一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂的制作方法

本发明涉及免疫检验，特别涉及一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂。

背景技术：

1、抗原与抗体间的亲和力使二者可进行特异性结合，免疫检测技术的基本原理即根据抗原、抗体结合形成免疫复合结构后的现象及性状特点，对样本中的待测物进行定性、定位或定量的检测。近年来由于其特异性高、快速、易标准化操作等优势在生物医学、食品检测及环境监测等领域得以快速发展。在侧向免疫层析、胶乳增强比浊、化学发光等当下主流的免疫诊断技术中，微球均有极广泛的应用场景。对免疫反应中作为标记物或载体的微球进行抗体偶联修饰，在抗原-抗体特异性反应后，按照不同方法学可对待测物进行分析，实现定性定量检测。不同的免疫检测方法中，抗体偶联的微球复合物通常被认为是能影响检测灵敏度、重复性、稳定性等性能的关键因素之一，而抗体偶联微球复合物多余反应位点的封闭是提升微球复合物甚至检测结果性能的重要步骤，抗体偶联微球复合物多余反应位点的封闭是现在影响检测结果性能的重要因素。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的问题，本发明提供一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂，来减少免疫反应过程中的非特异性干扰，提升检测技术的灵敏度、重复性、稳定性极具现实意义。

2、一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂，包括如下重量百分数计的封闭液原料：70％-90％的缓冲液、10％-30％的稳定剂、0.01％-5％的表面活性剂和0.1％-0.5％的防腐剂。

3、优选的，所述缓冲液选自pb缓冲液、tris-盐酸中的一种或多种；所述pb缓冲液原料包括纯化水、十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠、氯化钠，发明人发现在pb缓冲液中，磷酸盐起着缓冲作用，用以维持一定的ph环境和调节渗透压的作用，其主要作用为维持稳定的ph、维持渗透压及短时间提供基础营养，可以在短期内维持蛋白、细胞、组织、器官等有生物活性的产品活性，提供必要的营养环境。

4、优选的，所述稳定剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、和凝胶中的一种或多种，其中牛血清蛋白的封闭原理是固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，或抗原/抗体的固定板上，蛋白以机械填补或吸附的方式结合表面，封闭液中的蛋白可以与表面上的空白位置结合，同样以机械填补(堆积)和吸附覆盖的方式结合在膜上，因为有“填补”和“覆盖”蛋白结合位点以避免一抗的非特异结合，所以有“封闭”的说法。牛血清蛋白由于其可以与抗体偶联微球复合物之后的表面上的空白位点结合，降低抗体偶联胶乳微球之后的非特异性吸附，提高试剂的检测灵敏度；酪蛋白作为一种天然的蛋白质，具有良好的生物相容性和生物可降解性，因此在医学等领域中被广泛应用，酪蛋白能够封闭其他物质，形成稳定的复合物。但酪蛋白封闭原理的实现需要满足一定的条件，例如合适的ph值、温度和离子强度等，在这些条件下，酪蛋白可以与其他物质形成复合物，从而实现封闭作用，且酪蛋白不易溶解，配制较为困难，不是作为蛋白质的最佳选择；是高纯度猪真皮胶原蛋白多肽片段的水溶液，易溶于水、电解质溶液等，常用于惰性蛋白质稳定剂、细胞培养基的添加剂和免疫分析的稀释剂，且纯度高、无毒、无抗原性、热稳定性好，可与牛血清白蛋白混合使用，以增强封闭效果；凝胶是一定浓度的高分子溶液或溶胶，在适当条件下，粘度逐渐增大，最后失去流动性，整个体系变成一种外观均匀，并保持一定形态的弹性半固体，凝胶和其他液体共混时要严格控制温度，调整配方，加入防老剂阻止凝胶生成，没有控制好容易使凝胶失去流动性，会使溶液中其他溶质分散不良。所以排除此物质作为蛋白质。

5、所以选择牛血清蛋白不仅更容易控制封闭条件，配制过程更简便，而且有保护蛋白活性并稳定其构象的作用，从而减缓信号衰减的趋势。综合来看，选择牛血清蛋白效果最好。

6、优选的，所述表面活性剂选自吐温-20、吐温-80、曲拉通x100、chaps中的一种或多种。表面活性剂是具有疏水基团和亲水基团的化合物。表面活性剂可通过桥联机理使胶体产生凝集，进而对胶乳微球的封闭起到一定的促进作用。本发明选择表面活性剂chaps作为封闭剂的其中一种组分。

7、优选的，所述防腐剂选自1，2-己二醇、对羟基苯乙酮、叠氮化钠和proclin300的一种或多种，其中1，2-己二醇因其良好的溶解性、无腐蚀性和抗菌等性能，被用于医药等行业，添加量在5％左右时，具有防腐效果，但这种成分的抑菌效果较为消极，对开封使用期间是否被污染较无法掌握，对于其产品开封后的保存，其抑菌效果无法与真正防腐剂比拟，所以排除此物质作为防腐剂。对羟基苯乙酮无致癌性、无刺激性，具有抗菌防腐性更强、安全性更高等优点，但目前对羟基苯乙酮的获得途径不理想：一种工艺生产成本低但副产物产生量大；另一种工艺生产虽然产品纯度高但成本也高，从性价比方面来看，本物质不适合作为防腐剂；叠氮化钠具有优良的防腐杀菌性能，但叠氮化钠对眼和皮肤有刺激性，如吸入、口服或经皮肤吸收，可引起中毒死亡。而且使用特别危险：受热、接触明火、或受到摩擦、震动、撞击时可发生爆炸。由于本物质太危险，也不适合选择其作为防腐剂；proclin300防腐剂是一种高效抑菌剂，常用于体外诊断各种试剂、质控品、校准品和缓冲液等产品中，对微生物具有高效抑菌作用。以其广谱抗菌活性、优越的兼容性和稳定性及其在使用浓度下的低毒性，在推荐使用浓度内无害健康，且适用ph范围广，水溶性好；proclin300防腐剂可在更长的时间内抑制细菌、真菌及酵母生长，从而延长产品的保质期，特别是，proclin300防腐剂对大多数的酶或抗体交联反应的功能无影响，不影响吸光度的变化，所以不会干扰检测指标。所以本物质适合作为本发明的防腐剂。

8、综上，防腐剂选择proclin300最合适，具有性价比高优良的防腐抑菌性能、使用较安全等优点。因此最终选择的封闭剂的各组分为：纯化水、十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠、氯化钠、牛血清白蛋白、chaps、proclin300。

9、采用本发明的技术方案，具有以下有益效果：

10、本发明提供了一种应用于抗体偶联微球复合物，能降低免疫检测试剂的非特异性吸附，能够改善检测的灵敏度、重复性、稳定性，提高检测试剂性能，添加的稳定剂主要作为封闭剂起到稳定其构象的作用，从而减缓信号衰减的趋势；采用pb缓冲液不仅具有良好缓冲作用，还具有很好的盐平衡能力，可以起到调节渗透压的作用，还能在短期内维持试剂中抗体的活性，极大程度上提高试剂的稳定性，将上述封闭剂用于抗体偶联微球复合物的封闭，可获得良好的稳定性。

技术特征：

1.一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，包括如下重量百分数计的封闭液原料：70％-90％的缓冲液、10％-30％的稳定剂、0.01％-5％的表面活性剂和0.1％-0.5％的防腐剂。

2.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述缓冲液选自pb缓冲液、tris-盐酸中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述pb缓冲液原料包括纯化水、十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠、氯化钠。

4.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述稳定剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、和凝胶中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述表面活性剂选自吐温-20、吐温-80、曲拉通x100、chaps中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的抗体偶联的微球复合物的封闭剂，其特征在于，所述防腐剂选自1，2-己二醇、对羟基苯乙酮、叠氮化钠和proclin300的一种或多种。

技术总结
本发明公开一种抗体偶联的微球复合物的封闭剂，包括如下重量百分数计的封闭液原料：70％‑90％的缓冲液、10％‑30％的稳定剂、0.01％‑5％的表面活性剂和0.1％‑0.5％的防腐剂。本发明提供了一种应用于抗体偶联微球复合物，能降低免疫检测试剂的非特异性吸附，能够改善检测的灵敏度、重复性、稳定性，提高检测试剂性能，添加的稳定剂主要作为封闭剂起到稳定其构象的作用，从而减缓信号衰减的趋势；采用PB缓冲液不仅具有良好缓冲作用，还具有很好的盐平衡能力，可以起到调节渗透压的作用，还能在短期内维持试剂中抗体的活性，极大程度上提高试剂的稳定性，将上述封闭剂用于抗体偶联微球复合物的封闭，可获得良好的稳定性。

技术研发人员：钟何,郑焕巍,王晋琦
受保护的技术使用者：深圳市博卡生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15