一种测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留量的方法与流程

本发明涉及污染物残留检测，特别涉及一种测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法。

背景技术：

1、真菌毒素是产毒丝状真菌产生的有毒次生代谢产物，具有致癌、致畸和致突变、细胞毒性及肝毒性、神经毒性等危害。由于温度、气候的影响，蔬菜、水果等作物在收获、储存、加工、运输过程容易受到真菌毒素的污染，积累在果蔬制品中的真菌毒素不仅造成严重的经济损失，且会经食物链对人类健康造成极大威胁。核桃仁、花生仁、葡萄干等坚果仁和干制水果混合搭配而成的休闲食品广受消费者青睐，但是干制水果的含水量较高，富含油脂和糖分，加快受潮霉变的速度，产生的真菌毒素种类繁多且协同共生，因此建立一种快速可靠的检测方法用于果蔬及制品中多种真菌毒素的测定具有重要意义。

2、目前，应用于多种真菌毒素的检测方法以高效液相色谱-串联质谱法(lc-ms/ms)为主流方法。lc-ms/ms法具有选择性好、灵敏度高、二级质谱可有效排除假阳性等优势被广泛应用于谷物及其制品、中草药与食用油基质中真菌毒素的分析，这些分析方法的样品前处理采用了液液萃取法，固相萃取法和quechers法等，而液液萃取法与固相萃取法操作步骤繁琐，耗时较长，不适合批量样品的检测，quechers法步骤较简单，但需要选择合适的吸附剂，不同的吸附剂材料分析净化的待测物不同，不适用于多种真菌毒素的同时测定。

3、因此，现有技术还有待于改进和发展。

技术实现思路

1、鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，旨在解决现有技术不能精准、高效的同时测定果蔬制品中多种真菌毒素的问题。

2、本发明的技术方案如下：

3、一种测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其中，包括步骤：

4、将固态或半固态果蔬制品置于离心管中并加入乙腈-水-乙酸溶液，依次进行涡旋振荡、超声处理、离心处理后，吸取第一次上清液；或者将液态果蔬制品进行超声脱气处理后置于离心管中并加入乙腈-乙酸溶液，依次进行涡旋振荡、离心处理后，吸取第一次上清液；

5、将所述第一次上清液与超纯水混合稀释后再进行离心处理，吸取第二次上清液；

6、将所述第二次上清液加入含有13c标记的真菌毒素同位素内标混合液的内插管中，混匀后采用uplc-ms/ms方法测定待测果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留，所述多种真菌毒素污染物残留包括：黄曲霉毒素b1、黄曲霉毒素b2、黄曲霉毒素g1、黄曲霉毒素g2、赭曲霉毒素a、t-2毒素、ht-2毒素以及展青霉素。

7、所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其中，所述乙腈-水-乙酸溶液中，乙腈、水和乙酸的体积比为：84:15:1。

8、所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其中，所述乙腈-乙酸溶液中，乙腈和乙酸的体积比为99:1。

9、所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其中，所述13c标记的真菌毒素同位素内标混合液包括：13c-黄曲霉毒素b1、13c-黄曲霉毒素b2、13c-黄曲霉毒素g1、13c-黄曲霉毒素g2、13c-赭曲霉毒素a、13c-t-2毒素、13c-ht-2毒素以及13c-展青霉素。

10、所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其中，测定黄曲霉毒素b1、黄曲霉毒素b2、黄曲霉毒素g1、黄曲霉毒素g2、赭曲霉毒素a、t-2毒素和ht-2毒素所用的色谱柱为waters beh c18色谱柱，其流动相中a为1mmol/l乙酸铵溶液，b为甲醇，柱温40℃；测定；测定展青霉素所用色谱柱为waters beh c18色谱柱，其流动相中a为超纯水，b为乙腈，柱温40℃。

11、所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其中，所述uplc-ms/ms方法中采用的电离源为电喷雾离子源，电离方式包括：正离子模式，毛细管电压为3.0kv,负离子模式，毛细管电压为2.5kv；离子源温度为150℃，脱溶剂气温度为500℃脱溶剂气流量为800l/h；锥孔反吹气流量为50l/h；碰撞气流量为0.15ml/min；检测方式为多离子反应监测。

12、有益效果：本发明采用酸化乙腈提取样品，试验过程中优化了提取剂的种类、乙腈与水的比例及仪器条件等影响方法灵敏度的因素，考察了基质效应和提取效率；本发明采用基质稀释法，结合稳定同位素内标定量，建立了超高效液相色谱-串联质谱法(uplc-ms/ms)准确测定果蔬制品中8种真菌毒素含量的方法，该方法可校正基质效应、有效提高该方法的准确性和精密度，且该方法样品前处理步骤简便、经济实用，有助于提高食品中多真菌毒素的检测效率，适用于果蔬制品中多种真菌毒素的高通量快速测定，保障食品安全。

技术特征：

1.一种测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其特征在于，包括步骤：

2.根据权利要求1所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其特征在于，所述乙腈-水-乙酸溶液中，乙腈、水和乙酸的体积比为：84:15:1。

3.根据权利要求1所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其特征在于，所述乙腈-乙酸溶液中，乙腈和乙酸的体积比为99:1。

4.根据权利要求1所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其特征在于，所述13c标记的真菌毒素同位素内标混合液包括：13c-黄曲霉毒素b1、13c-黄曲霉毒素b2、13c-黄曲霉毒素g1、13c-黄曲霉毒素g2、13c-赭曲霉毒素a、13c-t-2毒素、13c-ht-2毒素以及13c-展青霉素。

5.根据权利要求1所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其特征在于，测定黄曲霉毒素b1、黄曲霉毒素b2、黄曲霉毒素g1、黄曲霉毒素g2、赭曲霉毒素a、t-2毒素和ht-2毒素所用的色谱柱为waters beh c18色谱柱，其流动相中a为1mmol/l乙酸铵溶液，b为甲醇，柱温40℃；测定；测定展青霉素所用色谱柱为waters beh c18色谱柱，其流动相中a为超纯水，b为乙腈，柱温40℃。

6.根据权利要求1所述测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留的方法，其特征在于，所述uplc-ms/ms方法中采用的电离源为电喷雾离子源，电离方式包括：正离子模式，毛细管电压为3.0kv,负离子模式，毛细管电压为2.5kv；离子源温度为150℃，脱溶剂气温度为500℃脱溶剂气流量为800l/h；锥孔反吹气流量为50l/h；碰撞气流量为0.15ml/min；检测方式为多离子反应监测。

技术总结
本发明公开了一种测定果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留量的方法，其包括步骤：将果蔬制品经乙腈‑水‑乙酸溶液或乙腈‑乙酸溶液提取后；将得到的第一次上清液与超纯水混合稀释后再进行离心处理，吸取第二次上清液；将第二次上清液加入含有<supgt;13</supgt;C标记的真菌毒素同位素内标混合液的内插管中，混匀后采用UPLC‑MS/MS方法测定待测果蔬制品中多种真菌毒素污染物残留。本发明采用基质稀释法，结合稳定同位素内标定量，建立了超高效液相色谱‑串联质谱法测定果蔬制品中8种真菌毒素含量的方法，该方法可校正基质效应、有效提高该方法的准确性和精密度，且该方法样品前处理步骤简便、经济实用，适用于果蔬制品中多种真菌毒素的高通量快速测定，保障食品安全。

技术研发人员：梁江,刘柏林,张磊,谢继安
受保护的技术使用者：国家食品安全风险评估中心
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14