一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法及质控拭子与流程

本发明属于生物技术，尤其是涉及一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法及质控拭子。

背景技术：

1、目前医院里针对发热患者的初步检查依赖于抗原检测和免疫诊断测试卡，在反应速度来看，采用免疫诊断测试卡更为合适。其使用更为方便且随时随地可进行检测，十几分钟即可出结果，现在免疫诊断测试卡已在国内外进行大规模使用，可见免疫诊断测试卡的质量极为重要。对其进行的出厂检测也是保障质量的重中之重。

2、1、现阶段测试卡的质控均为液体或者粉末状态，目前尚无生产质控拭子类似产品厂家，液态的质控品大多需存储于-20℃条件下，使用不便，更重要的是，反复的冻融对检测结果有较大影响。因此开发出一种稳定、操作方便、可放置于常温保存的质控拭子检测试剂十分必要。

3、2、现阶段粉末状态质控品，用户使用比较繁琐，需要溶剂进一步溶解才能使用。

4、3、现阶段质控品稳定性差。

5、4、包含项目少，多为针对某项指标的单独质控品。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明旨在提出一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法及质控拭子，以使其可在常温下保存，增加其稳定性以及降低使用门槛。

2、为达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：

3、一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法，质控品包括阳性质控品和阴性质控品：

4、阳性质控品包括目标病毒或者细菌蛋白、保护液以及染剂；

5、阳性质控品的制备过程如下：

6、s1：制备混合液：从冷冻柜中取出保存的目标病毒或者细菌蛋白冻干粉置于烧杯中，静置使其复温，向烧杯内注入保护液将其溶解，制备出浓度为0.1～2mg/ml的目标病毒或者细菌蛋白的混合溶液。

7、s2：制备稀释液：将保护液注入目标病毒或者细菌蛋白的混合液，并混合均匀，将目标病毒或者细菌蛋白混合液稀释，得到浓度为50pg/ml～150pg/ml稀释液；

8、s3：制备阳性质控品：向稀释液内注入染剂，混合均匀，得到标记后的阳性质控品。

9、进一步的，保护液为包括酪蛋白钠、表面活性剂、防腐剂、抗菌剂、edta以及缓冲液的混合溶液，其中缓冲液为磷酸盐溶液。

10、进一步的，所述缓冲液的制备方式为：取0.5m的nah2po4.2h2o溶液和0.5m的na2hpo4的溶液置于100ml的烧杯中，调整二者的配比，将缓冲液的ph值调整至6.8～6.9，在烧杯中加入去离子水定容至100ml，配置完成的缓冲液于2～8℃下密封保存，配置完成的缓冲液浓度为0.5m。

11、进一步的，保护液的制备方法为：

12、1)配置酪蛋白钠溶液：取0.2～0.8g酪蛋白钠置于烧杯中，用10ml0.02m的naoh溶液溶解；

13、2)量取20ml缓冲液将其置于烧杯中，加入去离子水定容至80ml，备用；

14、3)取0.1～0.3g表面活性剂、0.01～2g防腐剂、0.001～0.05g抗菌剂、0.1～0.5gedta将其混合放在烧杯中，注入酪蛋白钠溶液将其溶解，并注入去离子水定容至100ml；

15、4)将配置好的保护液用滤纸过滤出杂质，过滤后的液体放置在2～8℃的环境下密封保存。

16、进一步的，表面活性剂采用trixon-100和peg-20000，其浓度之比为1:1；防腐剂采用proclin-300；抗菌剂采用硫酸庆大霉素。

17、进一步的，s1中储存目标病毒或者细菌蛋白冻干粉的温度为-18℃～-20℃，在其溶解前需将其复温至14～30℃；

18、s3中用到的染剂为0.2％浓度的诱惑红，添加的染剂与s2得到的稀释液的体积比为1:5000；

19、s1-s3中需使用混匀仪或者超声清洗机进行溶解、混匀操作。

20、进一步的，选用的目标病毒或细菌蛋白冻干粉为重组sars-cov-2核衣壳蛋白冻干粉。

21、进一步的，阴性质控品为非目标病毒或细菌蛋白冻干粉溶液或保护液。

22、一种质控拭子，包括阴性质控拭子和阳性质控拭子以及种病毒检测试剂盒质控品的制备方法制备的阴性质控品和阳性质控品。

23、进一步的，阳性质控拭子的制备步骤包括：

24、s4：将灭菌的拭子插入到工装上；

25、s5：将带有颜色的阳性质控品液体倒入到点胶机中，点胶机内的液体滴加到质控拭子的拭子头上；

26、s6：将滴液完的拭子放入烘干箱进行烘干，干燥后，放入干燥剂密封在铝箔袋中，即可得到阳性质控拭子；

27、阴性质控拭子的制备步骤包括：

28、s7：将灭菌的拭子插入到工装上；

29、s8：将阴性质控品液体倒入到点胶机中，点胶机内的液体滴加到质控拭子的拭子头上；

30、s9：将滴液完的拭子放入烘干箱进行烘干，干燥后，放入干燥剂密封在铝箔袋中，即可得到阴性质控拭子；

31、或者将质控拭子经灭菌操作后，密封在铝箔袋中，得到阴性质控拭子。

32、进一步的，阳性质控拭子以及阴性质控拭子烘干的温度为43℃～47℃；

33、滴加到质控拭子的拭子头上的质控品液体量为5μl～20μl。

34、相对于现有技术，本发明所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法及质控拭子具有以下优势：

35、1.本发明所述的质控拭子不需要低温存储，不需要反复冻融，常温存储即可；

36、2.本发明所述的质控拭子，制作简单，制作成本小，可大批量制作，且稳定性良好；

37、3.本发明所述的质控拭子使用操作简单，便于操作者使用。

技术特征：

1.一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法，质控品包括阳性质控品和阴性质控品，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法，其特征在于：保护液为包括酪蛋白钠、表面活性剂、防腐剂、抗菌剂、edta以及缓冲液的混合溶液，其中缓冲液为磷酸盐溶液。

3.根据权利要求2所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法，其特征在于：缓冲液的制备方式为：取0.5m的nah2po4.2h2o溶液和0.5m的na2hpo4的溶液置于100ml的烧杯中，调整二者的配比，将缓冲液的ph值调整至6.8～6.9，在烧杯中加入去离子水定容至100ml，配置完成的缓冲液于2～8℃下密封保存，配置完成的缓冲液浓度为0.5m。

4.根据权利要求3所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法，其特征在于：保护液的制备方法为：

5.根据权利要求4所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法，其特征在于：表面活性剂采用trixon-100和peg-20000，其浓度之比为1:1；防腐剂采用proclin-300；抗菌剂采用硫酸庆大霉素。

6.根据权利要求1所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法，其特征在于：

7.根据权利要求1-6任一项所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法，其特征在于：选用的目标病毒或细菌蛋白冻干粉为重组sars-cov-2核衣壳蛋白冻干粉。

8.根据权利要求1所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法。其特征在于：阴性质控品为非目标病毒或细菌蛋白冻干粉溶液或保护液。

9.一种质控拭子，其特征在于：包括阴性质控拭子和阳性质控拭子以及权利要求1-6、8任一项所述的一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法。

10.根据权利要求9所述的一种质控拭子，其特征在于：

11.根据权利要求10所述的一种质控拭子，其特征在于：阳性质控拭子以及阴性质控拭子烘干的温度为43℃～47℃；

技术总结
本发明提供了一种病毒检测试剂盒质控品的制备方法及质控拭子，质控品分为阴性质控品和阳性质控品，阳性质控品包括病毒的重组蛋白、保护液和染剂；阴性质控品包括保护液，保护液包括酪蛋白、表面活性剂、防腐剂、抗菌剂、EDTA和缓冲液；质控拭子包括阳性质控拭子和阴性质控拭子；阳性质控拭子可由阳性质控品滴加到拭子上并干燥而成，阴性质控拭子可由阴性质控品滴加到拭子上并干燥而成。本发明提供的实验结果表明，本发明提供的质控拭子具有良好的稳定性，在46℃环境下可稳定保存超过126天，常温环境下稳定保存至少18个月，稳定性优于液体状态下的质控品。该质控品与实际的临床采样拭子样本具有一致性，能够真实的模拟病毒在体外检测过程，通用性强。

技术研发人员：刁静君,齐艳玲,董美美
受保护的技术使用者：天津九安医疗电子股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14