一种硫酸软骨素的含量测定方法与流程

本发明涉及分析检测，具体涉及一种硫酸软骨素的含量测定方法。

背景技术：

1、硫酸软骨素(chondroitiulfate，cs)是由d-葡糖醛酸和n-乙酰氨基半乳糖以β-1,4-糖苷键连接而成的重复二糖单位组成的多糖，是一种具有天然活性的酸性粘多糖类物质，广泛的存在于动物的软骨和结缔组织中。cs具有调节血脂、抗肿瘤、抗衰老、治疗关节炎、防治冠心病等多种疗效，并且不良反应少。此外，cs被广泛应用于食品及化妆品中，还具有改善口感、润滑度、吸湿性等作用。因此，测定cs的含量对于保健食品和药品原料以及成品销售的品质控制具有非常重要的意义。

2、目前，测定cs含量的常用方法有分光光度法、高效液相法和电化学分析法等。其中，高效液相法主要是将多糖分解后进入色谱柱利用各组分间极性差异的性质进行分离后检测，该方法测定对象单一，无杂质干扰，灵敏度高，适用性广。

3、例如，中国专利cn107941963a公开了一种增加骨密度食品中硫酸软骨素的含量测定方法：将样品与乙腈振荡使其分散均匀，加入水超声溶解，补加水定容，乙腈-戊烷磺酸钠溶液作为流动相，进行高效液相色谱检测，其中，乙腈-戊烷磺酸钠溶液由0.87g戊烷磺酸钠溶解于500ml乙腈-水溶液(乙腈：水体积比＝5～10：95～90)得到，流动相比例为乙腈：戊烷磺酸钠溶液体积比＝4.75～5.25：95.25～94.75，乙腈-水溶液按照乙腈：水体积比为5～10：95～90的比例配制，硫酸软骨素钠的最低检测限为1.61ng，待测样品品中含有0.13％以上的硫酸软骨素钠才可检出，检测灵敏度不够高。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种硫酸软骨素的含量测定方法，本发明提供的方法能实现快硫酸软骨素的速准确测定，硫酸软骨素的检出限低，方法灵敏度高。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种硫酸软骨素的含量测定方法，包括以下步骤：

4、将待测样品与水混合，进行超声提取后第一离心分离，得到水提取液；

5、将所述水提取液进行微孔滤膜过滤，得到待测样品液；

6、将所述待测样品液进行高效液相色谱检测，根据得到的待测样品液谱图和预定的标准曲线得到硫酸软骨素含量检测结果，所述标准曲线为硫酸软骨素钠标准品的浓度与峰面积的标准曲线；

7、所述高效液相色谱检测的条件包括：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相体系包括流动相a和流动相b，所述流动相a为戊烷磺酸钠水溶液，所述流动相b为乙腈，所述流动相体系中流动相a的体积分数为2％。

8、优选的，所述待测样品包括奶粉和/或固体饮料；

9、所述待测样品与水的固液比为50.4mg：1ml。

10、优选的，所述超声提取的功率为250w，频率为50hz，时间为5min。

11、优选的，所述第一离心分离的转速为10000r/min，时间为10～15min。

12、优选的，所述微孔滤膜过滤包括：将所述水提取液置于微孔滤膜上，第二离心分离，将得到的上清液过0.2μm滤膜，得到待测样品液。

13、优选的，所述微孔滤膜的截流分子量为3000da。

14、优选的，所述第二离心分离的转速为10000r/min，时间为10～15min

15、优选的，所述超声提取和超声混合的功率独立地为250w，频率独立地为50hz，时间独立地为5min。

16、优选的，所述高效液相色谱检测的柱温为34～36℃，检测波长为192nm，进样量为10μl，流动相流速为0.8ml/min。

17、优选的，所述戊烷磺酸钠水溶液的浓度为1.71～1.74g/l。

18、本发明提供了一种硫酸软骨素的含量测定方法，本发明采用超声水提取和微孔滤膜过滤对样品进行前处理，除杂效果好，大大降低了基质效应，然后进行高效液相色谱检测，硫酸软骨素的峰形好且与其他杂质的分离度高，硫酸软骨素含量检测结果与样品中硫酸软骨素含量的偏差小，检测结果准确性高，检出限低，稳定性强，可以作为检测硫酸软骨素含量符合药典规定的有效方法。而且，本发明提供的检测方法操作简单，以水为提取剂，成本低，绿色环保。

技术特征：

1.一种硫酸软骨素的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述待测样品包括奶粉和/或固体饮料；

3.根据权利要求1或2所述的含量测定方法，其特征在于，所述超声提取的功率为250w，频率为50hz，时间为5min。

4.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述第一离心分离的转速为10000r/min，时间为10～15min。

5.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述微孔滤膜过滤包括：将所述水提取液置于微孔滤膜上，第二离心分离，将得到的上清液过0.2μm滤膜，得到待测样品液。

6.根据权利要求1或5所述的含量测定方法，其特征在于，所述微孔滤膜的截流分子量为3000da。

7.根据权利要求5所述的含量测定方法，其特征在于，所述第二离心分离的转速为10000r/min，时间为10～15min。

8.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的柱温为34～36℃，检测波长为192nm，进样量为10μl，流动相流速为0.8ml/min。

9.根据权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于，所述戊烷磺酸钠水溶液的浓度为1.71～1.74g/l。

技术总结
本发明提供了一种硫酸软骨素的含量测定方法，涉及分析检测技术领域。本发明提供了一种硫酸软骨素的含量测定方法，本发明采用超声水提取和微孔滤膜过滤对样品进行前处理，除杂效果好，大大降低了基质效应，然后进行高效液相色谱检测，硫酸软骨素的峰形好且与其他杂质的分离度高，硫酸软骨素含量检测结果与样品中硫酸软骨素含量的偏差小，检测结果准确性高，检出限低，灵敏度极好，稳定性强，可以作为检测硫酸软骨素含量符合药典规定的有效方法。而且，本发明提供的检测方法操作简单，以水为提取剂，成本低，绿色环保。

技术研发人员：高晓雪
受保护的技术使用者：北京姿美堂生物技术股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15