一种检测乙型肝炎病毒相关肝癌的联合标志物、检测方法及应用与流程

本发明涉及一种乙型肝炎病毒(hbv)相关肝癌的检测方法，具体涉及一种乙型肝炎病毒(hbv)相关肝癌的联合标志物的检测方法及应用，属于生物医药。

背景技术：

1、原发性肝癌(plc)是目前我国第四位常见恶性肿瘤及第二位肿瘤致死病因，严重威胁我国人民的生命和健康。原发性肝癌主要包括肝细胞癌(hcc)、肝内胆管癌(icc)和混合型肝细胞癌-胆管癌(chcc-cca)。2022年中国原发性肝癌临床登记调查(clcs)显示：肝细胞癌占肝癌的91.6％，其中84％是由乙型肝炎病毒(hbv)感染引起的，乙型肝炎肝硬化是我国肝细胞癌的主要病因，是筛查的重点监测人群。

2、根据2019年gbd数据库显示：肝癌年龄标准化发病率为6.51/10万。高发病率年龄：男性为50-69岁，女性为60-79岁。无论哪个年龄段，乙型肝炎病毒感染都是最主要的肝细胞癌病因，占41％。乙型肝炎病毒感染后，会整合进宿主基因组，引起宿主细胞基因排列异常；引起乙型肝炎病毒相关蛋白诱导肿瘤的机制发生；诱发炎症、氧化应激反应；引起肝细胞异常再生，多种机制共同导致肝细胞癌。

3、目前组织病理学和细胞学检查是诊断乙型肝炎病毒相关肝癌的金标准，主要是采用肝脏穿刺取样进行病理学诊断，由于是有创检查，患者依存性差且存在感染风险；影像学检查包括b超、ct、mri作为辅助检查进行乙型肝炎病毒相关肝癌的诊断，其特异性有待进一步提高。因此临床上需要新的标志物检测乙型肝炎病毒相关肝癌。

4、人体内血清中n-糖蛋白主要由肝脏和b淋巴细胞合成，n-糖蛋白的糖链(glycan)结构与数量的异常往往可以反映乙型肝炎病毒相关肝癌病变。目前临床上甲胎蛋白(afp)、甲胎蛋白异质体(afp-l3)和异常凝血酶原(dcp)几项指标均与hbv相关肝癌关系密切，这几项指标也常作为乙型肝炎病毒相关肝癌检测的标志物；不同标志物的联合对提高乙型肝炎病毒相关肝癌检测的准确率具有重要意义。

技术实现思路

1、针对目前临床上使用的乙型肝炎病毒相关肝癌检测中存在的问题，本发明提供一种用于乙型肝炎病毒相关肝癌的联合标志物评分以及其研究方法的建立。本发明基于乙型肝炎病毒相关肝癌患者糖链、甲胎蛋白(afp)、甲胎蛋白异质体(afp-l3)和异常凝血酶原(dcp)的变化，建立联合标志物的评分，基于评分对hbv相关肝癌进行检测。

2、本发明采用的技术方案如下：

3、一种检测乙型肝炎病毒相关肝癌的联合标志物，所述联合标志物由糖链、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体和异常凝血酶原组成。

4、优选的，所述甲胎蛋白标记为afp、甲胎蛋白异质体标记为afp-l3，异常凝血酶原标记为dcp。

5、一种检测乙型肝炎病毒相关肝癌的检测方法，包括以下步骤：

6、步骤一 样本标志物的检测

7、收集乙型肝炎病毒感染者的样本，并对收集的样本进行标志物afp、afp-l3、dcp检测，得到相关检测数据结果；

8、步骤二 样本糖链的检测

9、对收集的样本进行糖链检测，得到相关检测数据结果；

10、步骤三 数据分析

11、通过对步骤一和步骤二的标志物和糖链检测数据进行分析，构建联合标志物模型来检测hbv相关肝癌。

12、优选的，所述步骤二中样本类型为体液。

13、优选的，所述步骤二中样本类型为血清或血浆。

14、一种联合标志物在检测乙型肝炎病毒相关肝癌中的应用，其特征在于，所述联合标志物由糖链、afp、afp-l3和dcp组成，联合标志物通过构建模型计算相关数值来检测乙型肝炎病毒相关肝癌。

15、优选的，所述联合标志物通过构建逻辑回归模型计算logit-y＝5×糖链+2×dcp+4×afp-l3+2.5×afp的值来检测乙型肝炎病毒相关肝癌。

16、与现有技术相比，本发明的有益效果：

17、(1)将乙型肝炎病毒(hbv)相关肝癌患者(190例)和hbv相关非肝癌患者(200例)各标志物(糖链、afp、afp-l3和dcp)数据进行对比分析，基于联合标志物建立的“logit-y＝5×糖链+2×dcp+4×afp-l3+2.5×afp”模型在区分hbv相关肝癌患者时roc曲线下auc值达到0.950，该“logit-y＝5×糖链+2×dcp+4×afp-l3+2.5×afp”模型检测的cut off值为5时，对hbv相关肝癌检测的灵敏度为91.50％，特异度为95.00％，表明联合标志物“logit-y＝5×糖链+2×dcp+4×afp-l3+2.5×afp”可以作为检测hbv相关肝癌的标志物。

18、(2)本发明将敏感性较高的糖链，特异性较高的afp、afp-l3和dcp相结合，建立多个标记物联用的评分模型来提高预测的敏感性和特异性。

19、(3)本发明的检测技术具有灵敏度高、操作简单、重复性高、稳定性好、高通量等优点。

技术特征：

1.一种检测乙型肝炎病毒相关肝癌的联合标志物，其特征在于，所述联合标志物由糖链、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体和异常凝血酶原组成。

2.根据权利要求1所述的检测乙型肝炎病毒相关肝癌的联合标志物，其特征在于，所述甲胎蛋白标记为afp、甲胎蛋白异质体标记为afp-l3，异常凝血酶原标记为dcp。

3.根据权利要求2所述的检测乙型肝炎病毒相关肝癌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的检测乙型肝炎病毒相关肝癌的检测方法，其特征在于，所述步骤二中样本类型为体液。

5.根据权利要求4所述的检测乙型肝炎病毒相关肝癌的检测方法，其特征在于，所述步骤二中样本类型为血清或血浆。

6.一种联合标志物在检测乙型肝炎病毒相关肝癌中的应用，其特征在于，所述联合标志物由糖链、afp、afp-l3和dcp组成，联合标志物通过构建模型计算相关数值来检测乙型肝炎病毒相关肝癌。

7.根据权利要求6所述的联合标志物在检测乙型肝炎病毒相关肝癌中的应用，其特征在于，所述联合标志物通过构建逻辑回归模型计算logit-y＝5×糖链+2×dcp+4×afp-l3+2.5×afp的值来检测乙型肝炎病毒相关肝癌。

技术总结
本发明提供了一种检测乙型肝炎病毒相关肝癌的联合标志物、检测方法及应用，联合标志物由糖链、甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP‑L3)和异常凝血酶原(DCP)组成，检测方法包括以下步骤：步骤一、对收集的样本进行标志物检测；步骤二、对收集的样本进行糖链检测；步骤三、对标志物和糖链检测数据进行分析，构建联合标志物模型。联合标志物通过计算Logit‑Y＝5×糖链+2×DCP+4×AFP‑L3+2.5×AFP的值来检测乙型肝炎病毒相关肝癌。本发明将敏感性较高的糖链，特异性较高的甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体和异常凝血酶原相结合，建立多个标记物联用的评分模型来提高预测的敏感性和特异性；本发明的检测方法具有灵敏度高、操作简单、重复性高、稳定性好、高通量等优点。

技术研发人员：陈翠英,谈宗男,张军利
受保护的技术使用者：江苏先思达生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14