一种胰腺癌早期诊断标志物JAM-A及在抗癌药物中的应用

本发明涉及肿瘤分子生物学和药物，具体涉及一种癌症早期标记物、用途、连接黏附分子jama的抗体、小分子抑制物和载体在恶性肿瘤等疾病早期诊断与治疗的应用。

背景技术：

1、在临床实践中，晚期癌症的恶行程度高和高转移性，导致现有的治疗策略效果不佳，对总体生存影响很小。实现早期肿瘤诊断精确，及时手术切除或药物治疗都需要近一步探寻新的生物标记物，并针对该靶点开发新的恶行肿瘤等疾病治疗手段。胰腺癌被称作“癌症之王”,主要是因为全球癌症发生率排名前十的胰腺癌高死亡率，发现时间晚，多种治疗效果不佳。探寻更多的癌症早期的诊断标记物，提高早期的筛查的准确率以降低胰腺癌的死亡率。

2、连接黏附分子(jams)属于免疫球蛋白超家族(igsf)。jams是一类单次跨膜的i型糖蛋白，细胞膜外具有2个ig样结构域，远端v-型ig结构域(d1)和近端的c2型ig-结构域(d2)，单次跨膜结构域和细胞内一个含有pdz结合结构域和磷酸化位点的c-末端。jams为连接黏附蛋白，在多种内皮细胞和上皮细胞的细胞膜上表达，主要生物学功能是形成紧密连接(tj)，维持细胞极性，并实现细胞间屏障功能。

3、jama不仅在上皮细胞中有表达，在t、b淋巴细胞、单核细胞、中心粒细胞等多种免疫细胞也有表达。jama也被称作f11受体(f11r),主要是因为jama作为单克隆抗体f11的受体激活人血小板。上皮组织中，jama主要作用仍是构成细胞连接，维护组织稳态。jama形成细胞间连接主要包括两个步骤。首先是同一细胞膜上的单体jama通过远端的第一个ig结构域(d1环)上的保守的r59v60e61e基序与相邻的jama单体相互作用形成顺式二聚体。然后，两个相邻细胞的细胞膜上的顺式二聚体通过d1环上rve基序另外一侧的n43n44p45基序介导的细胞间二聚体的反式同源相互作用，从而形成细胞间连接。顺式二聚体的形成是反式同源性相互作用的先决条件。研究表明，顺式二聚体缺失的jam-a突变体(jam-a/e61r_k63e)只扩散定位于细胞膜，但不会在细胞-细胞接触处富集。此外，细胞外第二个ig结构域上的n185位点的n-糖基化，不仅稳定了蛋白结构，还能促进反式同源性相互作用有效进行。胞质的pdz结构域的结合基序在jama发挥功能过程中起核心作用，通过与多种含有ii类pdz结构域的蛋白相互作用，调节细胞骨架，募集极性蛋白建立细胞极性，促进紧密连接形成。这些含pdz结构域的蛋白有支架蛋白zo、极性蛋白par3、afadin(af6)、mupp1、rapgef6/pdz-gef2等。jama蛋白胞质尾部的多个磷酸化位点参与细胞内信号传导(tyr280)和维持tj稳定(s284)。jama在两个非接触细胞开始接触时就定位于细胞连接处，并通过募集par3复合物和zo促进紧密连接形成，建立极性。jama不仅能调节tj形成，而且还参与了上皮-间质转化(emt)和多种上皮屏障功能丧失相关的病理过程。

4、jama在癌症发生发展中也发挥了重要的作用。研究表明，jama在胶质瘤、乳腺癌、肺癌、头颈部鳞状上皮癌、结肠癌和胰腺癌中均有表达。jama通过促进癌细胞增殖、迁移，维持肿瘤干细胞(cscs)的自我更新和调节细胞连接蛋白表达等多种方式，参与肿瘤发生发展。此外,jama还与癌症患者的预后不良、生存期差密切相关。总体来说，jama是能够作为一个促癌分子发挥功能。

技术实现思路

1、本发明的目的在于针对肿瘤早期诊断精准度低，提供一种新的癌症标记物用于提高早期癌症早期诊断准确性并阻滞肿瘤细胞恶化。本发明的另一目的是针对恶性肿瘤对多种治疗手段的抵抗性或耐受性导致治疗效果不佳，提供一种连接黏附分子jama抗体、小分子抑制物与恶性肿瘤治疗的组合，用以改善癌细胞恶性程度、抑制恶性肿瘤对治疗的抵抗性或耐受性，提高治疗效果。

2、为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

3、本发明的第一方面，提供了一种新型胰腺癌早期诊断标志物，用于提高肿瘤早期诊断效率，所述诊断标记物为连接黏附分子jama，所述癌症为胰腺癌。

4、进一步地，上述的新癌症标记物可用于多种类型癌症的早期诊断，所述癌症包括胶质瘤、乳腺癌、肺癌、结肠癌、膀胱癌等。

5、进一步地，上述的新癌症标记物的用途包括癌症早期诊断、癌症转移诊断、预后标记物和癌症治疗效果监测。

6、进一步地，本发明提供一种癌症标志物，所述癌症标志物为f11r基因的表达产物连接黏附分子jama。

7、进一步地，本发明提供一种连接黏附分子jama抗体、小分子抑制物在炎症向癌症转化过程中，监测肿瘤恶化程度并阻止其恶化向癌细胞转变。

8、本发明提供了一种jama的表达抑制剂，所述表达抑制剂是基于所述jama设计的sirna，能够促进癌细胞的死亡，抑制了癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性行为。

9、本发明提供了一种jama的过表达载体，所述表达载体是基于所述jama设计的真核生物表达载体，能够促进癌细胞的增殖，抑制细胞死亡。

10、进一步地，所述的恶性肿瘤包括但不仅限于胰腺导管腺癌、胃癌，以及炎症性疾病包括但不限于克罗恩病和溃疡性结肠炎。

11、本发明的优点在于，首先，jama作为新的癌症早期诊断标记物，提高癌症诊断标志物具有高特异性和高灵敏度。数据分析显示，相对于正常组织，jama在多种炎症和肿瘤中具有高水平的表达，能够作为早期分子诊断与患病风险筛查的理想靶点，有利于改善癌症诊断的及时性，提高癌症诊断的特异性。其次，本发明实验验证了jama与癌细胞增殖、迁移的相关性，用rnai技术干扰jama的表达后，癌细胞的增殖和迁移被抑制，而在过表达jama的癌细胞中，细胞的增殖能力增强。说明jama影响癌细胞的增殖、迁移，参与了癌症的发生、发展，jama能够作为胰腺癌的分子治疗靶点，为肿瘤的临床靶向治疗以及个体化治疗提供依据。最后，提供一种连接黏附分子jama抗体和小分子抑制物与肿瘤治疗方法结合的新思路，提高恶性肿瘤细胞对化疗和放疗的敏感性，有利于改善患者生存质量，提高患者生存率。

技术特征：

1.一种癌症标志物，其特征在于，所述癌症标志物为f11r基因的表达产物连接黏附分子jama。

2.根据权利要求1所述一种癌症标志物，其特征在于，所述癌症为胰腺癌。

3.一种jama基因的表达抑制剂，其特征在于，所述表达抑制剂包括基于所述jama设计的sirna。

4.一种jama表达载体，其特征在于，所述载体包括pcdna3.1-jama真核表达载体。

5.权利要求1所述癌症标志物的应用，其特征在于，连接黏附分子jama抗体和小分子抑制物在恶性肿瘤疾病早期诊断与靶向抑制jama阻止肿瘤恶化的临床治疗应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，在胰腺炎症、早期前体病变及癌组织中jama表达持续上调。

7.根据权利要求5所述应用，其特征在于，在胰腺炎症、早期前体病变及癌组织中jama表达定位于管状复合物细胞侧膜和顶端。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，jama高表达于多种癌细胞中，敲低jama后抑制了恶性肿瘤细胞的增殖、迁移恶性行为。

9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述癌症还包括膀胱癌、乳腺癌、肝外胆管癌、食道癌、头颈鳞状细胞癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、肝癌、肺腺癌、肺鳞状上皮细胞癌、胃癌、甲状腺癌和子宫内膜癌中的任意一种。

10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，炎症性疾病还包括胰腺炎、克罗恩病和溃疡性结肠炎。

技术总结
本发明公开了一种胰腺癌早期诊断标志物JAM‑A及在抗癌药物中的应用。恶性肿瘤癌细胞异常增殖和高迁移、侵袭的能力都可能导致患者肿瘤的恶性程度增加、预后更差以及生存率降低。如何阻止恶性程度低的肿瘤细胞或肿瘤早期病变的恶化，并实现早期精准诊断和治疗还需要更多新的生物标记物和治疗靶点。本申请中连接黏附分子JAMA在胰腺炎症组织、肿瘤早期前体病变和癌组织中相对于正常组织表达上调。本申请提供了JAMA对癌细胞的生物学功能的影响。敲低JAMA后能够使癌细胞的增殖和迁移减少，从而进一步减弱了癌细胞的恶行行为。JAMA能作为新的肿瘤生物标记物和预后标志物，为癌症的转移诊断、预后评估、治疗效果监测提供有效信息。

技术研发人员：谢克平,林国欢
受保护的技术使用者：华南理工大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15