一种检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法与流程

本发明涉及生物检测，具体涉及一种检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法。

背景技术：

1、天冬酰胺(asn)是一种重要的氨基酸，脑功能的发展离不开asn。在体氨循环中，asn扮演重要角色，在氨基酸的营养液中，asn也是不可缺少的组分。谷氨酰胺(gln)是谷氨酸的酰基，也是二十多种非基本氨基酸中的一种，适用人群广泛，例如，gln可以促进少年儿童大脑发育，增强记忆力，对于老年人来说，可以保持大脑活动从而防止老年痴呆症，gln还可以为工作繁忙的白领“充电”，防止脑部疲劳，病后和术后的人群也可以使用谷氨酰胺来帮助康复。

2、常见的氨基酸代谢障碍配方食品中对asn和gln的含量均有限制，例如，尿素循环障碍配方食品中要求asn和gln的含量均≤1.5mg/g。但是，asn和gln分别会转化成天冬氨酸和谷氨酸，从而导致asn和gln的测定困难，目前国内外均未形成食品中asn和gln的标准检测方法。近几年来，由于asn和gln的市场应用不断扩大，在国内外的使用量都很可观，市场规模也在不断增长，产生了较大的经济效益。鉴于目前并没有检测食品中asn和gln含量的标准检测方法，属于食品检测领域的空缺，这会给日常监管及企业的质量控制带来极大的困难。因此，亟待一种针对食品中asn和gln的检测方法。

技术实现思路

1、本发明提供一种检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法，该方法可精确定量样本中的天冬酰胺和谷氨酰胺的含量。

2、根据第一方面，一种实施例中提供一种检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法，包括：

3、样品前处理步骤：将待测样品与蛋白酶溶液混合并酶解，然后过滤，取上清液，得到酶解后的样品溶液，蛋白酶溶液包括能用于对待测样品进行酶切的蛋白酶、酶解促进剂和溶剂；

4、衍生步骤：配制不同浓度的标准样品溶液，对酶解后的样品溶液及标准样品溶液分别进行衍生，得到待测样品溶液及标准样品溶液；

5、检测步骤：采用液相色谱法对衍生步骤得到的待测样品溶液和标准样品溶液进行检测，得到检测数据；

6、定量计算步骤：依据检测数据制作标准曲线，计算，得到待测样品中asn和gln的含量。

7、进一步地，蛋白酶包括灰色链霉菌蛋白酶或地衣芽孢杆菌蛋白酶；酶解促进剂包括甲醇和乙腈中的至少一种以及三羟甲基氨基甲烷缓冲试剂；溶剂包括三羟甲基氨基甲烷缓冲试剂。

8、进一步地，衍生步骤中的衍生方法包括线下衍生和在线衍生。

9、本发明提供的一种检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法，采用蛋白酶对待测样品进行酶切，获得游离态的天冬酰胺和谷氨酰胺，使得在后续的液相色谱检测中能够更加精准的测得样品中天冬酰胺和谷氨酰胺的含量。

技术特征：

1.一种检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法,其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蛋白酶包括灰色链霉菌蛋白酶或地衣芽孢杆菌蛋白酶；所述酶解促进剂包括甲醇和乙腈中的至少一种以及三羟甲基氨基甲烷缓冲试剂；所述溶剂包括三羟甲基氨基甲烷缓冲试剂。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生步骤中的衍生方法包括线下衍生和在线衍生。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述线下衍生具体步骤包括：先将酶解后的样品溶液与ph调节剂混合，再与线下衍生试剂混合并在避光条件下反应，然后再加入反应终止试剂，静置，过滤。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述ph调节剂包括碳酸钠缓冲液；所述线下衍生试剂包括丹磺酰氯；所述反应终止试剂包括盐酸甲胺；

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述碳酸钠缓冲液的ph为9.5；

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述在线衍生的衍生程序包括：先抽取样品溶液和第一衍生试剂并混合，得到初步衍生溶液，再抽取第二衍生试剂并与初步衍生溶液混合，然后用洗针液洗针，再进样、清洗。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述第一衍生试剂包括硼酸钠溶液；所述第二衍生试剂包括临苯二甲醛。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱中的流动相为磷酸氢二钠和甲醇。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品前处理步骤具体包括：称取待测样品置于容器中，然后再加入蛋白酶溶液并置于恒温培养箱中酶解，然后过滤，取上清液，得到酶解后的样品溶液。

技术总结
一种检测食品中天冬酰胺和谷氨酰胺含量的方法，包括样品前处理、衍生、检测和定量计算步骤。样品前处理步骤包括将待测样品与蛋白酶溶液混合并酶解，然后过滤，取上清液，得到酶解后的样品溶液。衍生步骤包括配制不同浓度的标准样品溶液，对所述酶解后的样品溶液及标准样品溶液分别进行衍生，得到待测样品溶液及标准样品溶液。检测步骤包括采用液相色谱法对衍生步骤得到的待测样品溶液和标准样品溶液进行检测，得到检测数据。定量计算步骤包括依据检测数据制作标准曲线，计算，得到待测样品中Asn和Gln的含量。该方法可提高样品中天冬酰胺和谷氨酰胺的含量的检测精度。

技术研发人员：王奇,肖伟敏,杨俊,陈佳平,吴益淳,罗敏,陈国培,范志颖,杨华瑞,杨国武,苏佳婷,叶新玉,匡慧颖,赵云霞
受保护的技术使用者：深圳深检集团医学检验实验室
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13