一种Venn富集分子筛及其应用

本发明检测，具体涉及一种venn富集分子筛及其应用。

背景技术：

1、具有天然荧光的小分子化合物与蛋白质结合作用弱，在sds、巯基乙醇等蛋白变性试剂作用下破坏荧光小分子化合物与蛋白质的结合；所以普通方法如变性蛋白提取和凝胶电泳无法富集到荧光小分子化合物与蛋白质的结合条带，无法进行进一步靶蛋白的筛选。荧光小分子化合物被大分子化学基团如生物素修饰以及荧光探针修饰后，会丧失生物活性；所以使用化学修饰筛选荧光小分子化合物的结合靶蛋白的方法通常是无效的。

2、极易溶于水的化合物，即使用荧光基团修饰后仍具有生物活性，很难用传统的方法筛选（如生物素亲和层析和光敏交联法，化学交联质谱技术）到靶蛋白。

3、现在还没有一种有效的实验方法可以既能保留荧光小分子化合物和蛋白的相互作用，特别是分子量小于1000道尔顿的化合物，又能通过分组富集减少非靶蛋白的非特异性干扰，而且不需要对照组就能鉴定出荧光小分子化合物的结合靶蛋白。因此，开发一种能解决上述技术问题的产品以及方法至关重要。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种venn富集分子筛；第二目的在于提供所述的venn富集分子筛的应用。

2、本发明的第一目的是这样实现的，所述的venn富集分子筛是由不同梯度的非变性分离胶组成。

3、本发明采用不同梯度的非变性分离胶（8%-15%），作为一种“venn富集分子筛”，在非变性环境下可以在不同梯度的分离胶上都富集到荧光小分子化合物与蛋白质的作用条带，将这些条带切割后做蛋白质谱分析，通过venn富集，筛选目标荧光小分子化合物的结合蛋白，具体的venn富集原理和过程如下：荧光小分子化合物与靶蛋白结合后，在非变性环境中可能再与其它蛋白形成蛋白复合体，所以复合体根据其所含蛋白数量不同可能形成不同大小的蛋白复合体，非变性胶按孔径由大到小分为8%、10%、12%、15%，与荧光小分子化合物结合形成的蛋白复合体可能根据所含蛋白数量的不同被富集在不同孔径大小的非变性蛋白胶上。我们首先选择在8%-15%胶上出现重叠的蛋白进行验证，其中，在四个梯度胶上重叠次数越多的蛋白，与目标荧光化合物结合的可能性越大。如果目标荧光小分子化合物具有明确的亚细胞定位，如线粒体、细胞核、细胞膜等，可以进一步缩小靶蛋白的筛选范围；即使还未发现目标荧光小分子化合物的亚细胞定位，通过其荧光特性仍然可以后续找到其亚细胞定位。此外，本发明的这种方法不需要设置对照组。

4、本发明的第二目的是这样实现的，所述的venn富集分子筛应用于筛选荧光小分子化合物以及用于cy3荧光基团修饰后仍具有生物活性的多糖、脂肪酸、蛋白质、核酸等大分子化合物。

5、本发明通过结合非变性梯度胶（venn富集分子筛）、荧光化合物的亚细胞定位以及不同梯度胶上的重叠蛋白分析，成功分离、筛选和鉴定出xc的结合蛋白。

技术特征：

1.一种venn富集分子筛，其特征在于，所述的venn富集分子筛是由不同梯度的非变性分离胶组成。

2.根据权利要求1所述的venn富集分子筛，其特征在于，所述的非变性分离胶的梯度为8%~15%。

3.根据权利要求2所述的venn富集分子筛，其特征在于，所述的非变性分离胶的梯度从小到大为8%、10%、12%和15%。

4.根据权利要求1~3任一所述的venn富集分子筛的应用，其特征在于所述的venn富集分子筛应用于筛选自发荧光小分子化合物的结合蛋白。

5.根据权利要求1~3任一所述的venn富集分子筛的应用，其特征在于所述的venn富集分子筛应用于筛选荧光基团修饰后仍具有生物活性的大分子多糖的结合蛋白。

6.根据权利要求1~3任一所述的venn富集分子筛的应用，其特征在于所述的venn富集分子筛应用于筛选荧光基团修饰后仍具有生物活性的脂肪酸的结合蛋白。

7.根据权利要求1~3任一所述的venn富集分子筛的应用，其特征在于所述的venn富集分子筛应用于筛选荧光基团修饰后仍具有生物活性的蛋白质的结合蛋白。

8.根据权利要求1~3任一所述的venn富集分子筛的应用，其特征在于所述的venn富集分子筛应用于筛选荧光基团修饰后仍具有生物活性的核酸子的结合蛋白。

9.根据权利要求1~3任一所述的venn富集分子筛的应用，其特征在于所述的venn富集分子的荧光基团修饰后仍具有生物活性的化合物为xc。

10.根据权利要求1~3任一所述的venn富集分子筛的应用，其特征在于，所述的venn富集是通过多条蛋白条带上出现的重叠蛋白实现的。

技术总结
本发明公开一种Venn富集分子筛及其应用，所述的Venn富集分子筛是由不同梯度的非变性分离胶组成。应用为所述的Venn富集分子筛应用于筛选荧光小分子化合物以及用于荧光基团修饰后仍具有生物活性的小分子和大分子化合物。本发明通过结合Venn富集分子筛、荧光化合物的亚细胞定位以及不同梯度胶上的重叠蛋白分析，成功分离、筛选和鉴定出小分子（Xc）、多糖（Gc）、脂肪酸（Lc）、蛋白质（Pc）、核酸（Dc）的结合蛋白。

技术研发人员：张龙龙,茶靖美,王维丽
受保护的技术使用者：昆明医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15