本发明涉及中药有效成分检测，具体地说，是一种芩珠凉血合剂中指标性成分的高效液相色谱检测方法。
背景技术：
1、中药复方制剂的质量控制手段主要是对制剂中个别原药材的显微鉴别、检查、含量测定等进行定性和定量分析。然而中药复方制剂往往是包括多味药材，有的制剂中甚至包括动物药或矿物药，其所含的化学成分的复杂程度远远超过了单味药材。实际上，越来越多的药学研究者认识到利用显微鉴别、薄层色谱鉴别和单一指标性成分的定量分析远远不能全面有效的反映中药复方制剂质量一致性和有效性。从2015年版《中国药典》一部开始，对于中药复方制剂的质量控制标准已经有了一定的提高。例如，对于同一制剂具有不同质控标准统一了质量控制标准；对于一些无薄层鉴别项(或者薄层鉴别较少、已薄层鉴别项不是针对君药)的中药复方制剂增加了薄层鉴别指标；由原来的单一指标性成分含量测定增加为关联药效的多个指标性成分的含量测定；薄层扫描法用于含量测定的制剂品种有所减少；加强了气相色谱法应用于含挥发性化学成分的中药复方制剂等等；这些质量控制方法的改进无疑体现了中药复方制剂的质量标准和质量控制力在不断的提高。但是中药复方制剂的质量评价与控制问题仍然是困扰中医药发展和国际化的一个瓶颈，开展中药复方制剂新的质量评控模式和方法研究迫在眉睫。
2、中国药师，2016,19(05),1026-1029，公开了“芩珠凉血合剂的质量标准”。方法:采用tlc法对处方中的黄芩、甘草和薏苡仁进行定性鉴别，采用hplc法测定制剂中黄芩苷和甘草酸的含量。结果:tlc能够特异性的鉴别黄芩、甘草和薏苡仁，黄芩苷在0.030～0.971mg·ml-1范围内,线性关系良好，r＝1.0000,平均回收率是97.74％,rsd是2.76％(n＝9)；甘草酸铵在0.013～0.220mg·ml-1范围内,线性关系良好,r＝1.0000,平均回收率是99.02％,rsd是1.79％(n＝9)。结论:该法专属性强,简便,准确,可作为控制芩珠凉血合剂的方法。文献已报道了芩珠凉血合剂中的黄芩苷、甘草酸等含量的测定方法，但尚未见报道同时测定该方剂中多组分含量的文献。
3、目前芩珠凉血合剂的整体质量控制仍比较局限，有关于芩珠凉血合剂的研究多为其临床运用而进行的疗效观察及对照研究，极少建立对该方成分分析及含量测定的方法。一方面，方剂在其加工过程中，采用不同的提取工艺或制备方法，均会导致活性成分的种类和含量的不同。另一方面，中药制剂成分复杂、质量难度控制大，以单组分含量测定来控制其质量也难以表征整体质量水平。故现有的研究并不足以作为衡量芩珠凉血合剂质量的依据，对中药制剂中有效成分的多指标质量控制甚至是全成分的分析显得尤为重要。
4、关于本发明一种芩珠凉血合剂中指标性成分的高效液相色谱检测方法目前还未见报道。
技术实现思路
1、本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种芩珠凉血合剂中指标性成分的高效液相色谱检测方法。
2、本发明的第一方面，一种芩珠凉血合剂中指标性成分的高效液相色谱检测方法，所述方法包括如下步骤：步骤a，供试品溶液的制备：精密量取芩珠凉血合剂50ml，加入等体积水饱和正丁醇萃取2次，合并上层萃取液，减压浓缩干燥，加入有机溶剂溶解，超声10min后转移至5ml容量瓶定容，用0.45μm有机相微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；步骤b，对照品溶液的制备：精密称取甘草苷、升麻素、5-o-甲基维斯阿米醇苷、甘草素、黄芩苷、对羟基苯甲酸乙酯、丹皮酚、黄芩素及汉黄芩素对照品适量，加入有机溶剂溶解，使其配成混合对照品溶液；步骤c，检测：采用高效液相色谱法，以磷酸水(a)-甲醇溶液(b)为流动相梯度洗脱。
3、优选地，所述的步骤a、b所述有机溶剂选择甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷中的任意一种或几种，优选为甲醇溶液。
4、优选地，所述步骤b对照品溶液中甘草苷、升麻素、5-o-甲基维斯阿米醇苷、甘草素、黄芩苷、对羟基苯甲酸乙酯、丹皮酚、黄芩素及汉黄芩素浓度分别为0.17、0.13、0.09、0.24、0.16、0.14、0.26、0.18及0.22mg/ml。
5、优选地，所述的梯度洗脱程序为：
6、
7、优选地，所述的色谱柱为安捷伦zorbax elipsexdb-c18。
8、优选地，所述的洗脱流速：1000ml/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：10μl。
9、本发明优点在于：
10、本发明以芩珠凉血合剂中甘草苷、升麻素、5-o-甲基维斯阿米醇苷、甘草素、黄芩苷、对羟基苯甲酸乙酯、丹皮酚、黄芩素及汉黄芩素等多成分为指标，通过提取与分离，建立了一种高效液相色谱法同时测定以上9种成分含量的方法，经方法学考察，验证了本方法简便、快速、准确，具有良好的精密性、稳定性及重复性，为芩珠凉血的多指标质量控制提供了科学依据。
1.一种芩珠凉血合剂中指标性成分的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤a，供试品溶液的制备：精密量取芩珠凉血合剂50ml，加入等体积水饱和正丁醇萃取2次，合并上层萃取液，减压浓缩干燥，加入有机溶剂溶解，超声10min后转移至5ml容量瓶定容，用0.45μm有机相微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；步骤b，对照品溶液的制备：精密称取甘草苷、升麻素、5-o-甲基维斯阿米醇苷、甘草素、黄芩苷、对羟基苯甲酸乙酯、丹皮酚、黄芩素及汉黄芩素对照品适量，加入有机溶剂溶解，使其配成混合对照品溶液；步骤c，检测：采用高效液相色谱法，以磷酸水(a)-甲醇溶液(b)为流动相梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a、b所述有机溶剂选择甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、三氯甲烷中的任意一种或几种，优选为甲醇溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤b对照品溶液中甘草苷、升麻素、5-o-甲基维斯阿米醇苷、甘草素、黄芩苷、对羟基苯甲酸乙酯、丹皮酚、黄芩素及汉黄芩素浓度分别为0.17、0.13、0.09、0.24、0.16、0.14、0.26、0.18及0.22mg/ml。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的梯度洗脱程序为：
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的色谱柱为安捷伦zorbaxelipsexdb-c18。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的洗脱流速：1000ml/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：10μl。