色谱柱，柱温35～40℃，流速0.2～0.4ml/min；以含有0.1％乙酸的10mmol乙酸铵溶液作为流动相a，0.1％甲酸乙腈作为流动相b，按照以下洗脱程序进行梯度洗脱：0～0.5min，3％流动相a；0.5～2.0min，3～5％流动相a；2.0～4.0min，5～10％流动相a；4.0～9.0min，10～20％流动相a；9.0～14.0min，20％流动相a；14.0～14.1min，20～3％流动相a；14.1～18.0min，3％流动相a；

7、s4、所述质谱条件：离子源为电喷雾离子源；电喷雾电压：为正离子模式检测，电喷雾电压为5000～5500v；离子源温度：500～550℃；雾化气压力：45～55psi；气帘气压力：35～45psi；碰撞气压力：8～10psi，采用多重反应监测。

8、进一步地，所述18种非法添加抗病毒药物分别为盐酸吗啉胍、盐酸金刚烷胺、盐酸金刚乙胺、喷昔洛韦、磷酸奥司他韦、三水合帕拉米韦、扎那米韦、利巴韦林、阿比多尔、法匹拉韦、玛巴洛沙韦、洛匹那韦、利托那韦、拉尼米韦、阿昔洛韦、更昔洛韦、泛昔洛韦、盐酸伐昔洛韦。

9、更进一步地，步骤s1中，所述标准品为盐酸吗啉胍、盐酸金刚烷胺、盐酸金刚乙胺、磷酸奥司他韦、三水合帕拉米韦、利巴韦林、阿比多尔、法匹拉韦、玛巴洛沙韦、洛匹那韦、泛昔洛韦、盐酸伐昔洛韦时，所述试剂为甲醇；所述标准品为利托那韦、喷昔洛韦、阿昔洛韦、更昔洛韦时，先用二甲基亚砜溶解后，再用甲醇定容；所述标准品为扎那米韦、拉尼米韦时，所述溶剂为水。

10、进一步地，所述金刚烷胺、泛昔洛韦的定量限为0.0125mg/kg；所述金刚乙胺、玛巴洛沙韦的定量限为0.025mg/kg；所述吗啉胍的定量限为0.05mg/kg；所述利巴韦林、奥司他韦的定量限为0.125mg/kg；所述阿昔洛韦、伐昔洛韦的定量限为0.25mg/kg；所述更昔洛韦、喷昔洛韦、阿比多尔、帕拉米韦、洛匹那韦的定量限为0.5mg/kg；所述法匹拉韦、利托那韦、拉尼米韦、扎那米韦的定量限为5.0mg/kg。

11、更进一步地，所述法匹拉韦、利托那韦、拉尼米韦、扎那米韦的检测限为2.0mg/kg；所述金刚乙胺、玛巴洛沙韦的检测限为0.01mg/kg；所述更昔洛韦、喷昔洛韦、阿比多尔、帕拉米韦、洛匹那韦的检测限为0.2mg/kg；所述利巴韦林、奥司他韦的检测限为0.05mg/kg；所述金刚烷胺、泛昔洛韦的检测限为0.005mg/kg；所述阿昔洛韦、伐昔洛韦的检测限为0.1mg/kg；所述吗啉胍的检测限为0.02mg/kg。

12、进一步地，步骤s2中，所述待测样品为凉茶或中药制剂。优选地，所述中药制剂为以中药为主要功效成分制成的片剂、针剂、胶囊、口服液、颗粒剂等制剂，具体如感冒药、抗病毒药、清热解毒药等。

13、更进一步地，步骤s2中，所述甲醇-乙腈溶液中甲醇与乙腈的体积比为(20～30):(70～80)。

14、进一步地，步骤s2中，所述超声提取的时间为25～35min。

15、更进一步地，步骤s3中，所述非键合硅胶型hilic色谱柱为waters acquity behhilic色谱柱或agilent rrhd hilic plus色谱柱。优选地，所述waters acquity beh hilic色谱柱的规格为2.1mm×100mm，1.7μm；所述agilent rrhd hilic plus色谱柱的规格为2.1mm×100mm，1.8μm。实验中发现，采用上述非键合硅胶型hilic色谱柱的保留、分离效果均较好。

16、进一步地，所述方法的重复性验证中两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15％。

17、更进一步地，所述标准品的平均回收率为70～115％。

18、本发明具有以下有益效果：

19、本发明提供了一种同时测定18种非法添加抗病毒药物的方法，将待测样品用甲醇-乙腈溶液超声处理后，采用高效液相色谱-串联质谱法进行分离、测定，准确性、稳定性、灵敏度高，可以同时定性和定量；并且不需要对样品进行复杂的样品前处理，仪器使用成本低，分析速度快，20min内即可完成对一个样品中18种结构差异显著的抗病毒药物进行分析检测，极大的缩短了分析时间，大幅提高检测效率。

技术特征：

1.一种同时测定18种非法添加抗病毒药物的方法，其特征在于，采用高效液相色谱-串联质谱法进行测定，具体包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述18种非法添加抗病毒药物分别为盐酸吗啉胍、盐酸金刚烷胺、盐酸金刚乙胺、喷昔洛韦、磷酸奥司他韦、三水合帕拉米韦、扎那米韦、利巴韦林、阿比多尔、法匹拉韦、玛巴洛沙韦、洛匹那韦、利托那韦、拉尼米韦、阿昔洛韦、更昔洛韦、泛昔洛韦、盐酸伐昔洛韦。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，步骤s1中，所述标准品为盐酸吗啉胍、盐酸金刚烷胺、盐酸金刚乙胺、磷酸奥司他韦、三水合帕拉米韦、利巴韦林、阿比多尔、法匹拉韦、玛巴洛沙韦、洛匹那韦、泛昔洛韦、盐酸伐昔洛韦时，所述试剂为甲醇；所述标准品为利托那韦、喷昔洛韦、阿昔洛韦、更昔洛韦时，先用二甲基亚砜溶解后，再用甲醇定容；所述标准品为扎那米韦、拉尼米韦时，所述溶剂为水。

4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述金刚烷胺、泛昔洛韦的定量限为0.0125mg/kg；所述金刚乙胺、玛巴洛沙韦的定量限为0.025mg/kg；所述吗啉胍的定量限为0.05mg/kg；所述利巴韦林、奥司他韦的定量限为0.125mg/kg；所述阿昔洛韦、伐昔洛韦的定量限为0.25mg/kg；所述更昔洛韦、喷昔洛韦、阿比多尔、帕拉米韦、洛匹那韦的定量限为0.5mg/kg；所述法匹拉韦、利托那韦、拉尼米韦、扎那米韦的定量限为5.0mg/kg。

5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述法匹拉韦、利托那韦、拉尼米韦、扎那米韦的检测限为2.0mg/kg；所述金刚乙胺、玛巴洛沙韦的检测限为0.01mg/kg；所述更昔洛韦、喷昔洛韦、阿比多尔、帕拉米韦、洛匹那韦的检测限为0.2mg/kg；所述利巴韦林、奥司他韦的检测限为0.05mg/kg；所述金刚烷胺、泛昔洛韦的检测限为0.005mg/kg；所述阿昔洛韦、伐昔洛韦的检测限为0.1mg/kg；所述吗啉胍的检测限为0.02mg/kg。

6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s2中，所述待测样品为凉茶或中药制剂。

7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s2中，所述甲醇-乙腈溶液中甲醇与乙腈的体积比为(20～30):(70～80)。

8.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤s3中，所述非键合硅胶型hilic色谱柱为waters acquity beh hilic色谱柱或agilent rrhd hilic plus色谱柱。

9.根据权利要求1～8任一所述方法，其特征在于，所述方法的重复性验证中两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15％。

10.根据权利要求1～8任一所述方法，其特征在于，所述标准品的平均回收率为70～115％。

技术总结
本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种同时测定18种非法添加抗病毒药物的方法。该方法将待测样品用甲醇‑乙腈溶液超声处理后，采用高效液相色谱‑串联质谱法进行分离、测定，准确性、稳定性、灵敏度高，可以同时定性和定量；并且不需要对样品进行复杂的样品前处理，仪器使用成本低，分析速度快，20min内即可完成对一个样品中18种结构差异显著的抗病毒药物进行分析检测，极大的缩短了分析时间，大幅提高检测效率。

技术研发人员：温家欣,曹雅静,何嘉雯,陈俏,赖宇红,李华
受保护的技术使用者：广东省药品检验所（广东省药品质量研究所、广东省口岸药品检验所）
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13