一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法与流程

本发明属于药品分析，具体涉及一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法。

背景技术：

1、泊洛沙姆188，为白色至微黄色半透明蜡状固体，微有异臭，属于非离子型表面活性剂，现作为一种优良的药用辅料，因其乳化性能佳、性质稳定、毒性较低、生物相容性较好等优点，广泛应用于制药工业，主要用作乳化剂、稳定剂和增溶剂。随着药物质控标准的不断完善，监管部门对药物中药用辅料含量的控制也越来越严格，因此，建立适当的分析方法对辅料含量进行监控显得十分必要。

2、目前对泊洛沙姆188含量的检测，多采用蒸发光散射检测器(elsd)，其主要基于雾化气溶胶原理，将光信号转化为电信号进行检测。elsd检测时虽受体积流量和温度影响较小，但由于其结构特点，在耐用性与稳定性方面均不理想，且对低含量成分的检测重复性差、灵敏度较低。

3、中国专利cn111289652 a公开了注射液中泊洛沙姆188的检测方法，采用反向色谱柱进行分离，流动相洗脱，结合蒸发光检测器对泊洛沙姆188含量进行检测，注射液为重组人白介素-12注射液，其检测定量限可达到0.4ug，这种检测方法虽然也可以对泊洛沙姆188制剂中泊洛沙姆188的含量进行检测，但灵敏度仍不够，且误差较大，无法达到目前药物质控标准。

技术实现思路

1、本发明的目的在于：克服现有技术中的不足之处，提供一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，该方法能准确的测出注射液中泊洛沙姆188含量，专属性强、灵敏度高，稳定性好，大大缩短了分析时间，提高了检测效率。

2、为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

3、一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，采用体积排阻色谱柱，应用电雾式检测器对用流动相分离洗脱下来的泊洛沙姆188进行含量检测，其色谱条件为：

4、流动相a：浓度为8～12mmol/l的乙酸铵，用乙酸调节溶液ph为4～7；

5、流动相b：异丙醇；

6、所述流动相a与流动相b的体积比为4～9:1；

7、洗脱方式为等度洗脱，洗脱流速为0.1～1.0ml/min；

8、设定柱温为20～35℃；

9、设定样品温度为4～25℃；

10、设定进样量为1～10ul；

11、设定检测时间为30～45min。

12、本发明中，所述色谱柱优选biocore sec-120，7.8×300mm×5um。

13、本发明中，所述电雾式检测器的雾化温度为40～55℃，采集频率8～12hz，过滤常数2.0～6.0s；优选地，所述电雾式检测器的雾化温度为50℃，采集频率10hz，过滤常数5.0s。

14、本发明中，所述流动相a为10mmol/l乙酸铵,用乙酸调节溶液ph至5.2；所述流动相b为浓度为100％的异丙醇；所述流动相a与流动相b的体积比为9:1；所述洗脱流速为0.6ml/min。

15、优选的，所述进样量为10ul；柱温为25℃，样品温度为10℃。

16、本发明中一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，包括以下步骤：

17、1)配制对照品溶液：取泊洛沙姆188对照品，用稀释剂分别溶解成浓度不同的至少两组对照品溶液；

18、2)配制供试品溶液：取注射液，作为供试品溶液，平行制备至少两份；

19、3)进样：分别取步骤1)和步骤2)中配制好的对照品溶液以及供试品溶液按设定的进样量注入液相色谱仪中进行检测；

20、4)含量计算：记录对照品溶液以及供试品溶液各色谱图中泊洛沙姆188的峰面积，并计算供试品溶液中泊洛沙姆188的含量。

21、本发明中，所述注射液为人生长激素注射液。

22、上述步骤中，所述制备的对照品溶液的浓度为1.0～5.0mg/ml，所述制备的供试品溶液的浓度为3.33mg/ml。

23、所述稀释剂为超纯水。

24、本发明中，所述步骤c供试品溶液中泊洛沙姆188的含量计算方法为：以对照品浓度为横坐标，以每组对照品平均峰面积为纵坐标，进行一元二次项线性回归，将供试品峰面积值代入一元二次项线性方程，计算出供试品溶液中泊洛沙姆188的含量；其中每组对照品溶液的峰面积rsd值均应≤3.0％，一元二次项线性回归的回归系数r应≥0.998。

25、优选的，本发明中一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，具体包括以下步骤：

26、1)配制对照品溶液：取泊洛沙姆188对照品，用稀释剂分别溶解成浓度为1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml、2.5mg/ml和3.0mg/ml的对照品溶液，并依次编号为a1、a2、a3、a4、a5；

27、2)配制供试品溶液：取浓度为3.33mg/ml的注射液1瓶，作为供试品溶液，平行制备两份，并编号为b1、b2；

28、3)进样：分别取步骤1)和步骤2)中配制好的对照品溶液以及供试品溶液各10ul注入液相色谱仪中进行检测；

29、4)含量计算：记录各色谱图中泊洛沙姆188的峰面积，以对照品浓度为横坐标，以每个对照品平均峰面积为纵坐标，进行一元二次项线性回归，将供试品峰面积值代入一元二次项线性方程，计算出供试品溶液中泊洛沙姆188的含量。

30、本发明的优点和有益效果如下：

31、1、本发明的检测方法定量限可达到100ng，明显低于现有检测方法中能达到的定量限，即本方法灵敏度更高。

32、2、本发明的检测方法不受溶剂峰的干扰，基线噪声可达到0.2pa，检测方法稳定性好，准确度高。

33、3、本发明的检测方法采用的洗脱方式为等度洗脱，仅使用单一流动相即可实现对样品的快速分离检测，操作便捷高效。

34、4、本发明的检测方法所用流动相中乙酸铵浓度仅为10mmol/l，低盐浓度能有效延长色谱柱和电雾式检测器的使用寿命，更加经济环保。

技术特征：

1.一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于采用体积排阻色谱柱应用电雾式检测器对供试品和对照品中用流动相分离洗脱下来的泊洛沙姆188进行含量检测，其色谱条件为：

2.根据权利要求1所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于所述色谱柱为biocore sec-120，7.8×300mm×5um。

3.根据权利要求1所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于所述电雾式检测器的雾化温度为40～55℃，采集频率8～12hz，过滤常数2.0～6.0s。

4.根据权利要求1所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于所述流动相a为10mmol/l乙酸铵,用乙酸调节溶液ph至5.2；所述流动相b为浓度为100％的异丙醇；所述流动相a与流动相b的体积比为9:1；所述洗脱流速为0.6ml/min。

5.根据权利要求1所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于所述进样量为10ul，所述柱温为25℃，样品温度为10℃。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于包括以下步骤：

7.根据权利要求6所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于所述注射液为人生长激素注射液。

8.根据权利要求6所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于所述制备的对照品溶液的浓度为1.0～5.0mg/ml，所述制备的供试品溶液的浓度为3.33mg/ml。

9.根据权利要求6所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于所述稀释剂为超纯水。

10.根据权利要求6所述的一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法，其特征在于所述步骤c供试品溶液中泊洛沙姆188的含量计算方法为：以对照品浓度为横坐标，以每组对照品平均峰面积为纵坐标，进行一元二次项线性回归，将供试品峰面积值代入一元二次项线性方程，计算出供试品溶液中泊洛沙姆188的含量；其中每组对照品溶液的峰面积rsd值均应≤3.0％，一元二次项线性回归的回归系数r应≥0.998。

技术总结
本发明公开了一种注射液中泊洛沙姆188含量的检测方法。该方法采用体积排阻色谱柱，应用电雾式检测器对用流动相分离洗脱下来的泊洛沙姆188进行含量检测，其色谱条件如下：流动相A为浓度为8～12mmol/L的乙酸铵，且用乙酸调节溶液pH至4～7，流动相为异丙醇，流动相A与流动相B的体积比为4～9:1；洗脱方式为等度洗脱，洗脱流速为0.1～1.0mL/min；设定柱温为20～35℃；设定样品温度为4～25℃；设定进样量为1～10ul；设定检测时间为30～45min。本发明中，所述色谱柱优选BioCore SEC‑120，7.8×300mm×5um。该方法能准确的测出注射液中泊洛沙姆188含量，专属性强、灵敏度高，稳定性好，大大缩短了分析时间，提高了检测效率。

技术研发人员：梁洪文,曹俊超,张少珍,尹光俊,邹子湘,王婉灵,于占东
受保护的技术使用者：中山未名海济生物医药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14