一种益肾泄浊合剂HPLC指纹图谱质量控制方法与流程

本发明属于中药质量控制的检测，具体涉及益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法

背景技术：

1、益肾泄浊合剂(葆肾3号方)处方是无锡市中医医院无锡市名中医马济佩主任临床实践总结出的治疗慢性肾衰的经验方，由黄芪，酒萸肉，紫苏叶，法半夏，黄连，薏苡仁，熟大黄，燀桃仁，积雪草9味中药组成，具有健脾益肾，和络泄浊功效，临床用于慢性肾衰竭(慢性肾脏病期)，应用于临床多年，临床研究及动物药效实验表明其疗效显著，无不良反应。但目前尚无制剂批准文号，因此，进行其医疗机构制剂申报、创新中药研究的药学研究，包括配制工艺、质量控制等研究非常必要。中药指纹图谱是一种综合的、可量化的质量控制方法，能很好的反映中药的整体质量，广泛应用于中药质量控制。为更好的对益肾泄浊合剂进行质量控制，本发明建立hplc指纹图谱质量控制方法，对益肾泄浊合剂的内在质量进行控制。

技术实现思路

1、发明目的：本发明需要解决的技术问题是提供一种益肾泄浊合剂的hplc指纹图谱质量控制方法，以提供一种综合的、可量化的益肾泄浊合剂的质量控制方法，更好地提升益肾泄浊合剂的产品质量，并提高其临床应用效果。

2、技术方案：为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

3、一种益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，包括如下步骤：

4、(1)益肾泄浊合剂供试品溶液的制备：

5、吸取益肾泄浊合剂置于容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，称定，超声，放冷再称定，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

6、(2)对照品溶液的制备：

7、称取没食子酸、莫诺苷、马钱苷、毛蕊异黄酮苷和大黄酸对照品，置于容量瓶中，加体积分数为70％的甲醇溶液稀释至刻度，超声，放冷后用体积分数为70％的甲醇溶液定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得对照品溶液；

8、(3)利用高效液相色谱法检测对步骤(1)中供试品溶液和步骤(2)中对照品溶液进行高效液相色谱检测；

9、(4)根据步骤(3)所采集的不同批次益肾泄浊合剂供试品溶液的指纹图谱，导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》软件，得到益肾泄浊合剂的色谱图中的共有峰以及hplc对照指纹图谱；

10、(5)取益肾泄浊合剂待测样品，按照步骤(1)～(3)的方法得到hplc指纹图谱，导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》软件，以步骤(4)得到的hplc对照指纹图谱为参照进行相似度评价，若相似度大于0.9，则益肾泄浊合剂待测样品为合格品。

11、步骤(1)中，吸取益肾泄浊合剂1.5ml置于10ml容量瓶中。

12、步骤(1)和(2)中，所述的超声，其超声条件如下：100w，40khz，10min。

13、步骤(2)中，所述对照品溶液中各组分的含量如下：

14、没食子酸49.6μg/ml、莫诺苷77.2μg/ml、马钱苷48.8μg/ml、毛蕊异黄酮苷19.6μg/1ml、大黄酸24.8μg/ml。

15、步骤(1)和(2)中，所述的微孔滤膜为0.22μm微孔滤膜。

16、步骤(3)中，所述高效液相色谱的检测方法如下：利用高效液相色谱仪检测，检测仪器为dad二极管阵列检测器，检测波长为254nm，柱温：30℃，流动相a为：乙腈，流动相b为：0.1％磷酸水，流速：1.0ml·min-1；分析时间为100min；梯度洗脱；

17、所述的梯度洗脱，其洗脱程序如下：

18、0～10min，2％～4％a；10～15min，4％～6％a；15～20min，6％～7％a；20～22min，7％～10％a；22～32min，10％a；32～40min，10％～13％a；40～50min，13％a；50～90min，13～52％a；90～95min，52％a；95～100min，52％a～2％a。

19、步骤(4)中，所述hplc对照指纹图谱包括19个共有峰，以16号峰为参比峰，相对保留时间为1.000，其他18个共有峰的相对保留时间分别为1号峰0.151±0.001、2号峰0.170±0.001、3号峰0.205±0.002、4号峰0.230±0.002、5号峰0.314±0.001、6号峰0.375±0.001、7号峰0.467±0.002、8号峰0.475±0.003、9号峰0.694±0.001、10号峰0.887±0.001、11号峰0.936±0.001、12号峰0.948±0.001、13号峰0.971±0.001、14号峰0.976±0.001、15号峰0.993±0.000、17号峰1.007±0.001、18号峰1.016±0.001、19号峰1.192±0.003。

20、其中，所述6号峰是莫诺苷，所述8号峰是马钱苷，所述19号峰是大黄酸。

21、有益效果：

22、1.本发明公开了一种益肾泄浊合剂的hplc指纹图谱质量控制方法，本发明根据益肾泄浊合剂中化学成分的结构特点，通过充分的实验筛选最佳检测波长、流动相、流动相梯度洗脱程序、柱温等色谱分析条件，经实验验证，本发明建立的益肾泄浊合剂的hplc指纹图谱质量控制方法，可以全面、客观、准确的评价和控制益肾泄浊合剂的质量，为保证其临床疗效和安全性具有积极意义。

23、2.本发明建立的益肾泄浊合剂的hplc指纹图谱，能够充分有效表征益肾泄浊合剂内在质量，客观反映益肾泄浊合剂的内在成分(指纹特征峰)的前后顺序和相互间的关系，可避免采用单一或几个成分辨别益肾泄浊合剂质量的片面性，规避人为添加个别成分来达到质量合格的可能性。

24、3.本发明建立的益肾泄浊合剂的hplc指纹图谱质量控制方法，可以同时检测益肾泄浊合剂中5个成分的含量，其方法具有简便、精密度好、稳定性佳等特点。

技术特征：

1.一种益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，步骤（1）中，吸取益肾泄浊合剂1.5ml置于10ml容量瓶中。

3.根据权利要求1所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，步骤（1）和（2）中，所述的超声，其超声条件如下：100 w，40khz，10 min。

4.根据权利要求1所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，步骤（2）中，所述对照品溶液中各组分的含量如下：

5.根据权利要求1所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，步骤（1）和（2）中，所述的微孔滤膜为0.22 μm微孔滤膜。

6. 根据权利要求1所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，步骤（3）中，所述高效液相色谱的检测方法如下：利用高效液相色谱仪检测，检测仪器为dad二极管阵列检测器，检测波长为254 nm，柱温：30℃，流动相a为：乙腈，流动相b为：0.1%磷酸水，流速：1.0 ml·min-1；分析时间为100 min；梯度洗脱。

7. 根据权利要求1所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于， 所述的梯度洗脱，其洗脱程序如下：

8. 根据权利要求1所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，步骤（4）中， 所述hplc对照指纹图谱包括19个共有峰，以16号峰为参比峰，相对保留时间为1.000，其他18个共有峰的相对保留时间分别为1号峰0.151±0.001、2号峰0.170±0.001、3号峰0.205±0.002、4号峰0.230±0.002、5号峰0.314±0.001、6号峰0.375±0.001、7号峰0.467±0.002、8号峰0.475±0.003、9号峰0.694±0.001、10号峰0.887±0.001、11号峰0.936±0.001、12号峰0.948±0.001、13号峰0.971±0.001、14号峰0.976±0.001、15号峰0.993±0.000、17号峰1.007±0.001、18号峰1.016±0.001、19号峰1.192±0.003。

9.根据权利要求8所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，所述6号峰是莫诺苷，所述8号峰是马钱苷，所述19号峰是大黄酸。

10.根据权利要求1所述的益肾泄浊合剂hplc指纹图谱质量控制方法，其特征在于，步骤（5）中，若相似度大于0.9，则益肾泄浊合剂待测样品为合格品。

技术总结
本发明公开了一种益肾泄浊合剂HPLC指纹图谱质量控制方法，包括供试品溶液的制备、HPLC色谱条件及指纹图谱的建立。本发明对不同批次益肾泄浊合剂的色谱峰进行计算机相似度评价，得到不同批次药物的共有峰，并生成HPLC对照指纹图谱，通过与HPLC对照指纹图谱中共有峰及相似度比较，可对益肾泄浊合剂的质量进行全面、快速评价，并对处方中各单味药材色谱峰进行了归属确认，可从原料源头溯源制剂的物质基础，保证制剂质量。进一步对益肾泄浊合剂5个化学成分进行了定量分析，确保制剂质量的稳定性和均一性。

技术研发人员：卞振华,袁晓航,胡敏敏,陈晓伟,张文明,唐静月,杨庆有
受保护的技术使用者：无锡市中医医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15