一种盐酸普萘洛尔中N-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法与流程

本发明涉及医药检测，更具体而言，涉及一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法。

背景技术：

1、盐酸普萘洛尔，也称心得安，于1964年在英国首次上市，之后在全球各国广泛上市，剂型涵盖速释片、缓释片、口服溶液、注射液，为第一代β受体阻滞剂，因其药效确切、副作用小、价格低廉，在临床使用较为广泛，属于otc药物，临床上主要用于高血压和心绞痛的治疗，也用于偏头痛、婴幼儿血管瘤的治疗。

2、自2018年6月从缬沙坦中检测n-亚硝基二甲胺以来，亚硝胺杂质一直是制药行业和全球监管机构关注的问题。国家药品监督管理局于2020年发布化学药物中亚硝胺类杂质研究技术指导原则（试行），要求应对可能的亚硝胺杂质进行研究。

3、n-亚硝基普萘洛尔杂质化学结构式如下所示：

4、。

5、盐酸普萘洛尔结构中含仲胺结构，在原料及制剂生产及贮藏过程中有可能产生微量的n-亚硝基普萘洛尔杂质，亚硝胺杂质属于关注队列致突变杂质，已被列为可能的人类致癌物，这类杂质的存在会极大地影响用药安全。2022年3月，辉瑞制药公司发布公告，因在盐酸普萘洛尔中检出n-亚硝基普萘洛尔杂质超限，召回多批次样品。因此，建立相应分析方法，对原料药及相关制剂的质量进行有效控制具有重要的意义。

6、按欧洲药品管理局（ema）要求，如果某种亚硝胺类杂质具体限值没有在ema指南中限定的话，应统一采取18ng/天的adi标准，按照盐酸普萘洛尔制剂的日最高服用剂量240mg计算，n-亚硝基普萘洛尔杂质控制限度应为0.075ppm。对检测方法灵敏度要求极高。

7、现有技术中常采用高效液相-质谱联用仪对盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔进行检测，流动相的选择对杂质分离有较大影响，当采用固定比例的流动相a和流动相b进行检测时，难以将杂质与主峰很好的分离，因此检测结果不明显。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一，为此，本发明的一个方面的目的在于，提供一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，所述检测方法具体步骤如下：

2、s1.制备供试品溶液：取盐酸普萘洛尔，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成供试品溶液；

3、s2.制备对照品溶液：取n-亚硝基普萘洛尔对照品，精密称定，加溶剂溶解并定量稀释制成对照品溶液；

4、s3.制备混合溶液：取盐酸普萘洛尔，精密称定，加溶剂溶解，精密加入n-亚硝基普萘洛尔对照品，加溶剂定量稀释制成混合溶液；

5、s4.调节仪器：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相a，流动相b，采用梯度洗脱，调节柱温，调节流动相流速；

6、s5.测定：精密量取s1至s3制备的各溶液，分别注入高效液相色谱-三重四级杆串联质谱仪进行测定。

7、优选的，所述s1中供试品溶液的浓度为40～60mg/ml，所述溶剂为50%甲醇。

8、优选的，所述s2中对照品溶液的浓度为3.0～4.5ng/ml，所述溶剂为50%甲醇。

9、优选的，所述s3中混合溶液中盐酸普萘洛尔的浓度为40～60mg/ml，n-亚硝基普萘洛尔对照品的浓度为3.0～4.5ng/ml，所述溶剂为50%甲醇。

10、优选的，所述s4中十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，规格为100mm×4.6mm，3.5μm。

11、优选的，所述s4中采用梯度洗脱，流动相的总体积为100%计，

12、在第0～1min，所述的流动相a的体积为75%，所述的流动相b的体积为25%；

13、在第1min～2min，所述的流动相a的体积由75%递减为40%，所述的流动相b的体积由25%递增为60%；

14、在第2min～6min，所述的流动相a的体积为40%，所述的流动相b的体积为60%；

15、在第6min～8min，所述的流动相a的体积由40%递减为5%，所述的流动相b的体积由60%递增为95%；

16、在第8min～12min，所述的流动相a的体积为5%，所述的流动相b的体积为95%；

17、在第12min～14min，所述的流动相a的体积为75%，所述的流动相b的体积为25%。

18、优选的，所述s4中流动相a是浓度为0.05%~0.15%的甲酸溶液，最优选为0.1%的甲酸溶液，流动相b是浓度为50%的甲醇。

19、优选的，所述s4中色谱柱为c18柱；柱温为25℃～35℃；流速为0.4ml/min～0.6ml/min；进样量为10μl。

20、优选的，所述s5中三重四级杆串联质谱仪测试条件包括：0 10分钟为流动相排废，其中电离模式为esi；离子源温度为100℃~200℃，最优选为150℃；离子源参数脱溶剂温度为300℃~450℃，最优选为350℃；离子源参数脱溶剂气流量：500l/hr~800l/hr，最优选为650l/hr；离子源参数毛细管电压为1.0kv~3.0kv，最优选为3.0kv；离子源参数锥孔电压为25v~50v，最优选为30v；离子源参数碰撞室进口电压/碰撞室出口电压为8v/5v。

21、优选的，所述s5中测定模式为多反应监测模式正离子模式（mrm）。

22、本发明所具有的有益效果如下：

23、本发明根据产品结构特点及化合物性质，提供了一种高灵敏度的测定盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法。采用梯度洗脱色谱条件，14分钟完成检测，大大缩短运行时间，可将杂质与主峰很好的分离，盐酸普萘洛尔及其他杂质均不会对n-亚硝基普萘洛尔造成干扰，检测灵敏度高。

24、本发明方法专属性好、准确度高，能够快速、准确、灵敏地判断药品中n—亚硝基杂质的量，降低药物安全风险。本发明检测方法便于对盐酸普萘洛尔的n-亚硝基普萘洛尔杂质监控，有利于盐酸普萘洛尔的安全推广与应用。

25、本发明的附加方面和优点将在下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

技术特征：

1.一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述检测方法具体步骤如下：

2.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s1中供试品溶液的浓度为40～60mg/ml，所述溶剂为50%甲醇。

3.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s2中对照品溶液的浓度为3.0～4.5ng/ml，所述溶剂为50%甲醇。

4.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s3中混合溶液中盐酸普萘洛尔的浓度为40～60mg/ml，n-亚硝基普萘洛尔对照品的浓度为3.0～4.5ng/ml，所述溶剂为50%甲醇。

5.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s4中十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，规格为100mm×4.6mm，3.5μm。

6.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s4中采用梯度洗脱，流动相的总体积为100%计，

7.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s4中流动相a是浓度为0.05%~0.15%的甲酸溶液，流动相b是浓度为50%的甲醇。

8.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s4中色谱柱为c18柱；柱温为25℃～35℃；流速为0.4ml/min～0.6ml/min；进样量为10μl。

9.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s5中三重四级杆串联质谱仪测试条件包括：0 10分钟为流动相排废，其中电离模式为esi；离子源温度为100℃~200℃；离子源参数脱溶剂温度为300℃~450℃；离子源参数脱溶剂气流量：500l/hr~800l/hr；离子源参数毛细管电压为1.0kv~3.0kv；离子源参数锥孔电压为25v~50v；离子源参数碰撞室进口电压/碰撞室出口电压为8v/5v。

10.根据权利要求1所述的一种盐酸普萘洛尔中n-亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法，其特征在于：所述s5中测定模式为多反应监测模式正离子模式。

技术总结
本发明涉及医药检测技术领域，更具体而言，涉及一种盐酸普萘洛尔中N‑亚硝基普萘洛尔杂质的检测方法。所述检测方法具体步骤如下：S1.制备供试品溶液；S2.制备对照品溶液；S3.制备混合溶液；S4.调节仪器：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A，流动相B，采用梯度洗脱，调节柱温，调节流动相流速；S5.测定：精密量取S1至S3制备的各溶液，分别注入高效液相色谱‑三重四级杆串联质谱仪进行测定。本发明方法专属性好、准确度高，能够快速、准确、灵敏地判断药品中N‑亚硝基普萘洛尔的量，降低药物安全风险。本发明检测方法便于对盐酸普萘洛尔的N‑亚硝基普萘洛尔杂质监控，有利于盐酸普萘洛尔的安全推广与应用。

技术研发人员：梁通达,马宪真
受保护的技术使用者：北京云鹏鹏程医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16