含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法与流程

本发明属于食品检测，具体地说，尤其涉及一种含乳酸菌奶粉中维生素b3的检测方法。

背景技术：

1、维生素b3(niacin)又称维生素pp、尼克酸，有烟酸(nicotinic acid)和烟酰胺(nicotinamide)两种形式，它们的结构中都存在吡啶环，分别与羧基和甲酰胺基相结合。但通常人们把维生素b3也称作烟酸，这很容易造成混淆，因此在实际工作中应注意区分。烟酰胺是维生素b3最常用的强化形式，具有与烟酸相同的生理活性。正常情况下该类维生素很稳定。

2、维生素b3在食品中广泛存在，对维持人体皮肤、消化和神经系统正常功能起关键作用，对婴幼儿的生长和发育尤为重要，也是许多类别食品中的重要检测指标。

3、维生素b3的检测方法主要有比色法、微生物法和高效液相色谱法。gb 5009.89-2016《食品安全国家标准食品中烟酸和烟酰胺的测定》中规定了微生物法和高效液相色谱法，其中微生物法检测的是以烟酸为维生素b3当量的烟酸和烟酰胺的总和，但因操作步骤复杂、精密度差、效率低，应用较为局限；而高效液相色谱法分别检测烟酸和烟酰胺的含量，再折算成以烟酸表示的维生素b3总量，这种方法操作步骤简便、精密度高、效率高，通常被实验室作为首选检测方法。

4、需要检测维生素b3的食品类别有很多，有些食品既强化了维生素b3，又强化了乳酸菌，比如婴幼儿配方食品、调制乳粉等。因此针对不同基质的食品在检测维生素b3的方法也存在一定差异，标准检测方法可能并不适用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种含乳酸菌奶粉中维生素b3的检测方法，以弥补现有技术的不足。

2、为达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

3、一种含乳酸菌奶粉中维生素b3的检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

4、(1)样品预处理得到试样溶液；

5、(2)调节试样溶液ph至1.7±0.1，静置后，再将其ph调至4.5±0.1，再进行烟酸/烟酰胺的充分提取，得到试样测定液；

6、(3)将试样测定液进行hplc检测。

7、进一步的，所述步骤(1)中，取混合均匀固体试样加水混合均匀，再进行超声波振荡以充分溶解，静置并冷却至室温，得到试样溶液。

8、更进一步的，所述步骤(1)具体为：称取混合均匀固体试样约5.0g，加入25ml45℃～50℃的水混合均匀，称取混合均匀液体试样约20.0g于150ml锥形瓶中，置于超声波振荡器中振荡约10min以上充分溶解，静置5min～10min，并冷却至室温，得到试样溶液。

9、进一步的，所述步骤(2)中，调节试样溶液ph至1.7±0.1，放置后，再调节试样溶液的ph至4.5±0.1，再进行充分提取，冷却、过滤后，即为试样测定液。

10、更进一步的，所述步骤(2)中，所述步骤(2)具体为：使用5.0mol/l盐酸溶液和0.1mol/l盐酸溶液调节样品溶液ph至1.7±0.1，放置约2min后，再用5.0mol/l氢氧化钠溶液和0.1mol/l氢氧化钠溶液调节试样溶液的ph至4.5±0.1，置于50℃水浴超声波振荡器中振荡10min以上充分提取，冷却至室温后转至100ml容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于100ml容量瓶中，用水定容至刻度后混匀，经滤纸过滤；滤液再经0.45μm微孔滤膜加压过滤，用样品瓶收集，即为试样测定液。

11、进一步的，所述步骤(3)中：色谱条件：色谱柱：c18色谱柱；柱温：25℃±0.5℃；dad检测器：检测波长为261nm；流动相：甲醇70ml、异丙醇20ml、庚烷磺酸钠溶液：1g庚烷磺酸钠，加入910ml水溶解并混匀；用高氯酸调ph至2.1±0.1，经0.45μm有机微孔滤膜过滤；流速：1.0ml/min；进样量：20μl。

12、与现有技术相比，本发明的优点和有益效果是：

13、本发明对应用gb 5009.89-2016高效液相色谱法检测含乳酸菌的奶粉中维生素b3含量时，烟酰胺转化为烟酸的问题进行了研究。本发明通过单因素试验分别考察了试样测定液静置时间、溶液酸水解前静置时间以及酸水解ph值对结果的影响。结果：烟酰胺向烟酸的转化发生在样品溶解后、酸水解之前的静置步骤，但调节ph值至标准规定的1.7进行酸水解以后，转化作用被完全抑制。结论：如果要检测含乳酸菌样品中烟酸或烟酰胺的含量，需要在样品溶解时立即将ph值调整到1.7，以抑制烟酰胺向烟酸的转化。

14、本发明通过具体实验研究提出了一种含乳酸菌奶粉中维生素b3含量的检测方法，检测方法简单、测定结果精度高，为国标检测方法提供了补充。

技术特征：

1.一种含乳酸菌奶粉中维生素b3的检测方法，其特征在于，该检测方法包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）中，取混合均匀固体试样加水混合均匀，再进行超声波振荡以充分溶解，静置并冷却至室温，得到试样溶液。

3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（1）具体为：称取混合均匀固体试样，加入45℃~50℃的水混合均匀，称取混合均匀液体试样，置于超声波振荡器中振荡约充分溶解，静置，并冷却至室温，得到试样溶液。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中，调节试样溶液ph至1.7±0.1，放置后，再调节试样溶液的ph至4.5±0.1，再进行充分提取，冷却、过滤后，即为试样测定液。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中，所述步骤（2）具体为：使用5.0mol/l 盐酸溶液和0.1mol/l 盐酸溶液调节样品溶液ph至1.7±0.1，放置约2min后，再用5.0mol/l氢氧化钠溶液和0.1mol/l氢氧化钠溶液调节试样溶液的ph至4.5±0.1，置于50℃水浴超声波振荡器中振荡10min以上充分提取，冷却至室温后转至100ml容量瓶中，用水反复冲洗锥形瓶，洗液合并于100ml容量瓶中，用水定容至刻度后混匀，经滤纸过滤；滤液再经0.45μm 微孔滤膜加压过滤，用样品瓶收集，即为试样测定液。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（3）中：色谱条件：色谱柱：c18色谱柱；柱温：25℃±0.5℃；dad检测器：检测波长为261nm；流动相：甲醇70ml、异丙醇20ml、庚烷磺酸钠溶液：1g庚烷磺酸钠，加入 910ml水溶解并混匀；用高氯酸调ph至2.1±0.1，经0.45μm有机微孔滤膜过滤；流速：1.0ml/min；进样量：20μl。

技术总结
本发明公开了一种含乳酸菌奶粉中维生素B3的检测方法，该检测方法包括：样品预处理得到试样溶液；调节试样溶液pH至1.7±0.1，静置后，再将其pH调至4.5±0.1，再进行烟酸/烟酰胺的充分提取，得到试样测定液；将试样测定液进行HPLC检测。本发明通过具体实验研究提出了一种含乳酸菌奶粉中维生素B3含量的检测方法，检测方法简单、测定结果精度高，为国标检测方法提供了补充。

技术研发人员：张凤艳,姜勇,袁焕君,张豪,张磊,赵丹,杨姗姗,英瑜
受保护的技术使用者：青岛市食品药品检验研究院(青岛市药品不良反应监测中心、青岛市实验动物和动物实验中心)
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15